【摘要】：目的本研究通過觀察針灸干預(yù)酒精性肝損傷大鼠的肝臟的功能、纖維化程度及對組織形態(tài)學(xué)變化,通過其對各指標(biāo)的影響以及相關(guān)蛋白的表達(dá)的影響,研究針刺與艾灸干預(yù)對酒精性肝損傷大鼠肝臟的保護(hù)作用,著重從針刺與艾灸干預(yù)對肝細(xì)胞功能的保護(hù),抗氧化應(yīng)激水平,調(diào)節(jié)肝細(xì)胞炎性因子以及減輕酒精肝損傷后出現(xiàn)的肝組織形態(tài)學(xué)改變,對其進(jìn)行觀察分析,并重點研究和觀察了針刺與艾灸干預(yù)對于Wnt/β-catenin信號通路的影響,來探討針刺與艾灸干預(yù)對大鼠酒精性肝損傷過程中保護(hù)肝臟的可能作用機制。方法選取健康SD大鼠72只,SPF級,雄性,體重180~210g,正常對照組給予蒸餾水灌胃,并給予SPF級鼠糧,其余大鼠隨機分為:模型對照組、“強胃健脾”針刺干預(yù)組、“強胃健脾”艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組,每組12只,采用白酒混合液灌胃配合高脂飼料飲食(56d),其中“強胃健脾”針刺干預(yù)組、“強胃健脾”艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組分別給予穴位針刺和艾灸干預(yù),在最后一次針灸干預(yù)后,剔除針刺和艾灸干預(yù)操作過程中引起局部血腫、燙傷以及解剖后胃腸穿孔的大鼠,并取血,分離血清,并取肝臟�？疾灬槾谈深A(yù)與艾灸干預(yù)對于酒精性肝損傷大鼠的保護(hù)作用以及不同腧穴配伍下針刺干預(yù)與艾灸干預(yù)的效果。微板法(ELISA法)檢測各組血清酶AST、ALT的活力,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測定各組大鼠血清中HA、LN、Hyp以及肝組織中PCⅢ、Ⅳ-C、SOD、MDA、TGF-β1、TIMP-1的含量。采用伊紅染色法制備肝臟切片并在光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠肝組織病理學(xué)變化,免疫組織化學(xué)染色法檢測各組大鼠肝組織的α-平滑肌激動蛋白(α-SMA)的表達(dá),和免疫印跡試驗(Western blotting)檢測各組大鼠肝組織Wnt蛋白、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7)的表達(dá)。結(jié)果1與正常對照組比較,模型對照組大鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、羥脯氨酸(Hyp)含量增加明顯(P0.01)。與模型對照組大鼠比較,“強胃健脾”針刺與艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預(yù)組的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、羥脯氨酸(Hyp)水平明顯低于模型對照組(P0.05或P0.01)。用HE染色觀察對照組大鼠肝組織和細(xì)胞的病理學(xué)特征,視野下肝細(xì)胞清晰可見,且無變性和壞死現(xiàn)象,模型對照組大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性、壞死等現(xiàn)象,并出現(xiàn)嚴(yán)重的肝組織結(jié)構(gòu)破壞和肝索排列紊亂,在肝門管區(qū)和中央靜脈可見炎細(xì)胞浸潤,并看到異常增生的纖維組織,且延伸至小葉內(nèi)形成假小葉。與模型對照組比較,“強胃健脾”針刺與艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預(yù)組大鼠肝細(xì)胞的脂肪變性、水腫、壞死程度明顯低于模型對照組,并且“強胃健脾”針刺干預(yù)和“強胃健脾”艾灸干預(yù)組分別好于“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組和“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組。2通過實驗大鼠肝臟Masson染色觀察可見,正常對照組大鼠肝組織未見明顯膠原沉積于肝門管區(qū)內(nèi)。而模型對照組大鼠有大量明顯增生的纖維組織和膠原沉積于肝門管區(qū)、中央靜脈和肝實質(zhì)中,繼而生成假小葉,不同程度的形成了肝損傷和肝纖維化。與模型對照組比較,“強胃健脾”針刺干預(yù)組、“強胃健脾”艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組膠原沉積明顯低于模型對照組,并且“強胃健脾”針刺干預(yù)組、“強胃健脾”艾灸干預(yù)組膠原沉積也分別較輕于“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組和“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組。3與正常對照組大鼠比較,模型對照組大鼠肝組織Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)、丙二醛(MDA)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)含量明顯上升(P0.01),超氧化物歧化酶(SOD)水平明顯下降(P0.01),與模型對照組比較“強胃健脾”針刺干預(yù)組、“強胃健脾”艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組能夠顯著降低肝組織Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)、丙二醛(MDA)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的含量(P0.05或P0.01),提高肝組織SOD含量(P0.01)。4與正常對照組大鼠比較,模型對照組大鼠肝組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)明顯增加(P0.01);與模型對照組相比,“強胃健脾”針刺干預(yù)組、“強胃健脾”艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組的大鼠肝組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達(dá)顯著下降(P0.01)。與正常對照組大鼠比較,模型對照組大鼠肝組織Wnt蛋白(Wnt)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)的表達(dá)量顯著上升(P0.01)。與模型對照組大鼠比較,“強胃健脾”針刺干預(yù)組、“強胃健脾”艾灸干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”針刺干預(yù)組、“柔肝養(yǎng)血”艾灸干預(yù)組能夠明顯降低肝組織Wnt蛋白(Wnt)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)的表達(dá)量(P0.05或P0.01)。結(jié)論1針刺與艾灸干預(yù)能有效的降低酒精性肝損傷大鼠血清中的AST、ALT含量,達(dá)到保護(hù)肝臟功能的目的。2針灸與艾灸干預(yù)可能通過調(diào)控肝細(xì)胞炎性因子水平,實現(xiàn)對酒精性肝損傷大鼠肝臟的保護(hù)作用。3針刺與艾灸干預(yù)可能通過降低大鼠肝細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,實現(xiàn)對酒精性肝損傷大鼠肝臟的保護(hù)作用。4針刺與艾灸干預(yù)可能通過對Wnt/β-catenin信號通路的干預(yù)來降低肝組織中Wnt,β-catenin,MMP-7的蛋白表達(dá),實現(xiàn)對酒精性肝損傷大鼠肝組織和細(xì)胞的保護(hù)作用。5“強胃健脾”和“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預(yù)對酒精性肝損傷大鼠肝臟均有保護(hù)作用,且“強胃健脾”針刺與艾灸干預(yù)組保護(hù)作用優(yōu)于“柔肝養(yǎng)血”針刺與艾灸干預(yù)組,提示“強胃健脾”可能更符合早中期酒精性肝損傷的防治。
【圖文】：

[141]，，結(jié)合本實驗的實際情況進(jìn)行改良，給予乙醇混合液灌胃（1 ml/100 g/d）如圖1，每日1次，并模擬人類酒精性肝損患者飲食結(jié)構(gòu)，給予高脂飼料飲食，飲水自由，在第56天，最后一次乙醇混合物灌胃結(jié)束3h后，實驗大鼠全部處死，預(yù)備進(jìn)行血清和病理檢測，并剔除針刺和艾灸干預(yù)操作過程中引起局部血腫、燙傷以及解剖后胃腸穿孔的大鼠。表1 模型對照組和針灸干預(yù)組大鼠造模材料配置比例造模材料 成分組成和劑量灌胃乙醇混合液紅星牌 56 度白酒0.5ml/kg/d吡唑27.5 mg/kg/d食用玉米油2 ml/kg /d高脂飼料 SPF 級鼠糧 87% 膽固醇 3% 自制豬油 10%圖1實驗大鼠乙醇混合液灌胃2.2 實驗動物分組實驗動物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將72只大鼠隨機分為6組，每組12只

“強胃健脾”干預(yù)組的大鼠腧穴定位照普通高等教育“十二五”規(guī)劃教材《實驗針灸學(xué)·大鼠針灸穴位圖北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012）中，腧穴位置如下：足三里（后三外側(cè)，在腓骨小頭下約 5mm 處，在脛、腓骨間隙中；三陰交：后肢mm 皮下有趾深屈肌、脛神經(jīng)及脛后動、靜脈分布 直刺 5mm；中脘：上約 20mm，皮下有腹壁動、靜脈及第 10 脊神經(jīng)分布，直刺 2mm。針刺和艾灸操作手法刺干預(yù)組用華佗牌 0.18*13mm 規(guī)格的針灸針，足三里（大鼠穴位后毫針，直刺 2mm；三陰交：0.5 寸毫針，直刺 5mm；中脘：直刺 2mm用自制艾線，平均直徑在 2-3mm，采用懸灸法，每次單個穴位操作 3m
【學(xué)位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2674540