研究背景:阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)又稱“老年癡呆癥”,屬于中醫(yī)“呆病”的范疇,它是一種以漸進性認知能力障礙、近事記憶和學習能力下降為主要表現(xiàn)的中樞神經系統(tǒng)退行性病變。隨著我國人口老齡化進程的加快,老年癡呆癥患者數量持續(xù)攀升,不僅引發(fā)了嚴重的社會問題,還給患者家庭帶來了沉重負擔,AD已成為我國老年人群健康的重要威脅。雖然歷經百年探索,但至今AD的病因尚未闡明,從目前研究來看,該病的可能因素和假說多達30余種,其中圍繞β-淀粉樣蛋白和Tau蛋白的兩大假說一直是AD致病機理的爭論點。中醫(yī)藥治療老年性癡呆歷史悠久,針灸療法作為傳統(tǒng)中醫(yī)藥的一大瑰寶,療效顯著且具有獨特的作用優(yōu)勢。針刺具有多靶點、多水平、多途徑的整體調節(jié)能力。學習記憶障礙作為AD的重要臨床表現(xiàn),是AD早期診斷的主要標準之一。而突觸可塑性被認為是學習記憶活動的細胞水平的生物學基礎,越來越多的研究證據顯示,與學習認知功能相關的神經元突觸可塑性異常在AD發(fā)病過程中扮演著重要角色。JNK信號通路作為絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號系統(tǒng)的組成部分,在細胞增殖凋亡、突觸可塑性、神經炎癥等方面發(fā)揮著重要作用。課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn),督脈電針可以減少Aβ和p-tau的異常表達,改善AD模型小鼠認知能力和海馬神經元丟失。然而,電針究竟是如何發(fā)揮改善學習記憶的作用?電針的治療效應與JNK信號通路阻斷劑是否類似?其改善機制與神經突觸可塑性變化是否相關?本實驗將圍繞上述問題展開探討。實驗目的:本實驗圍繞神經突觸可塑性機制,運用Morris水迷宮、免疫組化、Western Blot等現(xiàn)代科學技術,從行為學、組織形態(tài)、蛋白表達等方面,觀察電針治療對AD模型小鼠學習記憶障礙的改善作用,并探討其可能作用機制,為臨床應用針刺療法防治AD提供一定的科學依據。實驗方法:(1)干預治療:將APP/PS1雙轉基因小鼠27只隨機分為3組:模型組、電針組、藥物組;將同源同月齡相同遺傳背景C57/BL6小鼠9只列為正常組。以上四組,每組9只,適應性喂養(yǎng)一周后開始實驗。電針組取穴“百會”、“印堂”接電針,治療后點刺“水溝”,每次20min,隔天1次,共30天;而正常組、模型組、藥物組(腹腔注射JNK通路阻斷劑SP600125,隔天1次,共30天)在電針組治療時進行同等時間、同等強度的束縛,以確保實驗條件的同一性,隔天1次,共30天。(2)行為學檢測:30天結束后,通過Morris水迷宮(持續(xù)6天)檢測各組小鼠行為學改變,來明確AD模型小鼠是否發(fā)生了學習記憶障礙,而電針治療對此改變是否具有調節(jié)作用,并觀察作為陽性對照,腹腔注射JNK通路阻斷劑SP600125的效果,評價二者的調節(jié)作用是否具有共性。(3)指標檢測:通過使用免疫組織化學法和Western Blot檢測4組小鼠海馬區(qū)SYP和PSD-95的表達變化來再次驗證模型是否成功以及電針治療的調節(jié)作用,并明確電針治療通過影響神經突觸可塑性發(fā)揮作用的部分作用機制。實驗結果:(1)從水迷宮實驗的訓練結果來看,隨著訓練天數的增加,各組小鼠逃避潛伏期逐漸下降,與正常組相比,模型組逃避潛伏期下降趨勢較為緩慢;而與模型組相比,藥物組和電針組逃避潛伏期下降趨勢較為明顯。從測試結果來看,與正常組相比,模型組目標象限游泳時間及穿越平臺次數明顯減少,而電針組和藥物組能夠明顯抑制此減少趨勢。(2)免疫組織化學檢測顯示:與正常組相比,模型組神經元細胞間隙增大,細胞形態(tài)異常,且PSD-95的表達顯著減少;與模型組相比,電針組及藥物組神經元細胞間隙及細胞形態(tài)明顯改善,PSD-95的表達明顯增多。(3)Western Blot檢測顯示:與正常組比,模型組SYP與PSD-95的表達明顯減少,電針組和藥物組可以明顯抑制PSD-95的減少趨勢,而對SYP的表達影響不顯著。結論:(1)電針治療與藥物治療均能夠在一定程度上改善學習記憶障礙,且發(fā)揮出相類似的效應;(2)調節(jié)海馬區(qū)突觸可塑性可能是電針治療改善AD模型小鼠學習記憶障礙的機制之一;(3)電針治療調節(jié)突觸可塑性可能通過抑制PSD-95的表達實現(xiàn)。
【學位單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R245.97
【部分圖文】：

技術路線圖

水迷宮示意圖

水迷宮象限示意圖
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本文編號：2875795