重組pEGFP-N1-IGF-Ⅰ基因表達質(zhì)粒促進SD大鼠牙囊細胞增殖及早期成骨分化效應的實驗研究
發(fā)布時間:2018-03-21 04:20
本文選題:胰島素樣生長因子-Ⅰ 切入點:牙囊細胞 出處:《重慶醫(yī)科大學學報》2017年01期 論文類型:期刊論文
【摘要】:目的:通過胰島素樣生長因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)與增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合表達,構建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-IGF-Ⅰ。體外實驗分析脂質(zhì)體介導pEGFP-N1-IGF-Ⅰ轉(zhuǎn)染SD大鼠牙囊細胞(rat dental follicle cells,rDFCs)對其增殖及早期成骨分化效應的影響。方法:體外分離培養(yǎng)rDFCs并分為空白組、pEGFPN1-IGF-Ⅰ組、pEGFP-N1+脂質(zhì)體組和pEGFP-N1-IGF-Ⅰ+脂質(zhì)體組。采用熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達情況,MTT法檢測細胞增殖活性,堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性檢測法檢測ALP活性,PCR檢測Ⅰ型膠原(collagen type 1,Col1)表達情況。結果:熒光顯微鏡觀察結果表明pEGFP-N1-IGF-Ⅰ成功轉(zhuǎn)染入rDFCs。轉(zhuǎn)染后48 h,脂質(zhì)體處理組(pEGFP-N1+脂質(zhì)體組和pEGFP-N1-IGF-Ⅰ+脂質(zhì)體組)轉(zhuǎn)染效率較非脂質(zhì)體處理組(空白組和pEGFP-N1-IGF-Ⅰ組)高。MTT結果表明,pEGFP-N1-IGF-Ⅰ能增強rDFCs細胞活性,而脂質(zhì)體毒性對細胞活性具有抑制作用。ALP活性檢測結果顯示pEGFP-N1-IGF-Ⅰ能增強rDFCs的ALP活性。PCR結果證明pEGFP-N1-IGF-Ⅰ能增加Col1α1及Col1α2的相對表達量。結論:pEGFP-N1-IGF-I能促進rDFCs增殖和早期成骨分化效應,為IGF-Ⅰ基因在牙周組織修復再生中的應用提供了實驗依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to investigate the expression of insulin-like growth factor- 鈪,
本文編號:1642230
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