本文選題：混合DNA-STR分型 + 限制性組合分析法��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 目的:通過(guò)制備不同混合比例的模擬混合DNA,利用混合DNA分型中的峰高或峰面積信息,采用一定的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)建立在峰高或峰面積基礎(chǔ)上各基因座的表型組合進(jìn)行分析,篩選出合理的表型組合,建立限制性組合分析法對(duì)混合DNA分型的結(jié)果進(jìn)行解釋,從而對(duì)男/女兩人混合DNA分型的組分來(lái)源進(jìn)行認(rèn)定。并通過(guò)實(shí)際案例的驗(yàn)證,對(duì)建立的分析法在法醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的適用范圍進(jìn)行探索,為解決法醫(yī)學(xué)應(yīng)用中男/女兩人混合DNA分型結(jié)果的解釋提供科學(xué)合理的途徑。 方法:選擇AB-YfilerTM試劑盒中007陽(yáng)性對(duì)照品作為已知男性DNA,選擇AB-IdentifilerTM試劑盒中9947A陽(yáng)性對(duì)照品作為已知女性DNA(兩者濃度均為0.1ng/μl)。制備8個(gè)梯度比例的25例常量和不同混合比例不同混合DNA總模板量的19例低拷貝男/女兩人模擬混合DNA(每個(gè)梯度比例同時(shí)做三次平行試驗(yàn)),應(yīng)用雜合型均衡比和混合比兩個(gè)參數(shù),通過(guò)性別基因座估計(jì)男/女兩人混合DNA中男性DNA所占的比例,對(duì)在峰高(峰面積)信息基礎(chǔ)上各基因座的表型組合進(jìn)行限制性的分析,篩選出合理的表型組合,建立限制性組合分析法。對(duì)男性組分混合比為95%、50%、5%的9個(gè)模擬混合樣本的峰高和峰面積信息分別進(jìn)行分析,比較其在限制性組合分析法中的應(yīng)用有無(wú)差別。通過(guò)12例常量和5例低拷貝男/女兩人混合DNA案件對(duì)建立的分析法進(jìn)行驗(yàn)證,觀察分析結(jié)果。 對(duì)混合DNA分型中出現(xiàn)的一個(gè)等位基因缺失、兩個(gè)等位基因缺失及低拷貝DNA分型中等位基因缺失三種類型,參考Peter Gill推薦的相應(yīng)的量化公式[2]進(jìn)行似然率(LR)計(jì)算。 結(jié)果:25例模擬常量混合DNA分析的結(jié)果顯示:3例混合樣本檢出的基因座數(shù)為15個(gè)(檢出率100%),5例檢出數(shù)為14個(gè)(檢出率93%),4例檢出數(shù)為13個(gè)(檢出率87%), 6例檢出數(shù)為12個(gè)(檢出率80%),3例檢出數(shù)為11個(gè)(檢出率73%),最低檢出數(shù)為8個(gè)(檢出率53%)僅1例;在男性組分混合比為95%的三次重復(fù)混合樣本中,分離得到的男性DNA分型依次出現(xiàn)2個(gè)、1個(gè)和4個(gè)等位基因缺失,其余混合樣本均無(wú)缺失;6例混合樣本出現(xiàn)等位基因的錯(cuò)判,其中5例樣本錯(cuò)判數(shù)1個(gè)基因座、1例錯(cuò)判2個(gè)基因座,6例中的3例均為男性組分混合比為30%的樣本;25例混合樣本的似然率(LR)值均達(dá)到14個(gè)數(shù)量級(jí)以上。19例模擬低拷貝混合DNA分析的結(jié)果顯示:1例低拷貝混合樣本的檢出基因座數(shù)為12個(gè)(檢出率80%),1例檢出數(shù)為11個(gè)(檢出率73%),最低檢出基因座數(shù)為3個(gè)(檢出率20%)共4例;6例樣本出現(xiàn)等位基因缺失,缺失集中在男性混合比低于20%或混合DNA模板量為100pg的樣本中;18例樣本出現(xiàn)等位基因錯(cuò)判;同一混合比的三次重復(fù)樣本間LR值差別多數(shù)在6個(gè)數(shù)量級(jí)以內(nèi)。 選擇峰高與峰面積信息進(jìn)行混合DNA的分析在檢出基因座數(shù)、等位基因缺失數(shù)和錯(cuò)判基因座數(shù)三方面無(wú)明顯差別。 17例混合DNA案件驗(yàn)證的結(jié)果顯示:12例常量混合DNA案件中,4例案件檢出基因座數(shù)為15個(gè),2例檢出數(shù)為14個(gè),1例檢出數(shù)為13個(gè),2例檢出數(shù)為12個(gè),2例檢出數(shù)為11個(gè),最低檢出數(shù)為10個(gè)僅l例;5例案件出現(xiàn)等位基因缺失,其中4例均缺失1個(gè)基因座、1例缺失3個(gè)基因座;12例案件均無(wú)等位基因錯(cuò)判。5例低拷貝混合DNA案件中,最高檢出基因座數(shù)為9個(gè),最低檢出數(shù)僅為3個(gè);僅1例出現(xiàn)缺失現(xiàn)象;錯(cuò)判基因座數(shù)共10個(gè)。 結(jié)論:結(jié)合44例模擬混合DNA和17例混合DNA案件的分析,建立的限制性組合分析法的適用范圍是:混合DNA分型的15個(gè)基因座中最高等位基因條帶的相對(duì)熒光強(qiáng)度應(yīng)大于1000rfu,且混合比大于30%的男/女兩人混合DNA。峰高或峰面積信息均可進(jìn)行分析。在低拷貝混合DNA分析中,由于等位基因錯(cuò)判現(xiàn)象的發(fā)生無(wú)法進(jìn)行量化計(jì)算,該分析法在此應(yīng)用受到限制。
[Abstract]:Objective : To establish a reasonable phenotypic combination by using the peak height or peak area information in the mixed DNA typing by preparing the mixed DNA with different mixing ratios . The results of the typing of mixed DNA based on the peak height or peak area were analyzed by using a certain parameter standard . The application of the established analytical method in forensic medical application was explored through the verification of practical cases . The method provided scientific and reasonable way for solving the interpretation of the mixed DNA typing of male / female in forensic application .



Methods : In the AB - YfilerTM kit , 007 positive control was selected as the known male DNA , and the positive control article in AB - IdentifilerTM kit was selected as the known female DNA ( both concentrations were 0.1 ng / 渭l ) .



The deletion of one allele , deletion of two alleles and deletion of alleles in the low copy DNA typing were performed on the mixed DNA typing , and the likelihood ratio ( LR ) was calculated with reference to the corresponding quantization formula ( 2 ) recommended by Peter Gill .



Results : The results of DNA analysis of 25 cases of mixed samples showed that the number of loci detected in 3 cases was 15 ( detection rate was 100 % ) , the number of 5 cases was 14 ( the detection rate was 93 % ) , the number of 6 cases was 12 ( the detection rate was 73 % ) , the number of the remaining mixed samples was 11 ( the detection rate was 73 % ) .



There was no significant difference in the number of loci , the number of alleles and the number of misjudgment loci .



Of the 17 cases of mixed DNA , the number of loci in 4 cases was 15 , the number of 2 cases was 14 , the number of detection was 13 , the number of 2 cases was 12 , the number of 2 cases was 11 , the lowest detection number was 10 , and 5 cases had no allelic mismatch .



Conclusion : According to the analysis of 44 cases of mixed DNA and 17 cases of mixed DNA , the application range of the restriction combination analysis method is that the relative fluorescence intensity of the highest allele band in 15 loci of mixed DNA typing should be greater than 1000rfu , and the mixed DNA of the male / female two persons with the mixing ratio greater than 30 % . The peak height or peak area information can be analyzed . In the low copy mixed DNA analysis , the quantitative calculation cannot be performed due to the occurrence of the allelic mismatch , and the analysis method is limited in this application .
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：D919

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本文編號(hào)：1995100