近年來(lái),小分子熒光探針由于其高靈敏度和高時(shí)空分辨率而備受關(guān)注,是生物檢測(cè)和成像的重要工具之一。其中,七甲川菁類作為典型的近紅外熒光染料,因其優(yōu)異的光物理性質(zhì)、良好的生物相容性和低毒性而廣泛應(yīng)用于小分子熒光探針的設(shè)計(jì)。在分子識(shí)別和特定有機(jī)反應(yīng)的幫助下,菁類染料的研究在過(guò)去的幾十年里蓬勃發(fā)展,其中功能性的菁染料對(duì)特定的分析物具有良好選擇性。本論文以七甲川花菁為熒光團(tuán),通過(guò)修飾不同的識(shí)別基團(tuán)改變其共軛聚甲炔?-電子體系,設(shè)計(jì)了以下三種近紅外比率型熒光探針:(1)在Cy-O的氧原子上引入一個(gè)磷酸基團(tuán)得到具有線粒體特異性的近紅外比率型熒光探針Cy-OP,用于高靈敏度和選擇性識(shí)別堿性磷酸酶(ALP)。經(jīng)過(guò)ALP處理后,探針Cy-OP表現(xiàn)出優(yōu)異的識(shí)別性能,如選擇性高、靈敏度好(檢測(cè)限低至0.16 mU/mL)、響應(yīng)時(shí)間短(30分鐘內(nèi))和低熒光背景下大的發(fā)射峰位移。此外,酶殘留物的發(fā)射比(I_{616 nm}/I_{766 nm})有利于其在復(fù)雜生物系統(tǒng)中的應(yīng)用。因此,探針Cy-OP成功應(yīng)用于活細(xì)胞中ALP的檢測(cè)和熒光定位。(2)設(shè)計(jì)合成了一例基于七甲川花菁的近紅外比率...

【文章頁(yè)數(shù)】：114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 熒光探針
        1.1.1 近紅外熒光探針
        1.1.2 比率型熒光探針
    1.2 菁染料概述
        1.2.1 七甲川菁類熒光探針
        1.2.2 七甲川菁類熒光探針的研究進(jìn)展
    1.3 生物酶及其檢測(cè)意義
        1.3.1 生物酶熒光探針的研究進(jìn)展
        1.3.2 堿性磷酸酶(ALP)的檢測(cè)意義及其研究進(jìn)展
        1.3.3 酪氨酸酶(TYR)的檢測(cè)意義及其研究進(jìn)展
        1.3.4 谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT/ γ-GT)的檢測(cè)意義及其研究進(jìn)展
    1.4 本論文的選題依據(jù)及研究思路
第二章 線粒體特異性的近紅外熒光探針用于ALP活性的比率檢測(cè)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.4 紫外-可見(jiàn)吸收光譜、熒光光譜的測(cè)定
        2.2.5 檢測(cè)限的測(cè)定
        2.2.6 探針Cy-OP與 ALP反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)研究
        2.2.7 細(xì)胞培養(yǎng)和熒光成像方法
        2.2.8 細(xì)胞毒性研究
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 探針Cy-OP的設(shè)計(jì)合成及其對(duì)ALP的光譜響應(yīng)
        2.3.2 探針Cy-OP對(duì) ALP檢測(cè)機(jī)理的討論
        2.3.3 探針Cy-OP對(duì) ALP檢測(cè)的條件優(yōu)化
        2.3.4 探針Cy-OP對(duì) ALP的檢測(cè)性能研究
        2.3.5 ALP酶催化激活機(jī)制
        2.3.6 探針Cy-OP對(duì) ALP檢測(cè)的選擇性實(shí)驗(yàn)
        2.3.7 探針Cy-OP對(duì)活細(xì)胞中ALP的熒光成像
    2.4 小結(jié)
第三章 用比色法和近紅外比率型熒光探針測(cè)定內(nèi)源性酪氨酸酶活性
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 探針Cy-tyr的設(shè)計(jì)合成及其對(duì)TYR的光譜響應(yīng)
        3.3.2 探針Cy-tyr對(duì) TYR檢測(cè)機(jī)理的討論
        3.3.3 探針Cy-tyr對(duì) TYR檢測(cè)的條件優(yōu)化
        3.3.4 探針Cy-tyr對(duì) TYR的檢測(cè)性能研究
        3.3.5 探針Cy-tyr對(duì) TYR檢測(cè)的選擇性實(shí)驗(yàn)
        3.3.6 探針Cy-tyr對(duì)活細(xì)胞中TYR的熒光成像
    3.4 小結(jié)
第四章 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的近紅外比率型熒光探針的設(shè)計(jì)與成像
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 探針Cy-GGT的設(shè)計(jì)合成及其對(duì)GGT的光譜響應(yīng)
        4.3.2 探針Cy-GGT對(duì) GGT檢測(cè)機(jī)理的討論
        4.3.3 探針Cy-GGT對(duì) GGT檢測(cè)的條件優(yōu)化
        4.3.4 探針Cy-GGT對(duì) GGT的檢測(cè)性能研究
        4.3.5 探針Cy-GGT對(duì) GGT檢測(cè)的選擇性實(shí)驗(yàn)
        4.3.6 探針Cy-GGT對(duì)活細(xì)胞中GGT的熒光成像
        4.3.7 探針Cy-GGT對(duì)動(dòng)物體內(nèi)GGT活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
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本文編號(hào)：3764909