本文關(guān)鍵詞：胭脂魚IgM重鏈基因克隆與表達分析

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【摘要】：目的認識胭脂魚IgM的結(jié)構(gòu)與功能,研究其免疫應(yīng)答規(guī)律。方法通過同源克隆和RACE技術(shù)構(gòu)建胭脂魚IgMμcDNA全長,重組表達恒定區(qū)序列并制備抗血清,分別從mRNA水平和蛋白水平檢測胭脂魚IgM各組織及發(fā)育早期的表達情況;利用抗血清探究經(jīng)滅活嗜水氣單胞菌免疫后胭脂魚IgM免疫應(yīng)答規(guī)律。結(jié)果獲得胭脂魚IgμcDNA全序列,長2028 bp,編碼580 aa,重組表達IgMμCH_(1-4)區(qū),獲得相對分子質(zhì)量約45 000的重組蛋白,成功制備rIgM多抗,免疫印跡分析可見,anti-rIgM抗血清能夠特異性識別rIgM和胭脂魚血清IgM;各組織RT-PCR結(jié)果表明,被檢測組織除肌肉、皮膚和心臟外均有IgM表達;發(fā)育各時期RT-PCR結(jié)果顯示,胭脂魚卵中含有IgM轉(zhuǎn)錄本,出膜第30天可明顯檢測到IgM表達。Western blot檢測結(jié)果表明,免疫相關(guān)組織IgM含量均較高,心臟、皮膚未檢測到IgM轉(zhuǎn)錄本,卻含有大量的IgM蛋白,腦和肌肉始終未檢測到IgM蛋白。滅活嗜水氣單胞菌免疫實驗表明,胭脂魚在初次免疫第21天菌特異性IgM滴度有明顯變化,加強免疫后迅速升高,并在最高滴度維持2個月后緩慢降低。結(jié)論成功獲得瀕危物種胭脂魚IgMμcDNA全序列及anti-IgM多克隆抗體,為胭脂魚免疫球蛋白結(jié)構(gòu)分析、免疫監(jiān)測及抗原診斷提供有力工具。
【作者單位】： 西南大學生命科學學院三峽庫區(qū)生態(tài)環(huán)境教育部重點實驗室;
【基金】：西南大學基本科研業(yè)務(wù)費專項基金(XDJK2012C082) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201203086)
【分類號】：S917.4;Q78
【正文快照】： 胭脂魚(Myxocyprinus asiaticus)隸屬于鯉形目(Cypriniformes)胭脂魚科(Catostomidae),該魚體型別致、色彩絢麗、游動文靜,被譽為“亞洲美人魚”,分布僅見于我國的長江和閩江,具有極高的觀賞價值和重要的科學價值[1-4]。自然狀態(tài)下,胭脂魚的胚胎發(fā)育期長,繁殖率低[2],加之近年

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