發(fā)布時(shí)間：2020-05-31 16:45

【摘要】：[背景]2型糖尿病(T2DM)是胰島β細(xì)胞分泌胰島素不足或靶細(xì)胞對(duì)胰島素不敏感所致的以高血糖為臨床主要表現(xiàn)的一種復(fù)雜疾病。長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)會(huì)引發(fā)血管、神經(jīng)的損傷,并出現(xiàn)一系列炎癥反應(yīng),因此T2DM也被認(rèn)為是一種慢性低度的炎癥狀態(tài),它受到機(jī)體免疫系統(tǒng)的調(diào)控。胰腺中浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞可以通過(guò)自分泌或旁分泌的方式干擾外周組織的胰島素信號(hào)傳導(dǎo)或誘導(dǎo)β細(xì)胞損傷,但由于T2DM發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性,免疫細(xì)胞在其中所起的具體作用及作用機(jī)制并不完全清楚。[目的]本課題采用db/db小鼠模型,探討T2DM發(fā)生發(fā)展中胰腺組織內(nèi)髓源抑制性細(xì)胞(MDSCs)、CD8+T和胰島β細(xì)胞損傷之間的關(guān)系,闡明其調(diào)控作用及內(nèi)在機(jī)制,并部分揭示壯藥綬草中天麻苷修復(fù)胰島β細(xì)胞損傷的過(guò)程及機(jī)制。[方法]以SPF級(jí)雄性db/db小鼠和同型對(duì)照鼠為研究對(duì)象,檢測(cè)4-16周內(nèi)小鼠體重、空腹血糖、糖耐量、胰島素耐量變化;通過(guò)ELISA法檢測(cè)外周血中炎癥因子的表達(dá);利用胰島素抗體染色技術(shù)檢測(cè)胰島β細(xì)胞數(shù)量及功能。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠外周血、肝臟、脾和胰腺中MDSCs、CD8+T細(xì)胞、胰島β細(xì)胞的比例,并分選胰腺M(fèi)DSCs、CD8+T細(xì)胞和胰島βp細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過(guò)體外CD8+T細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),體內(nèi)過(guò)繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn),觀察胰腺M(fèi)DSCs、CD8+T和胰島β細(xì)胞之間的相互作用及方式。在體外,利用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)綬草70%提取物中各成分對(duì)胰腺M(fèi)DSCs細(xì)胞活力的影響;通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Western blot和細(xì)胞爬片實(shí)驗(yàn),檢測(cè)綬草中天麻苷對(duì)胰腺M(fèi)DSCs增殖的影響及內(nèi)在信號(hào)通路中節(jié)點(diǎn)蛋白的表達(dá)變化。[結(jié)果]1.T2DM炎癥與胰島β細(xì)胞損傷的研究:(1)與WT小鼠相比,db/db小鼠體重、空腹血糖升高;糖耐量、胰島素耐量受損;胰腺中MDSCs所占比例明顯降低(P0.01);CD8+T細(xì)胞的比例升高(P0.001)。(2)16周時(shí),與WT小鼠相比,db/db小鼠外周血中炎癥因子IL-6、IL-β、TNF-α和TGF-β含量明顯高于對(duì)照組(P0.05);同時(shí),胰島β細(xì)胞數(shù)量和胰島素的分泌減少。2.T2DM胰腺中MDSCs對(duì)CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞損傷作用的研究:(1)胰腺組織中,db/db小鼠MDSCs趨化因子CCL2的基因表達(dá)和胰腺M(fèi)DSCs的比例顯著低于WT小鼠(P0.001)。胰腺M(fèi)DSCs與胰島β細(xì)胞不接觸,而部分CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)在胰島中,與胰島β細(xì)胞相鄰。(2)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,胰腺M(fèi)DSCs抑制CD8+T的增殖。胰島β細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),β細(xì)胞數(shù)量減少;加入胰腺M(fèi)DSCs后,胰島β細(xì)胞存活率升高(P0.001)。3.綬草中天麻苷可以顯著增強(qiáng)胰腺M(fèi)DSCs細(xì)胞活力,并在0.25 ng/ml的濃度時(shí)最為顯著(P0.01);天麻苷對(duì)胰島β細(xì)胞活力無(wú)直接影響。4.天麻苷(0.25 ng/ml)處理胰腺M(fèi)DSCs后,其增殖峰顯著增多。Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示,天麻苷(0.25 ng/ml)處理胰腺M(fèi)DSCs中p38、P-p38、ERK、p65蛋白表達(dá)明顯增多(P0.01)。胰腺M(fèi)DSCs細(xì)胞表面TNFR2受體敲除后,天麻苷對(duì)細(xì)胞p38和p65蛋白表達(dá)沒(méi)有影響。[結(jié)論]1.胰腺M(fèi)DSCs通過(guò)抑制CD8+T細(xì)胞的增殖改善CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞的損傷。2.壯藥綬草中天麻苷通過(guò)激活TNFR2/MAPK信號(hào)通路,促進(jìn)MDSCs細(xì)胞增殖進(jìn)而修復(fù)胰島β細(xì)胞損傷。
【圖文】：

茫蟮南赴銇鮒呈艿蕉嘀中藕磐縭返牡骺兀轡＜鉨牡模]3?有ＡＫＴ、ｍＴＯＲ、ＷＮＴ及ＭＡＰＫ信號(hào)通路。其中，絲裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）是一逡逑個(gè)經(jīng)典的在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中與增殖相關(guān)信號(hào)通路（圖１－３）。通過(guò)激活的特定位點(diǎn)不同可逡逑以將ＭＡＰＫ家族分為三類，，即經(jīng)典的ＭＡＰＫ，應(yīng)激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）和ｐ３８激逡逑酶。ＭＡＰＫ接受來(lái)自不同環(huán)境中各種信號(hào)的刺激，誘發(fā)細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)纳矸磻?yīng)，如細(xì)逡逑胞增殖，分化，發(fā)育。因此，ＭＡＰＫ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞有絲分裂與增殖調(diào)控中起著十逡逑分重要的作用，干預(yù)這一通路傳導(dǎo)中的節(jié)點(diǎn)蛋白表達(dá)，可以影響ＭＤＳＣｓ的增殖。大量逡逑的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，ＭＤＳＣｓ的功能主要表現(xiàn)為促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、微壞境中的血管形成、炎逡逑癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等。在腫瘤中，ＭＤＳＣｓ主要發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)控功能，通過(guò)Ｌ－精氨酸逡逑代謝耗竭途徑、活性氧途徑、ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｙｅｓ邋（ＰＮＴ）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子ＴＧＦ－Ｐ等抑制ＣＤ８＋Ｔ逡逑細(xì)胞及相關(guān)免疫細(xì)胞的增殖和活化。逡逑個(gè)邋Ｓｅｃｒｅｔｅｄ邋ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ逡逑ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ逡逑個(gè)邋Ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ邐二：煖逡逑ｍｅｄｉａｔｏｒｓ邐閂0￥逡逑ＯＮＯＯ逡逑Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ邐Ｗ＃歟攏矗?邐？逡逑ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ邐ｒ逡逑－逡逑、、，ｎ?

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【學(xué)位授予單位】：中央民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R29

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