【摘要】：目的：了解我院2012-2014年碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌的耐藥情況,初步探討碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌的耐藥機制,同時進行分子流行病學調(diào)查。方法：收集我院2012年1月至2014年12月VITEK2 Compact全自動細菌鑒定和藥敏檢測系統(tǒng)分離鑒定出的碳青霉烯類非敏感肺炎克雷伯菌非重復菌株,采用微量肉湯稀釋法對碳青霉烯類抗生素的藥敏結(jié)果進行復核；通過PCR及測序方法檢測碳青霉烯酶基因blaKPC、blaSME、blaVIM、blaIMP、blaNDM-1、blaOXA-48,超廣譜p內(nèi)酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs)基因blaTEM、6blaSH、. blaCTX-M-1'、blaCTX-M-9',喹諾酮類基因gnrA、gnrB、qnrC、gnrD、gnrS、 aac(6')-Ib-cr,氨基糖苷類基因aac(6')-Ib、armA、rmtB,以及Ⅰ類整合子Intl-1和膜孔蛋白基因ompK35、ompK36,采用脈沖場凝膠電泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)、多位點序列分型(Multiple Locus Sequence Typing,MLST)進行分子流行病學調(diào)查。結(jié)果：1、我院2012年1月-2014年12月共分離到2131株肺炎克雷伯菌,其中非重復碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌有56株,占、2.63%。菌株分布特點提示,標本分布主要以尿液(18株,32.14%)和痰液(14株,25.00%)為主,病房分布主要以外科病房(29株,51.79%)和ICU病房(14株,25.00%)為主。3、藥敏表型分析結(jié)果顯示,56株(100%)對厄他培南不敏感,27株(48.21%)對亞胺培南不敏感,21株(37.50%)對美羅培南不敏感。82.14%(46/56)的菌株對一種以上頭孢菌素耐藥。氨基糖苷類抗生素和喹諾酮類抗生素的耐藥率分別為69.64%(39/56)和64.29%(36/56)。4、耐藥基因檢測結(jié)果顯示,10株(17.86%)菌檢測到碳青霉烯酶基因：blaNDM-1(6/56,10.71%)、bla1MP-4(1/56,1.79%).blaKPC-2(3/56,5.36%)；52株(92.86%)菌檢測到ESBLs基因：blaTEM(20/56, 35.71％)、blaSHV(49/56,87.5%)、blaCTX-M(30/56,53.57%):39株(69.64%)菌中檢測到喹諾酮類基因：gnrB(27/56,48.21％)、gnrS (10/56,17.86%).aac(6')-Ib-cr(16/56,28.57%)；34株(60.71％)菌中檢測到氨基糖苷類基因：aac(6')-Ib(25/56,44.64%).armA(10/56, 17.85%)、rmtB(3/56,5.36%);37株(66.07%)菌檢測到Ⅰ類整合子(Intl-1);3株(5.36%)菌ompK35基因缺失,4株(7.14%)菌ompK36基因缺失,未檢測到兩種膜孔蛋白基因同時缺失的情況。值得注意的是,7株膜孔蛋白基因缺失的菌株中,有4株菌的厄他培南最低抑菌濃度(MIC)明顯增高(128μg/ml或256μg/ml)。5、在本研究中,10株碳青霉烯基因陽性的菌株中,ESBLs基因、喹諾酮基因、氨基糖苷類基因和Ⅰ類整合子的共同表達率分別為90%、100%、80%和80%,膜孔蛋白基因缺失率為20%；52株攜帶ESBLs基因的菌株中,喹諾酮類、氨基糖苷類和整合子基因的陽性率分別為71.15%、63.46%和67.31%,膜孔蛋白基因缺失率為11.54%。我們首次發(fā)現(xiàn)在兩株菌中存在新基因組合：blaKPC-2、blaSHV、 blaCTX-M-15,、aac(6')-Ib-cr、aac(6'-Ib和Intl-1共同表達且合并ompK35基因缺失。6、PFGE結(jié)果顯示：56株非敏感菌分為52個型別,命名為1-52型。45型包括3個亞型45a、45b、45c。MLST結(jié)果提示：碳青霉烯酶基因陽性的10株菌屬于7個ST型ST11、ST15、ST29、ST290. ST323、ST412和ST1641。結(jié)論：1、我院2012-2014年碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌厄他培南非敏感率較高,且MIC值呈明顯上升趨勢,大部分菌株表現(xiàn)為多重耐藥；2、碳青霉烯酶基因陽性率不高,ESBLs基因高表達合并膜孔蛋白基因缺失可能是我院肺炎克雷伯菌碳青霉烯類抗生素非敏感的主要機制；多種耐藥基因共同表達和Ⅰ類整合子高表達可能與多重耐藥有關；3、菌株來源以尿液和痰液為主,且主要分離自外科和ICU病房,分子流行病學顯示具有克隆多樣性。
【圖文】：

6林碳青霉片奧非毅感筒的標本分布特征

圖1.2，株峨
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R446.5

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本文編號：2519297