【摘要】：[目的]通過對喜馬拉雅大戟的蒙醫(yī)功效和毒性評價,篩選具有蒙醫(yī)主要功效的活性部位,并對其主要化學成分和指標性成分進行分析,為喜馬拉雅大戟的蒙醫(yī)臨床應用提供科學依據。通過建立喜馬拉雅大戟的炮制規(guī)范,闡釋炮制原理,為喜馬拉雅大戟飲片的臨床應用和產業(yè)化提供實驗數據。通過比較喜馬拉雅大戟的炮制前后主要藥效作用,論證其“不炮則催吐,炮則導瀉”的蒙醫(yī)傳統功效特征和“改變藥物功效而符合病情”為目的的蒙醫(yī)炮制理論。[方法]采用小鼠瀉下試驗(排便時間和濾紙稀便痕跡法),大鼠催吐試驗(異癖高嶺土法),大鼠利尿試驗(代謝籠法),小鼠急性毒性試驗(改良寇氏法)等實驗方法評價喜馬拉雅大戟的瀉下、催吐、利尿作用和毒性;采用煎煮、回流、萃取等提取方法,對喜馬拉雅大戟的水、乙醇和石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇部位進行提取,并通過小鼠瀉下試驗(排便時間和濾紙稀便痕跡法)篩選出有效部位;采用超高效液相色譜串聯質譜快速鑒定法分析鑒定喜馬拉雅大戟瀉下活性部位的主要化學成分,通過參考文獻及藥材植物性質篩選指標性成分,并建立了其含量測定的高效液相色譜法;采用炮制品傳統外觀、主要藥效和主要活性成分總萜含量為觀察指標,通過多指標加權綜合分析正交試驗,確定喜馬拉雅大戟最佳炮制工藝條件,并建立其飲片質量標準;采用小鼠瀉下試驗(排便時間和濾紙稀便痕跡法)、大鼠催吐試驗(異癖高嶺土法)、小鼠急性毒性試驗(改良寇氏法)、兔皮膚刺激性試驗、兔眼刺激性試驗、小鼠腸推進試驗(活性炭法)等動物實驗方法,結合UP-MS、BCA、PCA、OPLS-DA等分析方法和統計方法,比較喜馬拉雅大戟炮制前后瀉下作用、催吐作用、毒性,刺激性和對小腸運動、腸粘膜和腸組織蛋白的影響,以及化學成分變化。[結果](1)喜馬拉雅大戟各劑量組小鼠開始排稀便時間和6h內稀便痕跡均有非常顯著性差異(P0.01);高劑量組大鼠異癖高嶺土量有非常顯著性差異(P0.01),低劑量組則無顯著性差異(P0.05);各劑量組6h尿量無顯著性差異(P0.05);小鼠灌胃LC50為9.63±1.548/kg,其95%可信區(qū)限為8.2～11.298/kg。(2)喜馬拉雅大戟醇提取物組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組小鼠開始排稀便時間和6h內稀便痕跡有非常顯著性差異(P0.01),氯仿部位組有顯著性差異(P0.05),水提取物組和正丁醇部位組無顯著性差異(P0.05)。(3)在喜馬拉雅大戟石油醚部位共鑒定出了22個化合物,其中三萜類化合物3個,二萜類化合物19個;其中羊毛甾醇在0.006mg/mL～0.16mg/mL(2=0.9999)范圍之內有良好的線性關系,平均回收率為101.31%,平均含量為6.王7mg/g(4)喜馬拉雅大戟的最佳炮制工藝條件為藥材和青稞比例為1:10,青稞溫度為120℃,煨制時間為40min;飲片薄層色譜斑點清晰,分離較好,Rf=0.39;規(guī)定水分不得過8.0%,總灰分不得過7.0%,酸不溶性灰分不得過3.0%,醇溶性浸出物(熱浸法)不得少于15.0%,羊毛茲醇含量不得少于3.0mg/g。(5)制喜馬拉雅大戟各劑量組小鼠開始排稀便時間和6h內稀便痕跡均有非常顯著性差異(P0.01),各劑量組大鼠異癖高嶺土量無顯著性差異(P0.05),其小鼠灌胃LD50為14.04±1.92g/kg,95%可信區(qū)限為12.25～16.08g/kg;與炮制前相比導瀉作用減弱約10%,催吐作用顯著減弱,毒性降低約45%。喜馬拉雅大戟對兔正常皮膚有中度刺激性,對兔眼有強刺激性,并能夠明顯促進小鼠小腸內活性炭的推進率(P0.01),同時可使小鼠小腸絨毛的融合、萎縮,腸絨毛上皮細胞的炎性滲出、空泡變性和壞死;而制喜馬拉雅大戟對兔正常皮膚有輕度刺激性,對兔眼有中度刺激性,并能夠促進小鼠小腸內活性炭的推進率(P0.01或P0.05),同時僅會引起小鼠小腸少量腸絨毛尖部上皮細胞的染色變淺。從喜馬拉雅大戟生品組和炮制品組小鼠小腸提取鑒定的16種差異表達蛋白與體內13個生物過程、5個分子功能、1個所處細胞位置和Mucin type 0-glycan biosynthesis、Prion diseases、Base excision repair等3個代謝通路有密切關系。喜馬拉雅大戟炮制前后有重要貢獻的差異標志物主要為Geraniin、8-0-Tigloylingol、Helioscopinolide E、17-Hydroxyjolkinolide B等。[結論]喜馬拉雅大戟具有顯著的導瀉、催吐藥理活性,沒有利尿作用,具有一定的毒性,屬于中等毒性藥物。其石油醚部位是導瀉作用的主要活性部位,主要含有二萜和三萜類成分。喜馬拉雅大戟青稞制炮制方法既符合蒙醫(yī)傳統炮制要求,也符合《中國藥典》相關要求。炮制后其瀉下作用明顯緩和,催吐作用變?yōu)椴伙@著與其炮制后包括強刺激性的毒性降低有關,也與因強刺激性而引發(fā)的促進小腸推進運動和小腸腸壁的腸絨毛病變、小腸腸粘膜炎性細胞滲出及以Anxa10、Dctpp1、St6galnac為主的小腸組織蛋白質有關。其物質基礎是以 8-0-Tigloylingol、Helioscopinolide E、17-Hydroxyjolkinolide B為代表的萜類化合物。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R29

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