天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 科技論文 > 基因論文 >

馬鈴薯StSUT2基因干擾載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化

發(fā)布時間:2018-05-29 03:31

  本文選題:馬鈴薯 + RNA干擾; 參考:《蘭州理工大學(xué)》2017年碩士論文


【摘要】:馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)是世界公認(rèn)的主要糧食作物之一,它的塊莖不僅可以當(dāng)作糧食作物,而且還可以用于工業(yè)生產(chǎn)淀粉等。在植物光合作用產(chǎn)生的碳水化合物,通過韌皮部篩管向儲存庫器官運(yùn)輸并積累的過程中,起到主要作用的就是蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Sucrose transporter)。雙子葉植物中的蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白包括SUT1、SUT2和SUT4三類,主要功能就是對植物光合產(chǎn)物蔗糖的裝載、運(yùn)輸和卸載過程的調(diào)節(jié)作用。在馬鈴薯中,StSUT1蛋白主要對蔗糖的裝載進(jìn)行調(diào)控,StSUT4蛋白主要對蔗糖的卸載過程進(jìn)行調(diào)控,并且還與光周期相互作用來調(diào)節(jié)馬鈴薯植株的開花、莖長短和塊莖形成,但是StSUT2蛋白的功能仍是未知的。根據(jù)國內(nèi)外多年來對高等植物SUT2的研究分析來看,它的結(jié)構(gòu)與葡萄糖信號感受器類似,因此推測SUT2有可能是蔗糖信號感受器而不是蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)體。本研究主要通過構(gòu)建馬鈴薯StSUT2基因的干擾載體,并對其轉(zhuǎn)化至馬鈴薯中,為對StSUT2蛋白進(jìn)行功能分析奠定了基礎(chǔ)。實驗主要分為兩部分:一是干擾載體的構(gòu)建,用Gateway克隆技術(shù)可將StSUT2基因干擾片段快速重組到表達(dá)載體中,通過對重組子進(jìn)行測序,確定為干擾表達(dá)載體;二是馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化,將構(gòu)建好的干擾載體通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化至馬鈴薯塊莖中,使其再分化產(chǎn)生含有干擾基因的轉(zhuǎn)基因植株。取得的主要成果如下:(1)利用TOPO克隆,將擴(kuò)增出的干擾片段整合到pENTR中,構(gòu)建出入門載體命名為pENTR-SUT2。(2)根據(jù)Gateway克隆技術(shù)進(jìn)行LR重組,根據(jù)入門載體與表達(dá)載體的att L和attR位點(diǎn)重組,構(gòu)建出干擾表達(dá)載體pSUT2-RNAi。(3)用凍融法將干擾載體pSUT2-RNAi轉(zhuǎn)至農(nóng)桿菌GV3101中。(4)將干擾載體轉(zhuǎn)化至夏波蒂(SHB)和隴薯3號(L3)等馬鈴薯品種的塊莖中,通過卡那霉素篩選和PCR擴(kuò)增檢測,初步確定干擾基因已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入馬鈴薯植株中。用實時熒光定量PCR對轉(zhuǎn)化株進(jìn)行相對表達(dá)量檢測表明,干擾基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入馬鈴薯植株,并對StSUT2基因表達(dá)產(chǎn)生抑制作用。
[Abstract]:Solanum tuberosum L.) It is recognized as one of the main food crops in the world, its tuber can be used not only as food crops, but also in industrial production of starch. In the process of carbohydrate transport and accumulation from photosynthesis to storage organ through phloem sieve tube, the sucrose transporter protein Sucrose transporterium plays a major role. Sucrose transporter in dicotyledonous plants consists of sucrose transporter (SUT2) and SUT4. The main function of sucrose transporter in dicotyledonous plants is to regulate the loading transport and unloading process of plant photosynthate sucrose. In potato, StSUT1 protein mainly regulates the loading of sucrose. StSUT4 protein mainly regulates the unloading process of sucrose, and also interacts with photoperiod to regulate the flowering, stem length and tuber formation of potato plants. But the function of the StSUT2 protein is still unknown. According to the research and analysis of SUT2 in higher plants in recent years, its structure is similar to that of glucose signal receptor. Therefore, it is speculated that SUT2 may be a sucrose signal receptor rather than a sucrose transporter. In this study, the interference vector of potato StSUT2 gene was constructed and transformed into potato, which laid a foundation for functional analysis of StSUT2 protein. The experiment is mainly divided into two parts: one is the construction of interference vector, the interference fragment of StSUT2 gene can be quickly recombined into the expression vector by Gateway cloning technology, and the recombinant gene can be identified as interference expression vector by sequencing the recombinant gene, and the second is the genetic transformation of potato. The constructed interference vector was transformed into potato tuber by Agrobacterium tuber and transformed into transgenic plants containing interference gene. The main achievements are as follows: (1) using TOPO cloning, the amplified interference fragments were integrated into pENTR, and the entry vector named pENTR-SUT2.PU 2 was constructed. LR recombination was carried out according to Gateway cloning technology, and recombination according to the att L and attR sites of the entry vector and expression vector. The interference expression vector pSUT2-RNAi.f3 was constructed. The interference vector pSUT2-RNAi was transferred to Agrobacterium tumefaciens GV3101 by freeze-thaw method. The interference vector was transformed into the tubers of potato varieties such as Hepatitis B) and Longshu No.3 (L3), and was screened by kanamycin and detected by PCR amplification. It was preliminarily confirmed that the interfering gene had been successfully transferred into potato plants. The relative expression of the transformed plant was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The results showed that the interfering gene had been transferred into potato plant and the expression of StSUT2 gene was inhibited.
【學(xué)位授予單位】:蘭州理工大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:Q943.2;S532

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 譚振波,劉昕,曹鳴慶;玉米遺傳轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報;2000年06期

2 王翠亭,衛(wèi)志明;重要禾谷類糧食作物的遺傳轉(zhuǎn)化[J];植物生理學(xué)通訊;2002年02期

3 畢瑞明;陳立國;后猛;王洪剛;;小麥的遺傳轉(zhuǎn)化[J];植物生理學(xué)通訊;2006年03期

4 李思經(jīng);;禾谷類作物遺傳轉(zhuǎn)化的篩選方法[J];生物技術(shù)通報;1990年05期

5 朱遐;;滲透處理對玉米遺傳轉(zhuǎn)化的促進(jìn)作用[J];生物技術(shù)通報;1993年09期

6 孫盈盈;遺傳轉(zhuǎn)化花粉長成單倍體植株[J];生物技術(shù)通報;1997年02期

7 任春梅,董延瑜;西瓜遺傳轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展[J];中國西瓜甜瓜;2000年02期

8 于晶;任朝陽;閔麗;蒼晶;;花粉管通道法在單子葉作物遺傳轉(zhuǎn)化上的應(yīng)用[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2006年01期

9 李婉婷;于麗杰;劉佳娜;;DNA原位雜交技術(shù)在花粉管通道法遺傳轉(zhuǎn)化途徑研究中的應(yīng)用[J];北京農(nóng)業(yè);2007年36期

10 佟兆國;蔡斌華;章鎮(zhèn);王富榮;張開春;閆國華;周宇;;果樹中基因槍法遺傳轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展[J];果樹學(xué)報;2008年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 孟輝;張岳;張舉仁;;以小麥莖尖為受體的遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因耐鹽小麥的獲得[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第八屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2003年

2 王小娟;李美菊;陳向東;沈萍;;跨屬細(xì)菌間細(xì)胞接觸自然遺傳轉(zhuǎn)化[A];湖北省遺傳學(xué)會、江西省遺傳學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2006年

3 黃敏仁;許農(nóng);;林木遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[A];中國林木遺傳育種進(jìn)展[C];1991年

4 趙天永;王國英;;果樹的遺傳轉(zhuǎn)化研究-文獻(xiàn)綜述[A];中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會第二屆青年學(xué)術(shù)年會園藝學(xué)論文集[C];1995年

5 劉清;吳順;沈革志;童建華;蕭浪濤;;遺傳轉(zhuǎn)化過程中水稻愈傷組織的內(nèi)源植物激素變化動態(tài)研究[A];2007年全國植物生長物質(zhì)研討會論文摘要匯編[C];2007年

6 王萍;鄒艷;徐軍田;李信書;周向紅;易樂飛;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)條斑紫菜遺傳轉(zhuǎn)化影響因子的研究[A];慶祝中國藻類學(xué)會成立30周年暨第十五次學(xué)術(shù)討論會摘要集[C];2009年

7 王姝杰;張成武;閆淑珍;李世訪;;苜蓿組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會農(nóng)業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)分會第六次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2004年

8 馬欣榮;楊曉娟;陳靜;鄧光兵;潘志芬;余懋群;;根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的多年生黑麥草的遺傳轉(zhuǎn)化[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展(上冊)[C];2001年

9 王小娟;陳向東;;屬間細(xì)菌質(zhì)粒自然遺傳轉(zhuǎn)化[A];第二屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

10 石鳳敏;云錦鳳;趙彥;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化在禾本科植物中的應(yīng)用[A];中國草學(xué)會青年工作委員會學(xué)術(shù)研討會論文集(上冊)[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 劉倩倩;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的南瓜耐鹽相關(guān)基因CmP5CS遺傳轉(zhuǎn)化菜用大豆[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 陳罡;野生茄子(Solanum torvum)葉片cDNA文庫構(gòu)建及耐鹽相關(guān)基因StBADH遺傳轉(zhuǎn)化番茄[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 郭萌月;大腸桿菌碳源代謝及氧化應(yīng)答與自然遺傳轉(zhuǎn)化的相關(guān)性研究[D];武漢大學(xué);2015年

4 羅在柒;農(nóng)桿菌介導(dǎo)虎杖芪合酶基因遺傳轉(zhuǎn)化棗樹增強(qiáng)抗性的研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2015年

5 張研;RpoS在大腸桿菌自然遺傳轉(zhuǎn)化中的功能研究[D];武漢大學(xué);2013年

6 徐全樂;同源異型盒基因PttKN1在幾種花卉植物中的遺傳轉(zhuǎn)化及其功能研究[D];蘭州大學(xué);2008年

7 楊德翠;Cylindrocladium Canadense侵染對牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)光合特性的影響以及牡丹病程相關(guān)蛋白1基因的克隆和遺傳轉(zhuǎn)化[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 陳國戶;StNHX1與OsPT2基因遺傳轉(zhuǎn)化菜用大豆培育耐鹽及磷高效利用新種質(zhì)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 徐進(jìn);馬鈴薯StSUT2基因干擾載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化[D];蘭州理工大學(xué);2017年

2 李雪;北陵鳶尾(Iris typhifolia Kitag.)DREB轉(zhuǎn)錄因子的克隆及其對煙草的遺傳轉(zhuǎn)化[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 謝亮亮;PtFLC轉(zhuǎn)錄本超表達(dá)載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 劉瑞環(huán);農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米莖尖遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 陳芳;小麥轉(zhuǎn)錄因子基因TaNF-YB2;1耐逆功能及TaZFP1~TaZFP4遺傳轉(zhuǎn)化[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 張弘;中國櫻桃PpcERF基因克隆與功能研究[D];浙江師范大學(xué);2015年

7 孟慶蕊;白術(shù)再生體系建立與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 趙亞民;白沙蒿維生素E合成關(guān)鍵酶基因過表達(dá)載體構(gòu)建及煙草的遺傳轉(zhuǎn)化[D];蘭州大學(xué);2012年

9 蘇文龍;毛白楊PtMADS5基因遺傳轉(zhuǎn)化和CRISPR-Cas9植物基因敲除實驗[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 馬玲瓏;大麥成熟胚離體培養(yǎng)條件的優(yōu)化及HgNHX1基因表達(dá)載體的構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

,

本文編號:1949318

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://www.sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/1949318.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶22cd9***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com