不同電針對脊髓損傷14天后大鼠再生修復的機理研究
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【摘要】:目的:脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)是一種嚴重的中樞神經系統(tǒng)(central nervous system,CNS)創(chuàng)傷,該病致殘率和死亡率較高,相對于人類其他種類的疾病而言這種創(chuàng)傷是災難性的。SCI發(fā)病的直接原因是位于椎管內的脊髓受到嚴重創(chuàng)傷或者其他病理損害,以至患者損傷脊髓部位以下的軀體運動、感覺和自主神經等功能發(fā)生障礙。脊髓一旦發(fā)生損害將對患者造成終身的疾患,常見的后果為肢體殘疾與肢體功能障礙,對患者本身、家庭以及社會造成沉重負擔。因此,研究和治療SCI一直是醫(yī)學界的熱點問題,而且也將會受到越來越多的關注及重視。本研究基于以往脈沖電針治療各種中樞神經系統(tǒng)損傷臨床及實驗研究成果的基礎上,選擇Raf/Ras/MEK/ERK信號通路為切入點,探討兩種不同電針對大鼠髓損傷后14天絲裂原激活/細胞外信號調節(jié)激酶2(Mitogen-activated/Extracellular signal-regulated Kinase 2,MEK2)、磷酸化細胞外信號調節(jié)蛋白激酶1(phosphorylation-Extracellular signal-regulated Kinase 1, p-ERK1)表達的影響以及對SCI大鼠后肢運功功能和神經元的影響。研究不同電針對脊髓損傷的作用,探討不同電針對脊髓損傷后神經再生和軸突傳導功能的作用機理,為臨床上應用針刺療法治療脊髓損傷提供實驗依據,從而進一步發(fā)展傳統(tǒng)針灸學理論。方法:選擇雄性清潔級SD大鼠(100只),利用隨機數(shù)字表分為空白組(20只)、假手術組(20只)、模型組(20只)、脈沖電針組(20只)、音樂電針組(20只)五組。采用改良式的Allen's打擊法復制SCI模型。其中兩組不同電針組均選取“大椎”、“命門”進行不同電針針刺干預,每日1次,每次20分鐘,空白組、假手術組及模型組在治療組治療時進行抓取束縛,保證處理條件的相同。SCI后14d,采用神經功能評定法——BBB評分對大鼠脊髓損傷進行評估,綜合評定大鼠SCI后的運動功能。采用HE染色、尼氏染色方法觀察脊髓損傷大鼠損傷脊髓前角組織病理改變。運用免疫組化技術和Western blot技術觀察損傷脊髓MEK2、p-ERK1含量的變化。結果:BBB評分結果顯示,經脈沖電針與音樂電針治療后,脊髓損傷大鼠后肢活動功能較模型組均有改善(P0.01),且音樂電針平均值高于脈沖電針,但兩組比較無統(tǒng)計學差異;HE染色與尼氏染色結果說明脈沖電針與音樂電針組均可修復脊髓前角神經元細胞,增加神經元細胞中尼氏體含量,且音樂電針優(yōu)于脈沖電針;免疫組化及Western Blot結果說明脈沖電針與音樂電針均可提高脊髓前角神經元中MEK2、p-ERK1的含量,但兩者無統(tǒng)計學差異。結論:改良式的Allen's打擊法復制模型能較好地模擬損傷脊髓的病理特征及床表現(xiàn),從督脈入手的治療方法也使損傷大鼠下肢的運動功能得到了相應的改善,脈沖電針與音樂電針均能誘導SCI大鼠脊髓內MEK2、p-ERK1的表達,促進脊髓損傷后神經修復再生功能,音樂電針作用較脈沖電針略有優(yōu)勢。
【關鍵詞】:脈沖電針 音樂電針 脊髓損傷 大鼠 MEK2 p-ERK1
【學位授予單位】:北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R245
【目錄】:
- 摘要5-7
- ABSTRACT7-9
- 英文縮略詞表9-10
- 前言10-11
- 一、文獻綜述11-29
- 1. 脊髓損傷后14天后模型動物的行為學及病理變化11-14
- 1.1 脊髓損傷14天后模型動物——行為學檢測11-13
- 1.2 脊髓損傷14天后模型動物——病理學觀察13-14
- 2. 中、西醫(yī)療法對脊髓損傷后14天后模型動物的影響14-18
- 2.1 西醫(yī)療法14-16
- 2.2 中醫(yī)療法16-18
- 3. RAS/RAF/MEK/ERK信號通路對脊髓損傷的作用18-20
- 4 音樂電針療法的研究現(xiàn)狀20-23
- 參考文獻23-29
- 二、實驗研究29-38
- 1. 實驗材料29-31
- 1.1 實驗動物29
- 1.2 主要實驗試劑與藥品29-30
- 1.3 實驗器材與設備30-31
- 2. 實驗方法31-38
- 2.1 動物分組31
- 2.2 動物模型制備31-32
- 2.3 治療方法32-33
- 2.4 標本取材33
- 2.5 Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)運動功能評分33-35
- 2.6 HE染色、尼氏體染色檢測35
- 2.7 免疫組化檢測35-36
- 2.8 Western blot檢測36-37
- 2.9 實驗數(shù)據統(tǒng)計37-38
- 三、實驗結果38-47
- 1. 脊髓損傷模型動物行為學檢測——運動功能BBB評分結果38-39
- 2. 脊髓損傷模型動物脊髓前角形態(tài)學檢測——HE染色結果39-41
- 3. 脊髓損傷模型動物脊髓前角形態(tài)學檢測——尼氏體染色結果41-42
- 4. 脊髓損傷模型動物脊髓前角RAS/RAF/MEK/ERK信號通路相關蛋白分析——免疫組化檢測結果42-44
- 5. 脊髓損傷模型動物脊髓前角RAS/RAF/MEK/ERK信號通路相關蛋白分析——WESTERN BLOT檢測結果44-47
- 四、小結47-48
- 五、討論48-56
- 1. 脊髓損傷的中醫(yī)病因病機48-50
- 1.1 脊髓損傷與督脈的關系48-49
- 1.2 脊髓損傷與針刺穴位的研究49-50
- 2. 兩種電針對行為學的影響50-51
- 3. 兩種電針對脊髓損傷模型動物脊髓前角神經細胞形態(tài)的影響51-52
- 4. 兩種電針對脊髓損傷模型動物脊髓前角RAS/RAF/MEK/ERK信號通路相關蛋白的影響52-53
- 5. 大鼠脊髓損傷后的死亡原因53-56
- 六、結語56-57
- 參考文獻57-59
- 致謝59-61
- 在學期間研究成果61-62
- 個人簡歷62
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