本文關鍵詞：脊柱推拿對腦癱幼鼠腦白質炎癥的拮抗作用與機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察脊柱推拿對腦癱(Cerebral palsy,CP)幼鼠腦白質炎癥細胞因子白介素6(IL-6)和白介素10(IL-10)的影響,為脊柱推拿重建腦癱炎癥穩(wěn)態(tài)的分子機制提供前期研究基礎。方法將108只3日齡SD幼鼠,隨機分為3組:空白對照組(共40只)、模型對照組(共40只)和實驗組(共28只),模型對照組和實驗組采用左側頸總動脈結扎聯(lián)合缺氧3h的方法制備腦癱模型,空白對照組不予處理,只正常喂養(yǎng)。造模后24h時,從空白對照組和模型對照組中各隨機取出6只處死用于做TTC染色,再各隨機取出6只處死用于做腦干濕重比檢測;同日,實驗組開始用脊柱推拿的方法進行早期干預,1次/日,15 min/次,空白對照組和模型對照組剩余幼鼠不予任何干預。三組維持相同的溫度、適度生存環(huán)境及喂養(yǎng)方法,相同時間點檢測并記錄幼鼠的精神狀態(tài)、毛發(fā)潤澤程度及體重等一般情況。第4周(Postnatal 28days,P28)和第8周(P56)兩個時間點,每組各隨機取出7只處死,用HE染色觀察腦白質的病理改變;每組剩余的7只用免疫熒光法檢測腦白質區(qū)內IL-6和IL-10的蛋白表達水平。處死前1周進行平衡木實驗(Beam Balance Test,BBT)以觀察其運動平衡能力。結果1.實驗組4周時的精神狀態(tài)、反應等一般情況良好,與空白對照組相比無明顯差異;與模型對照組相比,模型對照組幼鼠反應較遲鈍、雙眼不等大。實驗組8周時毛發(fā)光澤油亮、精神狀態(tài)良好、反應靈敏、發(fā)育正常,與空白對照組相比幾乎無差異;而模型對照組幼鼠毛色暗淡,反應遲鈍、發(fā)育遲緩、雙眼不等大(睜眼后左側眼裂變小)。每日體重增加量:空白對照組均較模型對照組顯著增加(P0.05)。P13、P17、P19、P21、P23、P25,實驗組4周時體重日變化量均較模型對照組顯著增加(P0.05);P7、P11、P17、P19、P21、P23、P27、P29、P31、P33、P35、P37、P39、P41、P43、P45、P47、P53,實驗組8周時體重日變化量均較模型對照組顯著增加(P0.05)。說明脊柱推拿能加快促進腦癱幼鼠的體重增長速度,且對推拿時間具有一定的依賴性,隨著推拿次數(shù)的增加,體重增長速度越快。2.平衡木實驗顯示,實驗組4周時,通過平衡木的時間和雙后肢下滑的次數(shù)方面與8周時比較發(fā)現(xiàn):通過平衡木的時間無顯著差異(P0.05),但雙后肢下滑的次數(shù)差異非常顯著(P0.001);4周時,與空白對照組比較,各項指標均無顯著差異(P0.05),與模型對照組比較,通過平衡木的時間顯著縮短(P0.05)、雙后肢下滑次數(shù)顯著減少(P0.05);8周時,與空白對照組比較,各項指標均無顯著差異(P0.05),與模型對照組比較,通過平衡木的時間顯著縮短(P0.05)、雙后肢下滑次數(shù)顯著減少(P0.05)。說明脊柱推拿能促進腦癱幼鼠的運動平衡能力的改善,且與推拿時間長短有關,推拿時間越長,改善效果越好。3.HE染色顯示,實驗組4周時,腦白質區(qū)內部分神經(jīng)元細胞存在不同程度的水腫、壞死和核固縮現(xiàn)象。實驗組8周時與4周時進行比較發(fā)現(xiàn)部分受損神經(jīng)元細胞的水腫、壞死和核固縮現(xiàn)象均有明顯改善。4周時發(fā)現(xiàn),腦白質區(qū)內部分神經(jīng)元細胞存在不同程度的水腫、壞死和核固縮現(xiàn)象,4周時與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義,與模型對照組比較,神經(jīng)元細胞的水腫、壞死和核固縮現(xiàn)象相對較輕;8周時與空白對照組比較,幾乎無異,與模型對照組比較,神經(jīng)元細胞的水腫、壞死和核固縮現(xiàn)象相對較輕。說明脊柱推拿可促使腦白質區(qū)內神經(jīng)元細胞的修復與再生,且推拿時間越長,恢復效果越明顯。4.免疫熒光檢測顯示,實驗組4周時腦白質內部分炎癥細胞因子IL-6、IL-10的異常表達均發(fā)生了明顯改善。實驗組8周時與4周時比較發(fā)現(xiàn)IL-6、IL-10炎癥因子蛋白水平表達的改善程度差異非常顯著(P0.01)。4周時,與空白對照組比較,IL-6和IL-10蛋白表達均顯著增高(P0.05),與模型對照組比較,IL-6蛋白表達顯著降低(P0.05),IL-10蛋白表達顯著增高(P0.05);8周時,與空白對照組比較,IL-6和IL-10蛋白表達均顯著增高(P0.05),與模型對照組比較,IL-6蛋白表達顯著降低(P0.05),IL-10蛋白表達顯著增高(P0.05)。說明脊柱推拿可有效降低腦白質內IL-6的蛋白表達水平,同時提高IL-10的蛋白表達水平。說明通過推拿可有效參與調節(jié)炎癥細胞因子IL-6和IL-10異常表達,通過脊柱推拿可以調節(jié)促炎因子IL-6與抗炎因子IL-10的蛋白水平表達,且其調節(jié)效果與推拿時間有關,推拿時間越長,效果越好。結論1.脊柱推拿能有效促進腦癱幼鼠的各項生長發(fā)育指標,如體重、飲食、精神狀態(tài)等。且與推拿時間長短有關,推拿時間越長,生長發(fā)育狀況越好。2.脊柱推拿能有效促進腦癱幼鼠運動平衡能力的提高,且與推拿時間長短有關,推拿時間越長,改善效果越好。3.脊柱推拿可改善腦白質區(qū)內神經(jīng)元細胞的病理形態(tài),降低腦白質促炎因子IL-6蛋白水平表達,增加抗炎因子IL-10的蛋白水平表達,重建炎癥的相對穩(wěn)態(tài)。這與文獻報道中提及的血清中炎癥因子表達的方式一致,提示脊柱推拿對腦白質的病理改變及脊柱推拿對CP幼鼠運動平衡能力的改善和炎癥細胞因子的表達有關。4.脊柱推拿可通過降低腦白質內促炎因子IL-6、提高抗炎因子IL-10蛋白表達來重建腦癱炎癥穩(wěn)態(tài),進而促進運動及其它功能的全面康復,為進一步研究調控機制奠定前期基礎。
【關鍵詞】：脊柱推拿 腦癱 炎癥 腦白質 IL-6 IL-10
【學位授予單位】：云南中醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R244.1
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 中英文縮寫對照表13-14
• 引言14-16
• 1.材料16-17
• 2.方法17-21
• 2.1 實驗分組17
• 2.2 各組動物處理方法17-18
• 2.3 檢測方法18-21
• 2.3.1 腦組織TTC染色法18-19
• 2.3.2 腦干濕重檢測法19
• 2.3.3 平衡木實驗19-20
• 2.3.4 HE染色法20
• 2.3.5 免疫熒光檢測法20-21
• 2.3.6 統(tǒng)計學分析21
• 3.結果21-32
• 3.1各組生長發(fā)育情況比較21
• 3.2 各組幼鼠日體重變化比較21-24
• 3.3 腦組織TTC染色結果比較24
• 3.4 腦組織干濕重比結果比較24-25
• 3.5 各組幼鼠平衡木實驗檢測結果比較25-27
• 3.6 各組幼鼠腦白質HE染色結果比較27-28
• 3.7 各組幼鼠腦白質免疫熒光檢測IL-6 蛋白表達結果比較28-29
• 3.8 各組幼鼠腦白質免疫熒光檢測IL-10蛋白表達結果比較29-32
• 討論32-38
• 結論38-39
• 問題與展望39-40
• 參考文獻40-44
• 本課題國內外目前研究狀況(文獻綜述)44-51
• 參考文獻48-51
• 發(fā)表文章51-52
• 附件52-57
• 致謝57

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