本文關(guān)鍵詞：HaNACl基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯研究

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【摘要】：馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)作為寧夏優(yōu)勢(shì)特色產(chǎn)業(yè)之一,對(duì)于促進(jìn)當(dāng)?shù)貐^(qū)域經(jīng)濟(jì)健康發(fā)展起著重要的支撐作用。但馬鈴薯種植區(qū)多位于無(wú)灌溉、生態(tài)脆弱地區(qū),干旱、鹽漬等非生物脅迫嚴(yán)重影響馬鈴薯的產(chǎn)量與品質(zhì)。植物的抗逆性屬于復(fù)雜的數(shù)量性狀,加之馬鈴薯屬于同源四倍體植物,遺傳背景狹窄,常規(guī)雜交育種短時(shí)期內(nèi)很難創(chuàng)制出優(yōu)良品種�；蚬こ逃N技術(shù)的發(fā)展,為改良馬鈴薯抗逆能力,創(chuàng)制抗逆新品種提供了有效的途徑。NAC轉(zhuǎn)錄因子參與植物形態(tài)建成,通過(guò)與DNA元件的結(jié)合調(diào)控下游一系列基因的表達(dá),對(duì)非生物脅迫應(yīng)答,尤其是對(duì)鹽、干旱脅迫發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。因此,利用基因工程技術(shù)改良馬鈴薯的抗逆性,創(chuàng)制抗逆新品種具有重要研究意義。本實(shí)驗(yàn)以我區(qū)主栽馬鈴薯品種“隴薯3號(hào)”、“大西洋”、“費(fèi)烏瑞它”、“夏波蒂”、“青薯168”和“黑美人”的葉片和莖段為材料,建立優(yōu)化了離體再生體系和微型薯高效液體培養(yǎng)體系；采用正交設(shè)計(jì)研究了遺傳轉(zhuǎn)化體系中各影響因素的最佳水平,并確立了最優(yōu)組合。在此基礎(chǔ)上,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將前期克隆得到的梭梭(Haloxylon ammodendron) HaNACl基因進(jìn)行了馬鈴薯轉(zhuǎn)化、陽(yáng)性植株鑒定和抗逆株系篩選研究。主要研究結(jié)果如下：1.以6個(gè)品種的葉片和莖段為外植體,研究了植物激素組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率、愈傷組織分化率及出苗率的影響程度。結(jié)果表明：MS培養(yǎng)基中添加01 mg·L-12,4-D+1.0mg·L-16-BA對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)效果最佳,6個(gè)品種葉片愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)73.3%-93.3%,莖段愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)90.0%-100%。添加0.5 mg·L-11GA+2 mg·L-16-BA+3mg·L-1ZT可顯著地促進(jìn)莖段愈傷組織分化及出苗,其中,“隴薯3號(hào)”、“大西洋”的分化效果最佳,出苗率分別達(dá)到了175.0%和140.0%；2.確立了MS培養(yǎng)基中添加2mg·L-16-BA為試管薯誘導(dǎo)、生長(zhǎng)的最佳液體培養(yǎng)體系。與固體培養(yǎng)體系相比,該體系大大縮短了誘導(dǎo)周期,結(jié)薯數(shù)量多且直徑大。同時(shí),研究并建立了以試管薯薄片為外植體的馬鈴薯高效受體體系,再生周期僅為20-30d。薯片在培養(yǎng)基(MS+1.0 mg·L-1ZT+1.0mg·L-1IAA+0.5mg·L-16BA+0.2mg·L-1GA)上出苗效果最好,其中“青薯168”出苗率最高,達(dá)到110%,“黑美人”次之為77.8%。3.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將HaNAC1基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯,進(jìn)行4因素3水平L9(34)的正交試驗(yàn),研究結(jié)果表明,品種為“大西洋”,卡那霉素選擇濃度30mg·L-1、菌液濃度OD600 10,浸染時(shí)間15 min,為最佳轉(zhuǎn)化方案,轉(zhuǎn)化率為35.9%。4.實(shí)驗(yàn)共篩選出220株抗性芽,112株通過(guò)了生根篩選,經(jīng)PCR及RT-PCR檢測(cè)：轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系共55株,陽(yáng)性轉(zhuǎn)化率達(dá)到49.1%；從中抽取7株進(jìn)一步進(jìn)行PCR-Southern blot,結(jié)果驗(yàn)證外源HaNACl基因成功的整合到受體材料基因組中。5.以PEG-6000和NaCl分別人工模擬旱脅迫和鹽脅迫,對(duì)受體材料和陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行形態(tài)、生長(zhǎng)指標(biāo)調(diào)查。結(jié)果表明,有6株陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因株系的抗旱性和耐鹽性顯著高于對(duì)照。生理檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步表明在逆境脅迫處理下,外源HaNACl基因的導(dǎo)入能顯著地提高馬鈴薯轉(zhuǎn)基因植株的抗逆性。
【關(guān)鍵詞】：馬鈴薯 HaNACl基因 遺傳轉(zhuǎn)化 陽(yáng)性株系
【學(xué)位授予單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S532
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-19
• 1.1 研究背景9
• 1.2 干旱對(duì)馬鈴薯生產(chǎn)的影響9-11
• 1.3 NAC轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展11-15
• 1.4 馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化體系影響因素15-16
• 1.5 馬鈴薯抗逆基因工程研究進(jìn)展16-17
• 1.6 本研究的目的意義和技術(shù)路線17-19
• 第二章 抗逆基因的選擇與植物表達(dá)載體的構(gòu)建19-23
• 2.1 材料與試劑19-20
• 2.2 方法20-22
• 2.3 結(jié)果22
• 2.4 討論22-23
• 第三章 馬鈴薯轉(zhuǎn)化受體體系的建立研究23-31
• 3.1 材料與試劑23
• 3.2 方法23-25
• 3.3 結(jié)果25-30
• 3.4 討論30-31
• 第四章 馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立研究31-36
• 4.1 材料31-32
• 4.2 方法32-33
• 4.3 結(jié)果33-34
• 4.4 討論34-36
• 第五章 轉(zhuǎn)基因植株的分子生物學(xué)檢測(cè)及抗旱耐鹽性鑒定36-53
• 5.1 材料與試劑36
• 5.2 方法36-42
• 5.3 結(jié)果42-51
• 5.4 討論51-53
• 第六章 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 致謝60-61
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷61
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文61

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1 黃鵬祥,楊孝楫,葉嵐,陳國(guó)愛(ài);有關(guān)馬鈴薯退化及“二季作”栽培的幾個(gè)問(wèn)題——致衣服平等同志[J];中國(guó)馬鈴薯;2001年05期

2 侯利霞,鐵雙貴,丁勇,張?zhí)觳?馬鈴薯脫毒微型薯[J];河南農(nóng)業(yè);2001年09期

3 李貴吉,羅紹德;馬鈴薯脫毒良種多次掰苗移栽擴(kuò)繁[J];云南農(nóng)業(yè);2001年01期

4 李瑛;馬鈴薯脫毒苗在快繁生產(chǎn)中的污染問(wèn)題及預(yù)防措施[J];青海農(nóng)林科技;2004年02期

5 陳永波,李衛(wèi)東,趙清華,鐘剛瓊;營(yíng)養(yǎng)元素的缺乏與過(guò)量對(duì)馬鈴薯脫毒苗生長(zhǎng)的影響[J];中國(guó)馬鈴薯;2004年05期

6 杜瑞霞;;臨夏州馬鈴薯生產(chǎn)現(xiàn)狀、存在問(wèn)題及對(duì)策[J];甘肅農(nóng)業(yè);2006年08期

7 姜秀清;;馬鈴薯脫毒扦插生產(chǎn)微型薯技術(shù)要點(diǎn)[J];甘肅農(nóng)業(yè)科技;2007年09期

8 禹代林;邊巴;桑布;范春捆;;馬鈴薯優(yōu)質(zhì)高效栽培技術(shù)[J];西藏科技;2008年03期

9 祝元甲;;不同處理對(duì)馬鈴薯脫毒瓶苗分枝產(chǎn)生的影響[J];農(nóng)技服務(wù);2009年02期

10 劉威;田春雨;劉晶晶;;馬鈴薯脫毒苗的引進(jìn)及擴(kuò)繁[J];農(nóng)業(yè)科技與裝備;2010年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 喬海明;侯志臣;李振樹(shù);劉艷紅;謝世君;;馬鈴薯脫毒瓶苗分枝產(chǎn)生原因及預(yù)防方法[A];中國(guó)作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2002年年會(huì)論文集[C];2002年

2 師理;;抗生素對(duì)馬鈴薯脫毒苗快繁效應(yīng)的影響[A];馬鈴薯產(chǎn)業(yè)與糧食安全（2009）[C];2009年

3 張易;楊清;;野生型馬鈴薯微型薯誘導(dǎo)的試驗(yàn)研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 何云昆;李云海;張仲凱;方琦;吳毅歆;李先平;;云南省脫毒馬鈴薯的研究及示范推廣[A];中國(guó)馬鈴薯學(xué)術(shù)研討文集（1996）[C];1996年

5 王淑菊;陳伊里;馬立偉;;氣霧栽培促進(jìn)馬鈴薯開(kāi)花的研究[A];中國(guó)作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2002年年會(huì)論文集[C];2002年

6 任長(zhǎng)忠;姜成模;郭來(lái)春;鄧路光;沙莉;魏黎明;;麥茬復(fù)種馬鈴薯試驗(yàn)研究[A];中國(guó)作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2002年年會(huì)論文集[C];2002年

7 孟樹(shù)蘭;張和平;佘小玲;時(shí)芝文;鄧?yán)^武;;無(wú)病毒馬鈴薯種苗生產(chǎn)技術(shù)改進(jìn)[A];中國(guó)作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2002年年會(huì)論文集[C];2002年

8 邱光若;李壽如;何儒;王靜剛;馬金壯;;不同生根劑對(duì)馬鈴薯脫毒苗剪枝扦插的影響[A];2007年中國(guó)馬鈴薯大會(huì)（中國(guó)馬鈴薯專(zhuān)業(yè)委員會(huì)年會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)）、全國(guó)馬鈴薯免耕栽培現(xiàn)場(chǎng)觀摩暨產(chǎn)業(yè)發(fā)展研討會(huì)論文集[C];2007年

9 文國(guó)宏;;控制馬鈴薯脫毒苗夏季徒長(zhǎng)的適宜藥劑選擇研究[A];中國(guó)作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專(zhuān)業(yè)委員會(huì)1999年年會(huì)論文集[C];1999年

10 孫曉光;蒙美蓮;李長(zhǎng)青;王曉東;;混合鹽脅迫對(duì)馬鈴薯脫毒苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響[A];馬鈴薯產(chǎn)業(yè)與科技扶貧（2011）[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 本報(bào)記者 烏云斯琴;劉滇生：確立馬鈴薯主糧地位[N];人民政協(xié)報(bào);2010年

2 ;2010年馬鈴薯脫毒微型薯生產(chǎn)補(bǔ)貼企業(yè)（單位）擬安排意見(jiàn)表[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2010年

3 通訊員 王健;六師馬鈴薯脫毒技術(shù)取得新突破[N];兵團(tuán)日?qǐng)?bào)(漢);2013年

4 牛彥君;山丹脫毒馬鈴薯形成規(guī)模[N];甘肅日?qǐng)?bào);2003年

5 微風(fēng);馬鈴薯脫毒技術(shù)[N];河南科技報(bào);2004年

6 李高峰;會(huì)寧引進(jìn)馬鈴薯脫毒育苗技術(shù)[N];白銀日?qǐng)?bào);2007年

7 記者 趙俊林;市農(nóng)科院馬鈴薯脫毒示范種植成功[N];巴彥淖爾日?qǐng)?bào)(漢);2007年

8 記者 任平;我省大力開(kāi)展馬鈴薯脫毒技術(shù)推廣[N];山西科技報(bào);2007年

9 本報(bào)記者 楊曉東;我省馬鈴薯選育取得重大進(jìn)展[N];云南科技報(bào);2007年

10 記者 趙懷斌;我州馬鈴薯良種補(bǔ)貼項(xiàng)目通過(guò)驗(yàn)收[N];民族日?qǐng)?bào);2008年

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1 李爽;玉米秸稈基質(zhì)對(duì)馬鈴薯原原種繁育的影響[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 程永芳;HaNACl基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯研究[D];寧夏大學(xué);2016年

3 孫曉光;混合鹽脅迫下馬鈴薯脫毒苗生理生化特性的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 郭晶;不同添加物對(duì)馬鈴薯脫毒苗的影響及酶活分析[D];大連工業(yè)大學(xué);2013年

5 沈艷芬;恩施州馬鈴薯脫毒原種一年制生產(chǎn)技術(shù)研究[D];長(zhǎng)江大學(xué);2012年

6 孫琦;馬鈴薯脫毒苗的RT-PCR檢測(cè)技術(shù)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 徐君;馬鈴薯種質(zhì)資源慢生長(zhǎng)保存研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

8 王朝霞;鈣、鉀營(yíng)養(yǎng)對(duì)NaCl脅迫下馬鈴薯生長(zhǎng)和生理特性的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

9 吳祥華;馬鈴薯StTm-2基因的克隆和表達(dá)分析[D];重慶大學(xué);2007年

10 盧泳全;氣霧法生產(chǎn)馬鈴薯脫毒小薯效果的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

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本文編號(hào)：900216