【摘要】：化學(xué)性肝損傷是由化學(xué)肝毒性物質(zhì)所造成的肝損傷,能進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化甚至肝癌,嚴(yán)重威脅著人類健康。目前市場上已有許多保肝藥物,但是價(jià)格昂貴且毒副作用較大,在臨床使用上受到極大限制。因此,開發(fā)具有良好的保肝效果且毒副作用小的天然藥物是目前迫切需要解決的問題。桑葚(Mori Fructus)是植物桑(Morus alba L.)的成熟果實(shí),收載于《中華人民共和國藥典》(2015年版,一部),具有滋陰補(bǔ)腎、調(diào)節(jié)免疫等功效,被譽(yù)為“民間圣果”。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)粗多糖具有減輕肝損傷的作用。但是桑葚精多糖對肝保護(hù)作用的影響,其最佳構(gòu)型和“構(gòu)-效”關(guān)系還尚不明確,嚴(yán)重阻礙了對桑葚多糖的全面認(rèn)識(shí),不利于桑葚多糖在新藥和功能性食品領(lǐng)域的發(fā)展。為解決上述問題,本課題以桑葚為原料,采用水提醇沉法得到桑葚粗多糖,再經(jīng)過DEAE-52纖維素和Sephadex G-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離、純化,最終獲得三個(gè)相對均一的多糖組分(MFP-1、MFP-2和MFP-3)。然后對MFP-1、MFP-2和MFP-3進(jìn)行氧化降解、硫酸酯化修飾和羧甲基化修飾,得到相應(yīng)的修飾產(chǎn)物,并采用HPLC柱前衍生法和紅外光譜法分析對桑葚多糖及其衍生物進(jìn)行一級(jí)結(jié)構(gòu)解析,同時(shí)評價(jià)了桑葚多糖及其衍生物對乙醇脫氫酶(ADH)活性的影響,初步篩選出具有保肝作用的桑葚多糖及其分子修飾法。最后,建立了急性酒精性肝損傷模型、刀豆蛋白A急性肝損傷和亞急性肝損傷模型,展開MFP-1及其羧甲基化衍生物對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用研究。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.桑葚多糖的提取、分離、純化。桑葚經(jīng)勻漿、熱水浸提、除雜等過程得到桑葚粗多糖。分別以蒸餾水、0.1、0.5 M NaCl溶液為洗脫液,將桑葚粗多糖通過DEAE-52纖維素柱層析分離,收集不同洗脫液洗脫組分,經(jīng)透析和冷凍干燥得到桑葚粗多糖再經(jīng)Sephadex G-100層析柱進(jìn)一步純化,最后得到三個(gè)多糖組分MFP-1、MFP-2和MFP-3,凝膠滲透色譜洗脫均呈單一峰形,提示為均一多糖。2.桑葚多糖的結(jié)構(gòu)解析。通過化學(xué)法和儀器分析法對各多糖組分進(jìn)行理化性質(zhì)測定和結(jié)構(gòu)表征,得到以下結(jié)果:(1)MFP-1分子量約為20.93 kDa,多糖含量達(dá)75.3%,硫酸基含量6.9%,糖醛酸含量為2.3%。MFP-1主要由Gal、Glc、Ara、Rha、Man等5種中性單糖組成,其摩爾比為26.8∶20.4∶8.7∶5∶1,MFP-1中主要,進(jìn)一步說明MFP-1為中性多糖。(2)MFP-2分子量約為56.23 kDa,多糖含量達(dá)83.7%,硫酸基含量12.9%,糖醛酸含量為22.2%。MFP-2主要含有Ara、Gal、Rha、Glc、GalA,其摩爾比為34.2∶38.2∶8∶17.5∶15.1,在1636 cm~(-1)處出現(xiàn)寬吸收峰是-COO-非對稱伸縮振,在1039 cm~(-1)處出現(xiàn)吸收峰是吡喃環(huán)的伸縮振動(dòng),可以推測這種多糖是吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)。(3)MFP-3分子量約為118.76 kDa,多糖含量達(dá)74.3%,硫酸基含量為1.8%,糖醛酸含量為61.7%。MFP-3主要含有Glc、Gal、Rha、GalA、Ara、GlcA,其摩爾比為47.4∶34.9∶36.1∶33.1∶19.9∶4.1,紅外分析顯示MFP-3在897 cm~(-1)處出現(xiàn)吸收峰,推測這種多糖含β-糖苷鍵。另外,三種多糖含有少量蛋白質(zhì)和核酸,并遇碘液均不變色,說明均不含連續(xù)α-(1→4)Glc鍵型。3.桑葚多糖的化學(xué)修飾。采用氧化降解法、硫酸酯化修飾法和羧甲基化修飾法對桑葚多糖(MFP-1、MFP-2和MFP-3)進(jìn)行分子修飾,共計(jì)得到9個(gè)修飾產(chǎn)物分別為:氧化降解產(chǎn)物(O-MFP-1、O-MFP-2和O-MFP-3)、硫酸酯化修飾產(chǎn)物(S-MFP-1、S-MFP-2和S-MFP-3)和羧甲基化修飾產(chǎn)物(C-MFP-1、C-MFP-2和C-MFP-3)。并測定各多糖的分子量、取代度(DS)和紅外光譜。結(jié)果表明,多糖氧化降解后,MFP-1分子量由20930 Da降到7460 Da,得率為30.4%;MFP-2分子量由51230 Da降到30310 Da,得率為17.7%;MFP-3分子量由118760 Da降到4189 Da,得率為21.3%,說明三種多糖均得到一定程度的降解。經(jīng)硫酸修飾后,MFP-1、MFP-2和MFP-3的DS的取代度分別為0.64、0.39和0.55,得率分別為45.9%、33.4%和52.1%。經(jīng)羧甲基化修飾后,MFP-1、MFP-2和MFP-3的DS分別為0.71、0.46和0.21,得率依次為74.2%、68.7%和73.6%。三種方法得率依次為:羧甲基化修飾硫酸化修飾氧化降解。經(jīng)紅外光譜分析:9種多糖衍生物均在3440 cm~(-1)和2927 cm~(-1)附近出現(xiàn)由-OH伸縮振動(dòng)和C-H伸縮振動(dòng)的吸收峰,這是多糖的特征吸收峰,說明修飾后的樣品保留了多糖的結(jié)構(gòu),硫酸酯化衍生物(S-MFP-1、S-MFP-2和S-MFP-3)在820 cm~(-1)附近出現(xiàn)吸收峰,說明多糖已被部分酯化。羧甲基化衍生物(C-MFP-1、C-MFP-2和C-MFP-3)多糖在1617 cm~(-1)和1423 cm~(-1)處出現(xiàn)新的吸峰,說明多糖已被部分羧甲基化。值得注意的是,C-MFP-1在848.21 cm~(-1)處出現(xiàn)新的吸收峰,848 cm~(-1)是吡喃糖的α型C-H振動(dòng)的特征吸收峰。說明C-MFP-1可能含有α型吡喃糖。4.桑葚多糖及其衍生物對ADH活性影響的研究。本研究以ADH激活率為指標(biāo),建立體外ADH活性評價(jià)模型,分別測定修飾前后的桑葚多糖對ADH活性的影響。計(jì)算分析結(jié)果顯示,修飾前后的桑葚多糖對ADH均有一定程度地激活作用,其中C-MFP-1(6.59±0.030 mg·mL~(-1))表現(xiàn)出對ADH有較高的激活能力,這可能與多糖的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性有關(guān),也可能與C-MFP-1中存在的α型吡喃糖有關(guān)。5.為進(jìn)一步研究桑葚多糖對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用及潛在機(jī)制,開展了桑葚多糖及其羧甲基化衍生物對化學(xué)性肝損傷的作用研究。首先建立小鼠急性酒精性肝損傷、刀豆蛋白A急性肝損傷和亞急性酒精性肝損傷模型,綜合MFP-1和C-MFP-1對血清中AST、ALT、LDH、TG、LDL-C、T-CHO、TBIL和肝臟中MDA、SOD、GSH-PX肝功能指標(biāo)的檢測以及病理切片的觀察,多角度、多層面分析桑葚多糖及其羧甲基化衍生物(MFP-1和C-MFP-1)對化學(xué)性肝損傷的作用。結(jié)果表明,MFP-1和C-MFP-1對化學(xué)性肝損傷都有一定的效果,其中預(yù)先服用C-MFP-1組與模型對照組對酒精性肝損傷模型的各生化指標(biāo)存在顯著性差異。推測桑葚多糖及其羧甲基化衍生物抗化學(xué)性肝損傷的主要作用機(jī)制可能為,通過降低血清AST、ALT、TG代謝,提高機(jī)體對酒精代謝所產(chǎn)生的活性氧自由基的清除能力;通過抑制肝臟中MDA生成,增加肝臟中SOD和GSH-PX含量,減少由酒精產(chǎn)生的脂質(zhì)物質(zhì),抑制脂質(zhì)過氧化。
【圖文】：

技術(shù)路線圖

圖 2-8 MFP-1，2 和 3 分子量的 HPLC 色譜圖Fig.2-8 Mecular weight of MFP-1, MFP-2 and MFP-3糖的單糖組成分析
【學(xué)位授予單位】：貴州師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：TS201.4;O629.12

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 童黃錦;;保肝口服液對化學(xué)性肝損傷的防治作用研究[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2016年51期

2 陳方軍;李俊;王佳佳;;玉屏風(fēng)多糖對小鼠化學(xué)性肝損傷的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年01期

3 李智;;三元葆片治療化學(xué)性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2010年09期

4 楊祚榮,盧振,李秋;靈芝菌絲體對化學(xué)性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2005年07期

5 李文立,趙敏,陳瑞儀,黃俊明;牡蠣粉對化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2003年06期

6 張河溪;魏巧容;郭震宇;郭耀榮;鄭琪;陳冠敏;;葆甘靈膠囊對化學(xué)性肝損傷保護(hù)功能的研究[J];海峽藥學(xué);2013年07期

7 陳秀錦;黃佳寧;陳冠敏;黃宗銹;;靈芝紅景天復(fù)方膠囊對化學(xué)性肝損傷輔助保護(hù)作用的研究[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

8 孫設(shè)宗;唐微;胡承江;孟新云;;維生素C和維生素E對小鼠化學(xué)性肝損傷的預(yù)防性保護(hù)作用[J];世界華人消化雜志;2007年14期

9 張敏;對化學(xué)性肝損傷有輔助性保護(hù)作用的保健食品研究進(jìn)展[J];四川食品與發(fā)酵;2005年01期

10 蔣偉哲,孔曉龍,黃仁彬,段小群,焦楊;龍眼參對小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[J];中國藥房;2004年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 孫麗萍;徐響;彭定利;杜夏;王馨;葛苗苗;;蜂花粉抗化學(xué)性肝損傷研究[A];2013年全國蜂產(chǎn)品市場信息交流會(huì)暨中國(浦東)蜂業(yè)博覽會(huì)論文集[C];2013年

2 劉陽;于勇;劉素清;范文今;謝韜;;生命核酸口服液對化學(xué)性肝損傷的輔助保護(hù)作用的研究[A];中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第五屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2000年

3 劉素清;劉陽;于勇;范文今;謝韜;;克勞克口服液對化學(xué)性肝損傷的輔助保護(hù)作用的研究[A];中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第五屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2000年

4 羅麗華;王若永;齊穎;韋四煌;楊昌林;詹皓;伊長榮;李彤;;復(fù)方葛根制劑的組方篩選及其對小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用[A];中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)臨床營養(yǎng)分會(huì)第十屆全國學(xué)術(shù)交流論文匯編[C];2005年

5 江海濤;吳京燕;程光宇;何強(qiáng)泰;;桑黃提取物對小鼠化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用的研究(摘要)[A];首屆藥用真菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

6 蔣英子;陳龍;潘道東;曹萌;;乳酸菌源有機(jī)硒對化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用機(jī)制研究[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國反芻動(dòng)物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

7 張白嘉;劉亞歐;楊亞斯;黃利;劉榴;;益肝靈分散片對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用[A];第十屆全國中藥藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

8 聶濤;楊學(xué)敏;胡瑜;陳浩凡;;養(yǎng)肝合劑對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用及30天喂養(yǎng)毒性試驗(yàn)研究[A];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2016/專集：國際數(shù)字醫(yī)學(xué)會(huì)數(shù)字中醫(yī)藥分會(huì)成立大會(huì)暨首屆數(shù)字中醫(yī)藥學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2016年

9 于勇;劉陽;范文今;謝韜;劉素清;;克勞克口服液抗疲勞作用和對化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用的研究[A];中國毒理學(xué)會(huì)第三屆全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文（摘要）集[C];2001年

10 胡承江;孫設(shè)宗;王玨;;硫酸鎂、維生素E對雄性小鼠化學(xué)性肝損傷的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 孫冠南;化學(xué)性肝損傷有幾人知？[N];廣東科技報(bào);2004年

2 吳一福;和肝湯可預(yù)防化學(xué)性肝損傷[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

3 本報(bào)記者 孫燕明;對化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能的保健食品豈能有效治療肝病[N];中國消費(fèi)者報(bào);2004年

4 本報(bào)記者 胡睿;護(hù)肝輔助產(chǎn)品加速換代[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2016年

5 ;你的肝臟還好嗎？[N];中國消費(fèi)者報(bào);2015年

6 王浩;暗示：抗癌廣告“醉翁之意不在酒”[N];中國工商報(bào);2004年

7 ;遼寧省政府科技廳 對大連珍奧產(chǎn)品科研成果鑒定意見[N];中國老年報(bào);2003年

8 受訪專家 呂澤田 中國蜂產(chǎn)品協(xié)會(huì)蜂膠專業(yè)委員會(huì)秘書長 本報(bào)記者 楚超;正本清源：蜂膠功效早已有權(quán)威論證[N];保健時(shí)報(bào);2018年

9 本報(bào)記者 富子梅;輔助降血壓等功能被取消[N];人民日報(bào);2012年

10 中國蜂產(chǎn)品協(xié)會(huì)供稿;加強(qiáng)蜂產(chǎn)品開發(fā) 滿足人們需求[N];保健時(shí)報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 林景超;化學(xué)性肝損傷及肝癌的代謝組學(xué)研究[D];上海交通大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王杏;桑葚多糖分子結(jié)構(gòu)修飾與其對小鼠化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用的研究[D];貴州師范大學(xué);2018年

2 朱慧;灰樹花胞外多糖預(yù)防化學(xué)性肝損傷的研究[D];天津科技大學(xué);2010年

3 肖增平;絞股藍(lán)多糖對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用[D];山東大學(xué);2008年

4 劉娟;當(dāng)歸多糖的分離純化及對不同化學(xué)性肝損傷的干預(yù)作用[D];武漢大學(xué);2005年

5 石立強(qiáng);高活性小牛血去蛋白提取物對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];北華大學(xué);2017年

6 段小群;YLS對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2001年

7 李英哲;延中牌景加膠囊化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用的研究[D];延邊大學(xué);2006年

8 游莉;咖啡酸苯乙酯衍生物對化學(xué)性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

9 王占一;長白山道地藥材肝保護(hù)作用的研究[D];延邊大學(xué);2007年

10 徐菁陽;解酒功能飲料的質(zhì)量控制方法及對化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2708557