發(fā)布時(shí)間：2020-09-19 16:46

　　 目的了解我國(guó)膿腫分枝桿菌復(fù)合群(MABC)在非結(jié)核分枝桿菌(NTM)中的構(gòu)成分布;弄清MABC的耐藥現(xiàn)狀；初步探索其對(duì)克拉霉素的耐藥機(jī)制及基因分型。為我國(guó)MABC肺病的治療提供依據(jù)。方法1、對(duì)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室2011年1月-2012年12月凍存的490株經(jīng)對(duì)硝基苯甲酸(PNB)初步鑒定為NTM的臨床菌株給予16S rRNA、 hsp65、rpoB和ITS多靶位基因PCR-測(cè)序的分子菌種鑒定。2、用微孔板Alamar blue顯色法檢測(cè)MABC對(duì)16種藥物的最低抑菌濃度(MIC)。3、隨機(jī)挑選出部分菌株,進(jìn)一步用棋盤稀釋法作兩藥的體外聯(lián)合藥敏試驗(yàn)。4、對(duì)藥敏試驗(yàn)延長(zhǎng)培養(yǎng)至14天,觀察MABC對(duì)克拉霉素的誘導(dǎo)耐藥情況,并對(duì)耐藥相關(guān)基因rrl及erm(41)進(jìn)行測(cè)序,研究克拉霉素耐藥表型和基因型的關(guān)系。5、對(duì)所有的MABC菌株進(jìn)行可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列(VNTR)基因分型。結(jié)果1、鑒定結(jié)果NTM452株,其中MABC100株,占22.1%,為NTM的第二位：100株MABC中,膿腫分枝桿菌75株,馬賽分枝桿菌25株。2、100株MABC的體外藥敏結(jié)果顯示：耐藥率較低的5種藥為：利奈唑胺、阿米卡星、克拉霉素、阿奇霉素、替加環(huán)素,耐藥率分別為2%、7%、9%、15%、20%;耐藥率較高的5種藥依次為：美羅培南、左氧氟沙星、加替沙星、米諾環(huán)素、復(fù)方新諾明,耐藥率分別為：85%、79%、73%、70%、43%。莫西沙星、頭孢西汀、亞胺培南、妥布霉素的耐藥率居中。氯法齊明也有較低的MIC。3、28株菌(19株膿腫分枝桿菌、9株馬賽分枝桿菌)的聯(lián)合藥敏結(jié)果顯示：克拉霉素+莫西沙星對(duì)馬賽分枝桿菌協(xié)同效應(yīng)最好(88.9%),但對(duì)膿腫分枝桿菌協(xié)同效應(yīng)最差(5.2%)。不論菌種,利奈唑胺+阿米卡星、替加環(huán)素+莫西沙星的協(xié)同效應(yīng)較好,分別為42.9%、57.1%。4、75株膿腫分枝桿菌中,克拉霉素誘導(dǎo)耐藥株51株,占68%；敏感株19株,占25.4%。25株馬賽分枝桿菌無(wú)克拉霉素誘導(dǎo)耐藥,敏感株21株,占84%。兩者有顯著性差異；9株克拉霉素獲得性耐藥菌株中,rrl突變的菌株6株,突變率66.7%;所有的膿腫分枝桿菌erm(41)序列完整,所有的馬賽分枝桿菌,erm(41)序列有短缺;75株膿腫分枝桿菌,T28序列型菌株57株、C28序列型菌株18株。25株馬賽分枝桿菌皆為T28序列型。5、VNTR各位點(diǎn)有明顯基因多態(tài)性,分辨率指數(shù)為0.996,聚類分析呈3個(gè)基因群。結(jié)論MABC為我國(guó)較為常見的NTM,耐藥率高,可用藥物有限,治療困難的主要菌種為膿腫分枝桿菌,根本的原因在于克拉霉素誘導(dǎo)耐藥。準(zhǔn)確的菌種鑒定、可靠的藥敏試驗(yàn)對(duì)指導(dǎo)MABC肺病的臨床治療有重要意義。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R446.5


本文編號(hào)：2822761