目的:活化已分離保存的苗藥小花清風(fēng)藤葉內(nèi)生真菌L-43,對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)及分子鑒定。方法:對內(nèi)生真菌L-43活化后,觀察其在PDA固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài),采用顯微鑒定法觀察內(nèi)生真菌L-43的孢子及菌絲形態(tài),參照《中國真菌志》對其形態(tài)進(jìn)行描述;結(jié)合PCR及NCBI數(shù)據(jù)庫對比分析方法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,最終確定內(nèi)生真菌L-43的種屬。結(jié)果:菌種L-43與鏈格孢屬Alternaria tenuissima聚為一類,相似度為100%,表明L-43為鏈格孢屬Alternaria tenuissima。結(jié)論:苗藥小花清風(fēng)藤葉中存在鏈格孢屬種類的內(nèi)生真菌,為后續(xù)研究提供寶貴微生物資源。 

【文章來源】：科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新. 2020,(23)

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【部分圖文】：

菌L-43的ITS系統(tǒng)進(jìn)化樹

列擴(kuò)增，擴(kuò)增后將PCR擴(kuò)增片段進(jìn)行測序。結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫BIAST對比已知種屬的ITS序列進(jìn)行相似性分析，再運(yùn)用MEGA5.0分析其系統(tǒng)發(fā)育，構(gòu)建進(jìn)化樹，而后進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和生物多樣性分析[9]。3結(jié)果與分析3.1小花清風(fēng)藤葉內(nèi)生真菌L-43的形態(tài)學(xué)菌株L-43在PDA平板生長7d時(shí)，單菌落表面不平，表面蓬松，菌絲絲絨狀，菌落中間灰色，外圍白色，無滲出液。主要顯微形態(tài)特征菌絲較細(xì)，鏈狀，直或彎曲，有分支，分生孢子單生、呈梨形，分隔明顯且無規(guī)律。根據(jù)菌株L-43的形態(tài)學(xué)特征將其鑒定為Alternariatenuissima（鏈格孢屬）（圖1）。A.菌落形態(tài)B.菌絲及孢子形態(tài)C.液體發(fā)酵圖1內(nèi)生真菌L-43的形態(tài)特征3.2小花清風(fēng)藤葉內(nèi)生真菌L-43分子鑒定內(nèi)生真菌L-43經(jīng)ITS區(qū)經(jīng)引物V9D和LS266擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物測序得到934bp的rDNA序列。將所測內(nèi)生真菌L-43的擴(kuò)增產(chǎn)物序列輸入NCBI中進(jìn)行Blast序列比對分析，篩選出與內(nèi)生真菌L-43種屬最相似的序列，并用MEGA5.05軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果顯示，在進(jìn)化樹中，內(nèi)生真菌L-43與AlternariatenuissimaKJ082100聚類在同一分支（圖2），親緣關(guān)系最為接近，結(jié)合在GenBank中登錄結(jié)果顯示二者相似度為100%，同時(shí)，結(jié)合L-43的形態(tài)學(xué)特征，最終將菌株L-43鑒定為Alternariatenuissima（鏈格孢屬）。圖2菌L-43的ITS系統(tǒng)進(jìn)化樹4討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)分子生物學(xué)鑒定后為一個(gè)種屬的的幾種菌出現(xiàn)了生長形態(tài)和顯微形態(tài)不同的情況，此種情況該以形態(tài)學(xué)鑒定為主還是以分子生物學(xué)為主。有學(xué)者認(rèn)為，此種情況該一分子生物學(xué)鑒定結(jié)果來判斷其種屬。內(nèi)生真菌的形態(tài)易受溫度、時(shí)間、培養(yǎng)基等培養(yǎng)條件的影響，從而導(dǎo)致其鑒定結(jié)果的影響；分子生物學(xué)鑒定及反映了內(nèi)生真菌的分類地位，又反映了其進(jìn)化水平和與其他生物的親緣關(guān)系[10]�？傊�

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：2979772