本文選題：豬源大腸桿菌　切入點(diǎn)：氟苯尼考　出處：《河南農(nóng)業(yè)科學(xué)》2017年11期

【摘要】：根據(jù)Gen Bank中豬源大腸桿菌氟苯尼考耐藥基因floR的序列設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,擴(kuò)增出floR基因片段,克隆到p MD-18T載體上,構(gòu)建p MD-18T-floR陽性標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。通過SYBR GreenⅠ熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化、熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立、熔解曲線的分析及敏感性、特異性、重復(fù)性試驗(yàn),建立針對(duì)豬源大腸桿菌氟苯尼考耐藥基因floR的熒光定量PCR檢測(cè)方法,并研制出檢測(cè)試劑盒,同時(shí)對(duì)從養(yǎng)殖場(chǎng)分離的156株大腸桿菌進(jìn)行耐藥表型和耐藥基因檢測(cè)。結(jié)果顯示,研制的試劑盒靈敏度可達(dá)1.0×101拷貝,重復(fù)性好,特異性強(qiáng),對(duì)大腸桿菌磺胺類耐藥菌株、β-內(nèi)酰胺類耐藥菌株、大環(huán)內(nèi)酯類耐藥菌株檢測(cè)均為陰性,熔解曲線分析,擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解溫度為88.8~89.2℃,沒有引物二聚體和非特異性擴(kuò)增峰出現(xiàn),耐藥表型與耐藥基因檢測(cè)符合率為96.7%。表明研制的試劑盒適合于臨床樣品豬源大腸桿菌氟苯尼考耐藥基因的檢測(cè)。
[Abstract]:According to the sequence of porcine Escherichia coli florfenicol resistance gene floR in Gen Bank, a pair of specific primers were designed, and the floR gene fragment was amplified and cloned into p MD-18T vector. The standard plasmid of p MD-18T-floR positive was constructed by optimizing the reaction conditions of SYBR Green 鈪，

本文編號(hào)：1680821