【摘要】：目的:本實驗通過建立因動脈粥樣硬化引發(fā)的輕度認知障礙小鼠模型,檢測小鼠乙酰膽堿酯酶(Ach E)、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(Ch AT)、白介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、β-淀粉樣蛋白(Aβ)等指標的變化,探究針藥治療模型小鼠膽堿能系統(tǒng)和炎癥反應(yīng)的作用機制。本實驗基于“心腦合病”理論探討動脈粥樣硬化對認知功能的影響及機制,旨在為臨床開展因動脈粥樣硬化導致的輕度認知障礙的防治工作,提供實驗依據(jù)和理論指導。材料與方法:選取10只C57BL/6J小鼠給予普通小鼠飼料喂養(yǎng),作為空白對照組。選取40只Apo E-/-小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng),作為模型對照組。喂養(yǎng)12周后,全自動生化分析儀檢測小鼠血脂水平,HE染色檢測小鼠動脈病理形態(tài),水迷宮檢測小鼠認知能力,其中定位航行實驗檢測小鼠的學習能力,空間探索實驗檢測小鼠的記憶能力。確定模型成功建立后,空白對照組小鼠仍作為空白組,模型對照組小鼠隨機分為模型組、中藥組、針刺組、針藥組。中藥組給予二陳湯合桃紅四物湯灌胃治療,0.2m L/次,1次/d;針刺組選穴百會、關(guān)元、雙側(cè)豐隆,加以電針,留針15min,左右兩側(cè)交替進行,1次/d;針藥組同時給予中藥組和針刺組的治療方式;空白組和模型組給予同等程度的抓取與固定并給予蒸餾水灌胃,0.2m L/次,1次/d,連續(xù)治療28天。治療期間,按照各組小鼠既定的喂養(yǎng)方式,繼續(xù)喂養(yǎng)。治療結(jié)束后,采用Morris水迷宮檢測行為學,采用免疫組織化學技術(shù)檢測Ch AT、Ach E的表達,采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定IL-1β、TNF-α、Aβ的含量。結(jié)果:1.造模后,血脂水平檢測結(jié)果表明:與空白對照組相比,模型對照組小鼠血清中TC水平、TG水平、LDL水平均顯著升高(P0.01),HDL水平顯著降低(P0.01)。2.造模后,HE染色結(jié)果表明:與空白對照組相比,模型對照組小鼠的動脈形成了較大斑塊。3.造模后,Morris水迷宮檢測結(jié)果表明:定位航行實驗中,隨著訓練時間的增加,各組小鼠的逃避潛伏期均有減少。與空白組對照相比,模型對照組小鼠的逃避潛伏期和游泳路程顯著增加(P0.05)。空間探索實驗中,與空白對照組相比,模型對照組小鼠穿越平臺次數(shù)顯著減少(P0.05)。4.治療后,Morris水迷宮檢測結(jié)果表明:定位航行實驗中,隨著訓練時間的增加,各組小鼠的逃避潛伏期均有減少,與空白組相比,模型組小鼠的逃避潛伏期和游泳路程均顯著增加(P0.05);與模型組相比,中藥組、針刺組、針藥組小鼠的逃避潛伏期和游泳路程均顯著減少(P0.05),以針藥組的變化更為明顯。空間探索實驗中,與空白組相比,模型組小鼠穿越平臺次數(shù)顯著減少(P0.05);與模型組相比,中藥組、針刺組、針藥組小鼠穿越平臺次數(shù)顯著增加(P0.05),針藥組小鼠穿越次數(shù)增加更為明顯。5.治療后,免疫組織化學染色技術(shù)檢測結(jié)果表明:與空白組相比,模型組小鼠Ch AT表達顯著減少(P0.05);與模型組相比,中藥組、針刺組、針藥組小鼠Ch AT表達顯著增加(P0.05),針藥組小鼠Ch AT表達增加更為明顯。與空白組相比,模型組小鼠Ach E表達顯著增加(P0.05);與模型組相比,中藥組、針刺組、針藥組小鼠Ach E表達顯著減少(P0.05),針藥組小鼠Ach E表達減少更為明顯。6.治療后,酶聯(lián)免疫吸附劑檢測結(jié)果表明:與空白組相比,模型組小鼠Aβ含量、IL-1β含量、TNF-α含量均顯著升高(P0.05);與模型組相比,中藥組、針刺組、針藥組小鼠Aβ含量、IL-1β含量、TNF-α含量均顯著降低(P0.05),以針藥組小鼠降低更為明顯。結(jié)論:1.采用針藥并舉的治療方法,可以很好改善因動脈硬化導致的輕度認知障礙小鼠的習及記憶能力;2.采用針藥并舉的治療方法,能夠明顯降低因動脈硬化導致的輕度認知障礙小鼠的炎性細胞因子含量,增加Ch AT表達,降低Ach E表達;3.采用針藥并舉的治療方法,對因動脈硬化導致輕度認知障礙小鼠的影響可能與膽堿能系統(tǒng)和炎癥反應(yīng)有關(guān)。
【圖文】：

針藥并舉對動脈硬化引發(fā)的輕度 知障礙小鼠模型膽堿能抗炎通路的影響實驗結(jié)果1 血脂水平檢測小鼠血脂水平檢測結(jié)果顯示：與空白對照組相比，模型對照組小鼠血清中 TC、TG、LDL 的水平明顯增加（P<0.01），HDL 水平明顯減少（P<0.01）。結(jié)果見表 1、圖 1。表 1 小鼠血脂水平變化情況（mmol/L，， x s）組別 TC TG HDL LDL空白對照組 2.69 0.36 0.79 0.11 1.21 0.10 0.19 0.05模型對照組 20.46 3.09** 2.50 0.24** 0.36 0.12** 2.23 0.15**注：與空白對照組相比，**P＜0.01。

圖 2 不同組別小鼠動脈病理切片圖（HE， 100）3 行為學檢測3.1 造模后3.1.1 定位航行實驗小鼠定位航行實驗結(jié)果顯示：隨著訓練時間的增加，小鼠的訓練潛伏期均有所減少。與空白對照組相比，模型對照組小鼠逃避潛伏期時間顯著增加（P<0.05），游泳路程顯著增加（P<0.05）。結(jié)果見表 3-1、圖 3-1、3-2。表 3-1 小鼠定位航行實驗逃避潛伏期變化情況（s， x s）組別 第一天 第二天 第三天 第四天 第五天空白對照組 47.64 4.52 41.4 4.12 38.65 4.12 32.78 4.52 29.53 3.21模型對照組 58.41 2.01 55.23 3.85 53.34 4.40 50.63 4.78 45.23 4.23*注：與空白對照組相比，**P＜0.05。
【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R245

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本文編號：2704620