【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)建立新西蘭白兔AS動(dòng)物模型,觀察益氣活血復(fù)方對(duì)AS白兔抗炎穩(wěn)斑的作用機(jī)理,檢測(cè)和動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)指標(biāo)血脂、NF-κB、VCAM-1、MCP-1、內(nèi)皮因子及纖溶系統(tǒng)等。通過(guò)實(shí)驗(yàn)探究益氣活血復(fù)方對(duì)AS所產(chǎn)生抗炎穩(wěn)斑干預(yù)效果以及機(jī)理,對(duì)臨床應(yīng)用中醫(yī)藥進(jìn)行防治AS提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。材料與方法:1.取健康體重2.5±0.5kg的雄性新西蘭大白兔40只,通過(guò)進(jìn)行適應(yīng)性的喂養(yǎng)1周,再?gòu)闹须S機(jī)抽取出8只作為正常組,以普通的基礎(chǔ)兔飼料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)喂飼。其余32只白兔進(jìn)行頸總動(dòng)脈球囊損傷術(shù),在手術(shù)之后以高脂飼料進(jìn)行喂飼四周時(shí)間,在術(shù)中和術(shù)后其家兔的死亡數(shù)量共是8只。剩余的24只新西蘭兔隨機(jī)進(jìn)行分成有模型組(n=8)、辛伐他汀組(n=8)與益氣活血復(fù)方組(n=8)。實(shí)驗(yàn)給藥組于每日早晨,僅進(jìn)行喂飼藥物飼料,待飼用完畢,給予充足的高脂飼料(每日每只120g)進(jìn)行喂飼;模型組喂以高脂飼料;正常組僅以普通飼料喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)組白兔于每周進(jìn)行稱體重1次,按照白兔體重再進(jìn)行調(diào)整各組白兔的用藥量,實(shí)驗(yàn)研究共給藥時(shí)間為4周。分別于該實(shí)驗(yàn)的第0周、4周、8周末進(jìn)行實(shí)驗(yàn)采血,并與第8周末處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之后,進(jìn)行取材,切片等操作。2.使用全自動(dòng)生化分析儀經(jīng)行檢測(cè)每組動(dòng)物其在第0、4、8周末血漿的TG、TC、HDL-C及LDL-C水平;3.觀察每組實(shí)驗(yàn)于第8周末的受損血管經(jīng)過(guò)蘇木素-伊紅(HE)染色的組織病理變化情況以及對(duì)球囊損傷兔頸總AS模型的建立、益氣活血法對(duì)受損血管內(nèi)膜增殖的作用進(jìn)行評(píng)價(jià);4.使用RT-PCR法檢測(cè)各組頸動(dòng)脈NF-κB、VCAM-1、MCP-1 mRNA表達(dá);5.使用免疫組化法進(jìn)行測(cè)定每組內(nèi)頸動(dòng)脈NF-κB、VCAM-1、MCP-1蛋白的表達(dá);6.使用分光光度法進(jìn)行測(cè)定實(shí)驗(yàn)在第8周末血漿的一氧化氮(NO)水平;7.使用ELISA法進(jìn)行測(cè)定實(shí)驗(yàn)在第8周末血漿的內(nèi)皮素-1(ET-1)含量;8.使用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)每組白兔其第0周、4周、8周末血漿的t-PA、PAI-1、TF含量。結(jié)果:1入選時(shí)每組動(dòng)物血脂水平、體重沒(méi)有差異且符合正態(tài)分布(以0周表示)。第4周末,高脂喂養(yǎng)兔血漿中TC、TG、LDL-C水平,經(jīng)計(jì)算TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比率均高于空白對(duì)照組,且此種差異性顯著(P0.01),4者中LDL-C、TC變化的幅度更為明顯;HDL-C低于空白對(duì)照組(P0.05);益氣活血復(fù)方具有很好的降脂效果顯著,在實(shí)驗(yàn)的第8周末,通過(guò)運(yùn)用益氣活血復(fù)方可降低TC、TG、LDL-C分別為38.3%、31.6%和50.1%,明顯升高HDL-C 160.9%,降低TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值達(dá)62%和89%,辛伐他汀在降低TC、LDL-C水平上比益氣活血復(fù)方明顯(P0.05)。益氣活血復(fù)方在升高HDL-C上則有明顯優(yōu)勢(shì)(P0.05)。兩組間于TG作用無(wú)明顯差別(P0.05)。2主動(dòng)脈球囊損傷加高脂喂養(yǎng)的方法證實(shí)成功復(fù)制AS模型,且益氣活血復(fù)方對(duì)內(nèi)膜增生存在顯著的抑制作用。3益氣活血復(fù)方對(duì)于炎癥因子的水平存在著顯著阻礙效果:于實(shí)驗(yàn)的第8周末,每組動(dòng)物頸動(dòng)脈的組織內(nèi)NF-κB、VCAM-1、MCP-1 mRNA于對(duì)照組的水平下降,其中模型組的含量最高,比辛伐他汀組及益氣活血復(fù)方組存在著明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),益氣活血復(fù)方組及辛伐他汀組之間NF-κB、VCAM-1、MCP-1 mRNA水平的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義;和模型組進(jìn)行比較可知,益氣活血復(fù)方實(shí)驗(yàn)組內(nèi)的NF-κB、VCAM-1、MCP-1蛋白呈現(xiàn)顯著降低,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.O5),而益氣活血復(fù)方組和辛伐他汀組之間相比血管壁內(nèi)NF-κB、VCAM-1、MCP-1蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.益氣活血復(fù)方在使NO的分泌與合成的同時(shí),還能夠減少ET-1的顯現(xiàn),對(duì)于體內(nèi)NO/ET-1平衡存在促進(jìn)效果,可保護(hù)EC的能力:在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的第8周末,模型組內(nèi)動(dòng)物血漿的NO水平較之正常組能夠顯著下降,差異存在顯著性(P0.01);辛伐他汀組與益氣活血復(fù)方組內(nèi)動(dòng)物血漿的NO水平與模型組相比結(jié)果上升顯著(P0.01);益氣活血復(fù)方組內(nèi)白兔的血漿內(nèi)NO水平上升程度能夠比辛伐他汀組效果顯著(P0.01);在經(jīng)過(guò)球囊損傷后的第8周末,使用ELISA法進(jìn)行測(cè)定模型組內(nèi)白兔血漿內(nèi)的ET-1含量和正常組相比能夠顯著增多;通過(guò)和模型組進(jìn)行比較,能夠得出益氣活血復(fù)方組、辛伐他汀組的白兔血漿ET-1水平減低明顯(P0.05),但二組間無(wú)顯著性差異(P0.05)。5球囊受損不僅可以影響纖溶系統(tǒng)在體內(nèi)的穩(wěn)定狀態(tài),并且可以有利于組織因子的表達(dá),引起血栓在體內(nèi)產(chǎn)生,益氣活血復(fù)方能夠穩(wěn)定纖溶系統(tǒng),并且起到抗凝、抗血栓的效果:在實(shí)驗(yàn)的第8周末,模型組內(nèi)PAI-1含量繼續(xù)上升,反之使用益氣活血復(fù)方與辛伐他汀的實(shí)驗(yàn)組血漿PAI-1的含量分別能夠比模型組減少48%與44.7%,差異存在顯著性(P0.01),而辛伐他汀與益氣活血復(fù)方二組的PAI-1含量沒(méi)有明顯差異。在實(shí)驗(yàn)的第8周末,正常對(duì)照組內(nèi)的t-PA含量和4周末相比沒(méi)有顯著差異性改變,模型組t-PA含量比4周末時(shí)減少顯著(P0.05),同時(shí)其明顯的能夠較正常對(duì)照組含量減低(P0.05),辛伐他汀組、益氣活血復(fù)方組中血漿內(nèi)t-PA含量比模型組有明顯增多趨勢(shì),并且其差異存在顯著性(P0.05),這兩組相比,血漿內(nèi)t-PA含量前者比后者增加更加明顯(P0.05)。測(cè)定各時(shí)期內(nèi)TF含量,在實(shí)驗(yàn)的第8周末,辛伐他汀組、益氣活血復(fù)方組中TF含量比模型組減少明顯(P0.01),二者對(duì)比TF含量沒(méi)有明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1.益氣活血復(fù)方能夠降低高脂血癥新西蘭兔血漿內(nèi)TG、TC及LDL-C的含量,同時(shí)能升高血漿內(nèi)HDL-C水平。2.益氣活血復(fù)方可抑制AS內(nèi)膜增生。3.益氣活血復(fù)方能夠抑制NF-κB、VCAM-1、MCP-1進(jìn)行活化,使炎癥因子水平降低,穩(wěn)定斑塊,防止動(dòng)脈硬化形成。4.益氣活血復(fù)方可促進(jìn)血漿內(nèi)NO的分泌及合成能力并能抑制ET-1的表達(dá),有利于恢復(fù)NO/ET-1平衡,對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有良好的保護(hù)作用,以減輕炎癥損傷。5.益氣活血復(fù)方可平衡體內(nèi)纖溶系統(tǒng),抑制組織因子釋放,具有抗凝抗血栓形成的作用,以減少斑塊的形成。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R259;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2797185