本文關(guān)鍵詞：以銅納米簇為熒光探針的分析方法研究

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【摘要】：傳統(tǒng)的有機(jī)熒光染料已廣泛地應(yīng)用于熒光生物分析中。但有機(jī)熒光染料存在生物相容性較差、光漂白嚴(yán)重等弊端。熒光金屬納米簇因?yàn)槠湟子诤铣?水溶性好,毒性低,生物相容性好,在熒光分析中具有很好的應(yīng)用前景。本論文以銅納米簇作為熒光探針,探索了其在生物傳感分析領(lǐng)域的應(yīng)用。具體的工作內(nèi)容如下：一.以銅納米簇為熒光探針靈敏檢測尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是一種催化從含尿嘧啶的DNA上釋放尿嘧啶的堿基切除修復(fù)酶。對UDG活性的研究對于進(jìn)一步地了解DNA的損傷修復(fù)以及更好地發(fā)展分子生物學(xué)的相關(guān)研究有著重要的意義。在本研究中,我們設(shè)計(jì)了含有尿嘧啶的雙鏈DNA為UDG酶的底物,該底物由聚AT-TA的DNA序列組成,也可以作為銅納米簇合成時的高效模板。在此雙鏈DNA模板存在下,二價銅離子與抗壞血酸反應(yīng)可生成具有強(qiáng)熒光發(fā)射的銅納米簇(CuNCs)。當(dāng)體系加入UDG之后,尿嘧啶從雙鏈DNA上被移除,使雙鏈DNA解旋為單鏈DNA,而單鏈DNA不是CuNCs的有效模板,銅納米簇很難形成,體系熒光強(qiáng)度很弱�？梢酝ㄟ^體系熒光強(qiáng)度的變化實(shí)現(xiàn)對UDG活性的檢測。本研究詳細(xì)地優(yōu)化探針的序列(選擇尿嘧啶的在雙鏈DNA上的個數(shù)以及排布位置)和反應(yīng)條件,從而提高了對UDG檢測的靈敏度。本法檢測UDG酶的檢出限為0.0005 U/mL。該方法用于對細(xì)胞裂解液中的UDG活性的檢測,也用于對UDG的抑制劑(UGI)抑制能力的研究。本方法簡單快速,而且靈敏,為檢測UDG的活性提供了一種熒光新方法。二.以銅納米簇為熒光探針測定谷胱甘肽本文以聚AT-TA序列的DNA作為合成銅納米簇的高效模板,當(dāng)體系中加入谷胱甘肽這種巰基化合物之后,體系的熒光強(qiáng)度減弱。據(jù)此,建立了一種熒光測定谷胱甘肽的方法。我們探討了谷胱甘肽淬滅此體系熒光的機(jī)理。該方法測定谷胱甘肽的線性關(guān)系范圍為0.01 gM～1μM,檢出限為3.9 nM。與報道的金屬納米簇為熒光探針檢測谷胱甘肽的方法,本法的靈敏度顯著提高,檢出限低了將近三個數(shù)量級。
【關(guān)鍵詞】：熒光分析 銅納米簇 尿嘧啶-DNA糖基化酶 酶抑制劑 谷胱甘肽
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第1章 綜述7-21
• 1.1 金屬納米簇概述7
• 1.2 金屬納米簇的合成方法7-13
• 1.2.1 金納米簇的合成7-9
• 1.2.2 銀納米簇的合成9-10
• 1.2.3 鉑納米簇的合成10
• 1.2.4 銅納米簇的合成10-13
• 1.3 金屬納米簇的應(yīng)用13-20
• 1.3.1 生物小分子的檢測13-15
• 1.3.2 金屬離子的檢測15-16
• 1.3.3 核酸檢測16-18
• 1.3.4 蛋白質(zhì)檢測18-20
• 1.4 本論文選題目的和意義20-21
• 第2章 研究報告21-53
• 2.1 以銅納米簇為熒光探針靈敏檢測尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性21-41
• 2.1.1 引言21-22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)部分22-25
• 2.1.3 結(jié)果與討論25-41
• 2.1.4 小結(jié)41
• 2.2 以銅納米簇?zé)晒馓结槣y定谷胱甘肽41-53
• 2.2.1 引言41-43
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)部分43-44
• 2.2.3 結(jié)果與討論44-51
• 2.2.4 小結(jié)51-53
• 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-69
• 致謝69-71
• 攻讀學(xué)位期間研究成果71

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1 王姍姍;;小分子熒光探針在硫醇檢測中的最新研究進(jìn)展[J];科技信息;2010年23期

2 向雨秘;龍少波;朱R，

本文編號：1094875