新阿波羅棲熱袍菌(Thermotoga neapolitana)是一種超嗜熱菌,屬于革蘭氏陰性菌,其最適生長(zhǎng)溫度高達(dá)80℃,T.neapolitana利用廣泛的底物發(fā)酵產(chǎn)氫和微量乙醇,其代謝途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶是丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶(PFOR)。PFOR全酶是由α,β,γ,δ四個(gè)亞基組成,PFOR酶催化丙酮酸和輔酶A轉(zhuǎn)化成乙酰輔酶A。它使用焦磷酸硫胺素(TPP)作為輔酶。新阿波羅棲熱袍菌(T.neapolitana)來(lái)源的丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶的酶學(xué)特性還未闡明,本研究從新阿波羅棲熱袍菌(T.neapolitana)中克隆丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶基因,在大腸桿菌中進(jìn)行重組表達(dá),對(duì)重組表達(dá)的PFOR酶進(jìn)行純化,和酶學(xué)性質(zhì)分析,以及對(duì)PFOR酶酶法合成乙酰輔酶A進(jìn)行了探索。主要研究?jī)?nèi)容與研究結(jié)果如下:(1)構(gòu)建丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶重組表達(dá)質(zhì)粒pET-PFOR:采用PCR方法從新阿波羅棲熱袍菌全基因組中擴(kuò)增出目標(biāo)基因片段,并以pET表達(dá)載體為基礎(chǔ),構(gòu)建出含丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶基因的重組表達(dá)質(zhì)粒。(2)重組丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶的表達(dá)和純化。將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到大腸桿菌E.coli BL21...

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

產(chǎn)量是釀酒酵母的2.5倍，也是公認(rèn)的安全菌株，但是它只能利用如葡萄糖、果糖、蔗糖等，不能代謝戊糖，而且還會(huì)代謝一些副產(chǎn)物[運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌在工業(yè)應(yīng)用上有了較大的局限性。利用大腸桿菌產(chǎn)有較其它常溫菌的優(yōu)勢(shì)，它有完整的五碳糖和六碳糖的代謝途徑，,底物范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)存在與運(yùn)動(dòng)....

乙酸和乙醇。嗜熱厭丙酮酸代謝（通常在嗜熱厭氧桿菌和嗜熱厭氧桿菌中）由PFOR催化，酸轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A和CO2。這些氧化還原酶的活性取決于細(xì)菌種類長(zhǎng)條件[59]。已有報(bào)道顯示在解糖熱厭氧桿菌中大部分電子以NAD（P）失而不是產(chǎn)生氫。在熱纖梭菌中，通過(guò)PFL酶形成甲酸....

并在丙酮酸異化中起關(guān)鍵作用[64]。丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶（PFOR）基因在古細(xì)菌和真核生物中存在（如圖1.3）。古細(xì)菌中似乎都含有PFOR基因；它廣泛分布于細(xì)菌中，厭氧原生動(dòng)物也存在PFOR基因[65]。圖1.3丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶[64]Fig1.3Pyru....

圖1.3丙酮酸鐵氧化還原蛋白酶[64]Fig1.3PyruvateFerredoxinOxidoreductase[64]酮酸鐵氧化還原酶的結(jié)構(gòu)eapolitanaPFOR與非洲脫硫弧菌PFOR一樣，含有3個(gè)[4Fe-4列分析證實(shí)存在兩種典型的高度保守的富....

本文編號(hào)：3990887