蛋白質療法由于其高效、高特異性和低毒副作用等優(yōu)點,在多種疾病的治療方面具有廣闊的應用前景,如抗癌類抗體貝伐單抗、利妥昔單抗等,小分子蛋白端粒酶B、細胞色素C、RNA酶A等,治療糖尿病類藥物胰島素等,治療自身免疫疾病的IL-6單抗、IL-17單抗、CD20單抗等。然而,由于蛋白類藥物易變性失活、膜滲透能力差等特點,蛋白藥物的臨床轉化受到極大地限制。本論文以高分子載體為基礎,利用腫瘤生理微環(huán)境的特點,設計了納米凝膠與植入支架的高分子載體用于維持蛋白藥物在遞送過程的生理活性并實現蛋白藥物在靶向部位的可控釋放。具體的研究內容和主要結論如下:(1)葡萄糖與pH雙敏感型納米凝膠用于蛋白藥物的細胞內遞送。苯硼酸與順式二醇可以在生理環(huán)境下形成硼酯鍵,而形成的硼酯鍵可以在高葡聚糖濃度或者酸性環(huán)境下發(fā)生斷裂。我們利用這個反應,以葡聚糖和聚(L-谷氨酸)-g-甲氧基聚乙二醇/氨基苯硼酸(PLG-g-mPEG/PBA)為基礎,設計了由苯硼酸和順式二醇交聯(lián)形成的pH和葡萄糖雙響應型生物可降解納米凝膠用于蛋白藥物的遞送。交聯(lián)網格使α-淀粉酶和透明質酸酶的載藥效率分別達到55.6%和29.1%。蛋白藥物的體外釋放曲...

【文章頁數】：127 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 蛋白藥物在腫瘤治療方面的應用
        1.1.1 腫瘤的治療
        1.1.2 腫瘤微環(huán)境的特征
    1.2 蛋白藥物的體內遞送方式-PEG化
    1.3 蛋白藥物遞送的載體
        1.3.1 脂質體類
        1.3.2 納米凝膠
        1.3.3 高分子納米粒子
        1.3.4 無機納米粒子
        1.3.5 微球
        1.3.6 水凝膠
    1.4 敏感型高分子載體遞送體系
        1.4.1 pH敏感型高分子載體
        1.4.2 溫度敏感型高分子載體
        1.4.3 酶敏感型高分子載體
        1.4.4 葡萄糖敏感型高分子載體
    1.5 凝膠與納米凝膠的交聯(lián)機制
        1.5.1 物理交聯(lián)
        1.5.2 化學交聯(lián)
    1.6 本論文的選題目的以及主要研究內容
第2章 葡萄糖與pH雙響應型納米凝膠用于蛋白藥物的高效遞送
    2.1 前言
    2.2 實驗材料和實驗方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 儀器與表征
        2.2.3 PLG-g-mPEG/PBA的制備
        2.2.4 空白納米凝膠與負載蛋白的納米凝膠的制備
        2.2.5 體外釋放與釋放后蛋白藥物的圓二色譜
        2.2.6 納米凝膠的細胞內吞
        2.2.7 納米凝膠的細胞毒性
    2.3 結果與討論
        2.3.1 PLG-g-mPEG/PBA的合成與表征
        2.3.2 空白納米凝膠和負載蛋白質的納米凝膠的制備和表征
        2.3.3 蛋白藥物的釋放行為及釋放后蛋白的圓二光譜
        2.3.4 蛋白藥物的活性檢測
        2.3.5 細胞內吞
        2.3.6 納米凝膠的生物相容性
    2.4 本章小結
第3章 缺氧敏感型超分子納米凝膠用于RNA酶的細胞內遞送以及乳腺癌的治療
    3.1 前言
    3.2 實驗材料和實驗方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 儀器與表征
        3.2.3 PLG-g-mPEG/Azo和PLG-g-mPEG/βCD的合成
        3.2.4 RNase-FITC和RNase-Cy5的合成
        3.2.5 負載RNA酶的納米凝膠的制備
        3.2.6 納米化RNA酶的體外釋放
        3.2.7 釋放后RNA酶的圓二色譜
        3.2.8 細胞培養(yǎng)
        3.2.9 細胞毒性測試
        3.2.10 納米化RNA酶的細胞內吞
        3.2.11 動物實驗
        3.2.12 納米化RNA酶的藥代動力學
        3.2.13 體內抗腫瘤效果評價
        3.2.14 組織的免疫組化分析
        3.2.15 統(tǒng)計學分析
    3.3 結果和討論
        3.3.1 PLG-g-mPEG/Azo和PLG-g-mPEG/βCD的合成與表征
        3.3.2 超分子納米凝膠的表征
        3.3.3 納米凝膠對RNA酶的擔載
        3.3.4 納米化RNA酶的缺氧敏感釋放
        3.3.5 納米化RNA酶的細胞內吞
        3.3.6 納米化RNA酶的細胞毒性
        3.3.7 納米化RNA酶的體內代謝
        3.3.8 納米化RNA酶的體內抑瘤效果
    3.4 本章小結
第4章 生物可降解支架遞送aPD-1抗體用于腹腔轉移瘤的治療
    4.1 前言
    4.2 實驗材料和實驗方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 氧化葡聚糖的制備
        4.2.3 細胞培養(yǎng)
        4.2.4 四臂PEG-NH₂的合成
        4.2.5 植入支架的制備
        4.2.6 植入支架的流變學行為
        4.2.7 植入支架的體外降解和體外釋放
        4.2.8 細胞毒性的測定
        4.2.9 DOX引發(fā)CT26細胞的免疫原性死亡
        4.2.10 動物實驗
        4.2.11 生物可植入支架的體內降解和生物分布
        4.2.12 體內抗腫瘤實驗
        4.2.13 流式細胞分析
        4.2.14 組織的病理學分析
        4.2.15 統(tǒng)計分析
    4.3 結果與討論
        4.3.1 生物植入支架的體外表征
        4.3.2 生物植入支架的體外釋放的研究
        4.3.3 生物植入支架的細胞毒性和DOX引發(fā)ICD
        4.3.4 生物植入支架的體內降解和生物分布
        4.3.5 CT26腹腔轉移腫瘤模型的治療效果
        4.3.6 CT26腹腔轉移腫瘤治療后的免疫細胞分析
    4.4 本章小結
第5章 全文總結和展望
    5.1 全文總結
    5.2 展望
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的學術論文與取得的其他研究成果



本文編號：3991119