發(fā)布時(shí)間：2017-11-15 05:25

  本文關(guān)鍵詞：一株天鵝源小鵝瘟病毒的全基因序列分析及小鵝瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體物質(zhì)的制備

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【摘要】：1.一株天鵝源小鵝瘟病毒的全基因序列分析本研究利用鵝胚從江蘇某動(dòng)物園送檢的病死天鵝病料中分離到一株小鵝瘟病毒,命名為GPV-XZ20150328,對(duì)該株病毒進(jìn)行了全基因克隆測(cè)序,拼接后獲得了GPV-XZ20150328的全基因序列。將其與GenBank上已發(fā)表的GPV全基因序列和本實(shí)驗(yàn)室分離的另一株天鵝源GPV全基因序列進(jìn)行比較,結(jié)果顯示：GPV-XZ20150328株全長為5106bp,與歐洲標(biāo)準(zhǔn)B株基因序列全長相同,同源性為97.7%,與天鵝源GPV-SHFX (5050bp)株的同源性達(dá)99.8%,但在末端重復(fù)序列其出現(xiàn)56個(gè)基因的插入,提示,GPV在不同個(gè)體和區(qū)域可能存在一定差異。2.小鵝瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原物質(zhì)的制備本研究通過鵝胚接種擴(kuò)增小鵝瘟病毒,用超速離心法進(jìn)行純化,通過SDS-PAGE分析、直接透射電鏡觀察、血凝試驗(yàn)、PCR特異性分析及滅活條件測(cè)定后,用聚乙二醇6000(PEG6000)濃縮法制得GPV濃縮抗原。結(jié)果表明,擴(kuò)增的病毒純度較高且無AIV、NDV、 EDS76、MDPV、ALV、MDV、IBV、ILTV、IBDV、REV、DEV、TMUV等病毒的污染。滅活條件以0.3%β-丙內(nèi)酯作用48h最佳。制得的GPV濃縮抗原與特異性抗體反應(yīng)的瓊擴(kuò)效價(jià)為1.4。將制備的濃縮抗原加入1%BSA凍存保護(hù)劑,分裝,凍干后經(jīng)物理性狀檢查、計(jì)算CV值、無菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、均一性、穩(wěn)定性、保質(zhì)期等檢驗(yàn)后獲得了高質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)抗原,可以用于相應(yīng)檢測(cè)試劑的質(zhì)量判別。3.小鵝瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)抗體物質(zhì)的制備本研究采用口服和注射的途徑對(duì)雛鵝進(jìn)行四次免疫后制備了抗小鵝瘟多抗血清。利用本實(shí)驗(yàn)室保存的一株抗鵝細(xì)小病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株(GPV-Mab-6C8)經(jīng)Bab/c小鼠制備出抗小鵝瘟單克隆抗體。用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè),該多抗血清的AGP效價(jià)為1：64,用GPV細(xì)胞適應(yīng)毒建立的免疫熒光檢測(cè)方法(IFA)檢測(cè)該血清,IFA效價(jià)為1：6400,單抗的IFA效價(jià)為1：1600。特異性鑒定結(jié)果表明制備的抗體物質(zhì)只與GPV反應(yīng),而不與NDV、 AIV、EDS76、ALV、REV、IBV、IBDV、TMUV等病毒反應(yīng),證明特異性良好。將制備的抗體物質(zhì)加入0.01%硫柳汞,分裝,凍干后經(jīng)物理性狀檢查、無菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、均一性、穩(wěn)定性、保質(zhì)期等檢驗(yàn)后獲得了高質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)抗體。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65

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1 杜鑫;魯承;;小鵝瘟病毒的分離與鑒定[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年05期

2 葛凱;王桂軍;李培英;夏倫斌;陳習(xí)中;左瑞華;;小鵝瘟病毒地方株的分離與鑒定[J];畜牧與飼料科學(xué);2010年10期

3 葛凱;王桂軍;李培英;夏倫斌;陳習(xí)中;左瑞華;;小鵝瘟病毒蛋白質(zhì)的研究概況[J];山東畜牧獸醫(yī);2010年12期

4 灻一忠;曹永萍;;1株小鵝瘟病毒的分離及鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2013年10期

5 鄧碧華;楊傳鎖;王凱民;盧宇;張金秋;呂芳;何家惠;侯繼波;;一株小鵝瘟病毒的分離與鑒定[J];中國家禽;2013年20期

6 李茂祥,李俊寶,鄭玉美;小鵝瘟病毒純化及其理化特性的研究[J];病毒學(xué)報(bào);1990年02期

7 胡桂學(xué),高光,鄒嘯環(huán),肖峰;小鵝瘟病毒分離與初步鑒定[J];經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào);2002年02期

8 李精碧;李發(fā)勛;汪德生;文明;周碧君;;小鵝瘟病毒貴州株的分離與鑒定[J];貴州畜牧獸醫(yī);2008年04期

9 李新華;抗小鵝瘟病毒中和性單克隆抗體的研制及實(shí)驗(yàn)防治效果[J];中國畜禽傳染病;1998年04期

10 金文杰;李清;劉岳龍;秦愛建;劉學(xué)賢;王建;邵紅霞;施祖灝;蔣小剛;周衛(wèi)東;;小鵝瘟病毒常州株的鑒定及其致弱研究[J];中國家禽;2008年23期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李青;許小琴;王志剛;王彬;;板藍(lán)根多糖對(duì)小鵝瘟病毒體外抑制作用的研究[A];紀(jì)念中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)中獸醫(yī)學(xué)分會(huì)成立30周年中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)中獸醫(yī)學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)、華東區(qū)第十九次中獸醫(yī)科研協(xié)作與學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 龔建森;呂曉娟;徐步;劉學(xué)賢;;小鵝瘟病毒YZ-0703株的生物學(xué)特性鑒定[A];中國家禽科學(xué)研究進(jìn)展——第十四次全國家禽科學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

3 盧菲;程安春;汪銘書;韓新鋒;黎敏;車茜;劉曉東;陳孝躍;;肌肉注射小鵝瘟病毒VP3基因疫苗誘導(dǎo)小鼠細(xì)胞和體液免疫的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

4 韓新鋒;程安春;汪銘書;劉曉東;盧菲;黎敏;車茜;;小鵝瘟病毒VP3基因疫苗的構(gòu)建及其誘導(dǎo)小鼠和鵝中和抗體初報(bào)[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

5 盧菲;程安春;汪銘書;韓新鋒;黎敏;車茜;劉曉東;陳孝躍;;不同劑量小鵝瘟病毒VP3基因疫苗基因槍轟擊誘導(dǎo)小鼠細(xì)胞免疫的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

6 盧菲;程安春;汪銘書;韓新鋒;黎敏;車茜;劉曉東;陳孝躍;;基因槍轟擊和肌肉注射小鵝瘟病毒VP3基因疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫發(fā)生的比較研究[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

7 李書光;王金良;王艷;劉吉山;苗立中;沈志強(qiáng);;山東省小鵝瘟病毒BZ株的分離鑒定及VP3基因的序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

8 盧菲;程安春;汪銘書;韓新鋒;黎敏;車茜;劉曉東;陳孝躍;;小鵝瘟病毒VP3基因疫苗與弱毒疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答的比較[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

9 劉曉東;汪銘書;程安春;韓新鋒;盧菲;黎敏;陳孝躍;;肌注免疫小鵝瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠體內(nèi)表達(dá)時(shí)相的研究[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

10 劉曉東;程安春;汪銘書;韓新鋒;盧菲;黎敏;陳孝躍;;熒光定量PCR檢測(cè)肌注不同劑量小鵝瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李書光;小鵝瘟病毒保護(hù)性抗原的原核表達(dá)及免疫原性研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 韓新鋒;串聯(lián)不同分子佐劑的小鵝瘟病毒VP3基因疫苗的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋娜;一株天鵝源小鵝瘟病毒的全基因序列分析及小鵝瘟病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體物質(zhì)的制備[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

2 李長瑜;小鵝瘟病毒單克隆抗體的制備及膠體金診斷試紙的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

3 李青;板藍(lán)根多糖抗小鵝瘟病毒作用的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2009年

4 劉飛;抗小鵝瘟病毒單克隆抗體的制備及膠體金免疫層析試紙條的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 范波;間接原位PCR檢測(cè)GPV方法建立及GPV在實(shí)驗(yàn)感染雛鵝體侵染規(guī)律的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 許洪潔;小鵝瘟病毒VP3基因真核表達(dá)質(zhì)粒在小鼠中的免疫效果[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 王暖成;小鵝瘟病毒延邊株VP3基因的原核表達(dá)及免疫性分析[D];延邊大學(xué);2010年

8 呂亞楠;小鵝瘟病毒PCR檢測(cè)方法的建立及江淮地區(qū)小鵝瘟病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

9 李清;小鵝瘟病毒強(qiáng)毒株細(xì)胞適應(yīng)毒的培育及其VP3基因的表達(dá)[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

10 鹿鐘文;小鵝瘟病毒VP3基因的克隆表達(dá)及抗小鵝瘟病毒單克隆抗體的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2012年

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