發(fā)布時(shí)間：2018-03-17 03:16

  本文選題：亞急性甲基苯丙胺中毒W(wǎng)istar大鼠模型　切入點(diǎn)：酪氨酸羥化酶　出處：《昆明醫(yī)學(xué)院》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的:建立亞急性甲基苯丙胺中毒大鼠模型(Rat Subacute MethamphetamineIntoxication Model),觀察亞急性MA中毒大鼠行為學(xué)改變和腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)毒性的變化,探討亞急性MA中毒大鼠行為學(xué)改變的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)以及MA中毒多巴胺能神經(jīng)毒性的損傷機(jī)制。 方法:腹腔注射甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)建立雄性Wistar大鼠亞急性MA中毒模型90只,隨機(jī)分為對(duì)照組(n=30只)、低劑量組(n=30只)和高劑量組(n=30只)。實(shí)驗(yàn)組分別腹腔注射MA10mg/kg和20mg/kg,給藥時(shí)間為20:00時(shí),qd×4d;對(duì)照組相應(yīng)給予同等劑量的生理鹽水。觀察并記錄大鼠刻板行為以及條件位置偏愛(ài)性結(jié)果。分別于末次給藥后1天,7天,14天處死實(shí)驗(yàn)大鼠,用抗酪氨酸羥化酶(tyrosinehVdroxylase,TH)和抗多巴胺-β-羥化酶(抗DBH)單克隆抗體,行免疫組化(S-P法),聯(lián)合標(biāo)記中腦黑質(zhì)致密區(qū)(SNC)、中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)、前額葉皮質(zhì)(PFC)、尾殼核(CPu)、伏隔核(NAc)、杏仁核(AM)以及海馬(Hi)七個(gè)腦區(qū)的多巴胺能神經(jīng)元和神經(jīng)纖維,進(jìn)行定性及半定量檢測(cè)。用光鏡對(duì)大鼠中腦SNC和VTA的TH陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù),并對(duì)PFC,CPu,NAc,Hi,AM的TH陽(yáng)性纖維密度和強(qiáng)弱進(jìn)行定性和半定量檢測(cè);用圖像分析系統(tǒng)對(duì)上述腦區(qū)的TH陽(yáng)性細(xì)胞和TH陽(yáng)性神經(jīng)纖維進(jìn)行定量分析;并利用多巴胺標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品,采用熒光分光光度計(jì)對(duì)七個(gè)腦區(qū)進(jìn)行多巴胺的定量檢測(cè)。 結(jié)果:(1)亞急性甲基苯丙胺中毒大鼠模型建立成功�？贪逍袨榕c對(duì)照組相比,高低劑量組均具有顯著差異性(P＜0.05),并且高劑量組與低劑量組相比,差異亦具有顯著性(P＜0.05)。CPP測(cè)試結(jié)果,與對(duì)照組相比,除低劑量d1組差異具有顯著性(P＜0.05)外,其余各組在實(shí)驗(yàn)偏愛(ài)側(cè)停留時(shí)間雖有不同程度的延長(zhǎng),但差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 (2)黑質(zhì)致密區(qū)和腹側(cè)被蓋區(qū)TH陽(yáng)性細(xì)胞圖像分析結(jié)果:黑質(zhì)致密區(qū)和腹側(cè)被蓋區(qū)TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性表達(dá),低劑量d1組,出現(xiàn)一過(guò)性的升高(p＜0.05),d7組降低(P＜0.01),d14組有所恢復(fù),差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。與對(duì)照組相比,高劑量組TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性降低,差異具顯著性(p＜0.05),d1組開(kāi)始降低(p＜0.05),d7組達(dá)到低谷(p＜0.01),d14天組黑質(zhì)致密區(qū)和腹側(cè)被蓋區(qū)TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性有不同程度的恢復(fù)(P＜0.05)。 (3)中腦黑質(zhì)致密區(qū)和中腦腹側(cè)被蓋區(qū)TH陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)分析結(jié)果:黑質(zhì)致密區(qū)TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),與對(duì)照組相比,低劑量d1組增多(p＜0.05),低劑量d7組回減(p＜0.01)、d14組基本恢復(fù)(P＞0.05)。高劑量d1組開(kāi)始減少(p＜0.05),d7組達(dá)到低谷(p＜0.01),d14組仍未恢復(fù)(P＜0.05)。在腹側(cè)被蓋區(qū)TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),與黑質(zhì)致密區(qū)TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的變化基本相同,與對(duì)照組相比,低劑量d1組增多(p＜0.05),低劑量d7組回減(p＜0.01)、d14組基本恢復(fù)(P＞0.05)。高劑量d1組開(kāi)始減少(p＜0.05),d7組達(dá)到低谷(p＜0.01),d14組仍未恢復(fù)(P＜0.05)。 (4)尾殼核、前額葉皮質(zhì)、伏隔核、杏仁核以及海馬TH陽(yáng)性纖維圖像定量分析結(jié)果:與對(duì)照組相比,低劑量d1天組尾殼核TH陽(yáng)性免疫反應(yīng)增強(qiáng)(p＜0.05),d7組陽(yáng)性反應(yīng)減弱(p＜0.01),d14組有所恢復(fù)。與對(duì)照組相比,高劑量組TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性均減低(p＜0.05),d7組陽(yáng)性反應(yīng)最弱(p＜0.01),d14組仍未恢復(fù)(P＜0.05)。伏隔核、杏仁核與前額葉皮質(zhì)TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性的變化與尾殼核的變化基本一致,但程度較輕,伏隔核、杏仁核低劑量d14組基本恢復(fù)(P＞0.05),而前額葉皮質(zhì)與海馬低劑量d14組有所恢復(fù)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 (5)前額葉皮質(zhì)、尾殼核、伏隔核、杏仁核及海馬TH陽(yáng)性纖維密度和強(qiáng)弱半定量分析結(jié)果:與上述TH陽(yáng)性纖維圖像定量分析結(jié)果基本一致。 (6)黑質(zhì)致密區(qū)、腹側(cè)被蓋區(qū)、尾殼核、伏隔核、前額葉皮質(zhì)、杏仁核以及海馬熒光分光光度計(jì)檢測(cè)DA遞質(zhì)含量結(jié)果:與上述免疫組化結(jié)果基本一致。 (7)各腦區(qū)免疫組化,DBH反應(yīng)均為陰性。各腦區(qū)TH免疫組化結(jié)果以及DA含量檢測(cè)結(jié)果均呈劑量依賴性變化。 結(jié)論:1大鼠黑質(zhì)致密區(qū)、腹側(cè)被蓋區(qū)、前額葉皮質(zhì)、尾殼核、伏隔核、杏仁核以及海馬TH陽(yáng)性表達(dá)和各腦區(qū)的DA含量,除低劑量d1組一過(guò)性升高外,其余各組均出現(xiàn)不同程度的減低,并呈劑量依賴性改變。據(jù)此推測(cè): 1.1亞急性MA中毒大鼠,行為學(xué)改變與黑質(zhì)—紋狀體多巴胺神經(jīng)系統(tǒng)的TH活性以及DA遞質(zhì)含量的變化有關(guān)。 1.2亞急性MA中毒大鼠,精神活動(dòng)異常(CPP效應(yīng))與中腦邊緣多巴胺神經(jīng)系統(tǒng)的TH活性以及DA遞質(zhì)含量的變化有關(guān)。 1.3 MA的藥物依賴作用,可能與多巴胺神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性變化有關(guān)。 2、亞急性MA中毒,大鼠各腦區(qū)DA遞質(zhì)含量的變化與TH的變化結(jié)果基本一致。 3、亞急性MA中毒多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)毒性作用可能與以下分子生物學(xué)機(jī)制有關(guān):①DA神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性變化;②DA參與MA對(duì)神經(jīng)元的興奮性毒性作用;③DA與其他神經(jīng)遞質(zhì)的相互關(guān)系等。
[Abstract]:Objective: to establish a rat model of subacute poisoning of methamphetamine (Rat Subacute MethamphetamineIntoxication Model), to observe the changes of sub acute MA poisoning rat behavior change and brain dopaminergic neurotoxicity, on sub acute MA poisoning rat behavior change the neurobiological basis and poisoning of MA dopaminergic neurotoxicity injury mechanism.
鏂規(guī)硶:鑵硅厰娉ㄥ皠鐢插熀鑻笝鑳，

本文編號(hào)：1622917