本文關鍵詞：不同時間點針刺介入對心肌缺血大鼠腦損傷神經元保護作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察心肌缺血后不同時間點腦損傷程度的變化,以及不同時間點針刺介入對心肌缺血大鼠海馬神經元Bax、Bcl-2蛋白的變化,探討針刺干預對心肌缺血大鼠海馬神經元的保護作用及部分機理,為臨床選擇較佳時機針刺介入提供實驗依據,也為“心主神明”理論研究奠定實驗基礎。方法1.選用健康SD大鼠60只(質量為220±20g),隨機分為偽手術組、即刻組、24h組、3d組、5d組,每組8只,余下常規(guī)飼養(yǎng),以備補充實驗用。偽手術組只開胸不做冠狀動脈血管結扎,其他各組均制成心肌缺血模型,分別在造模后立刻、24h、3d、5d后處死取材,通過光鏡、透射電鏡觀察大鼠海馬組織形態(tài)學和超微結構變化,免疫組化法檢測各組海馬神經元Bax、Bcl-2蛋白的表達。2.選用健康SD大鼠60只(質量為220±20g),隨機分為偽手術組、模型組、即刻針刺組、24h針刺組、3d針刺組,每組8只,余下常規(guī)飼養(yǎng),以備補充實驗用。偽手術組只開胸不做冠狀動脈血管結扎,其他各組均制成心肌缺血模型。選雙側神門、心俞電針治療,偽手術組、模型組不做針刺治療,其余各組分別在造模后立刻、24h、3d后電針治療,每次30min,每日一次,連續(xù)7天,待結束點,在第11日取材,觀察、檢測相關指標:光鏡下觀察海馬組織形態(tài)學改變;免疫組化法檢測海馬神經元Bax、Bcl-2蛋白的表達;RT-PCR法檢測海馬神經元BaxmRNA、Bcl-2 mRNA的相對表達量。結果1.心肌缺血大鼠不同時間點腦損傷程度變化(1)光鏡下觀察各組海馬組織形態(tài)學變化:偽手術組海馬組織神經元細胞分布較清晰、排列整齊、形態(tài)較為完整,胞核呈藍色,多為橢圓形、圓形或錐形,輪廓清晰,染色較為均勻;模型各組出現不同程度神經元細胞分布模糊、排列不齊、細胞減少、染色不均。即刻組、24h組、3d組、5d組呈逐漸加重趨勢。(2)透射電鏡觀察海馬組織超微結構變化:偽手術組海馬神經元結構整體完好,模型各組不種程度出現神經元細胞器含量減少、腫脹、擴張,病理改變依次隨時間而加重。(3)免疫組織化學法檢測海馬組織中Bax、Bcl-2蛋白的表達:陽性表達物主要分布在神經細胞內,以小顆粒分布為主,部分呈現聚集分布。偽手術組、即刻組、24h組、3d組、5d組Bax的表達依次增多,Bcl-2的表達依次減少,各組間進行兩兩比較,除3d組與5d組無統(tǒng)計學差異(P0.05),其他各組間均具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。2.不同時間點針刺介入對心肌缺血大鼠腦損傷海馬神經元Bax、Bcl-2調控的作用(1)光鏡下觀察海馬形態(tài)學變化:偽手術組神經元細胞分布清晰、排列整齊、形態(tài)完整,胞核呈藍色,形狀多為橢圓形、圓形或錐形狀,輪廓清晰,染色均勻;模型組神經元細胞分布模糊、排列不齊、細胞減少、染色不均;針刺各組較模型組病理改變均有所減輕,其中即刻針刺組改善最為明顯,24h針刺組、3d針刺組改善依次變差。(2)免疫組織化學法檢測各組Bax、Bcl-2蛋白的表達:各組Bax、Bcl-2陽性細胞均有表達,其中Bax:模型組3d針刺組24h針刺組即可針刺組偽手術組;Bcl-2:模型組3d針刺組24h針刺組即可針刺組偽手術組;各組分別進行組間兩兩比較,均具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。(3)RT-PCR法檢測各組Bax mRNA、Bcl-2 mRNA相對表達量:檢測結果和免疫組織化學法檢測一致,針刺可以上調海馬組織中Bcl-2 mRNA水平的表達,下調Bax mRNA水平的表達,且即可針刺組明顯優(yōu)于24h針刺組、3d針刺組,24h針刺組優(yōu)于3d針刺組。結論1.大鼠心肌缺血可導致腦損傷,即刻組、24h組、3d組、5d組損傷程度依次加重,3d組與5d組差異不明顯,其機制可能與凋亡因子Bax、Bcl-2的表達相關。2.電針可對心肌缺血大鼠腦損傷海馬神經元起到保護作用;其保護作用機制可能與電針能下調大鼠腦組織Bax及Bax mRNA水平的表達,上調Bcl-2及Bcl-2 mRNA水平的表達有關。3.針刺治療心肌缺血腦損傷應在心肌缺血出現的早期,這樣更有利于發(fā)揮針刺下調Bax上調Bcl-2蛋白以及其相應mRNA的表達的作用,從而達到保護大腦神經元的目的。
【關鍵詞】：心肌缺血 腦損傷 不同時間點 電針 Bax Bcl-2 神門 心俞
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R245
【目錄】：

• 一、中文摘要7-9
• 二、Abstract9-12
• 三、縮略詞中英文對照表12-13
• 四、前言13-16
• 五、技術路線圖16-17
• 六、實驗研究17-48
• 實驗一 心肌缺血大鼠不同時間點腦損傷程度變化17-31
• 1.材料17-18
• 1.1 實驗動物17
• 1.2 材料與試劑17
• 1.3 主要儀器17-18
• 1.4 軟件18
• 2.方法18-23
• 2.1 動物選擇及分組18-19
• 2.2 模型復制19-20
• 2.2.1 復制方法19
• 2.2.2 納入標準19
• 2.2.3 剔除標準19-20
• 2.3 標本采集20
• 2.4 觀察指標20-22
• 2.4.1 HE染色步驟20
• 2.4.2 免疫組化操作步驟20-21
• 2.4.3 電鏡檢測21-22
• 2.5 統(tǒng)計學方法22-23
• 3.實驗結果與分析23-30
• 3.1 心肌缺血模型大鼠心電圖結果23-24
• 3.2 HE染色光鏡下檢測24-25
• 3.3 透射電鏡檢測25-26
• 3.4 免疫組化法檢測各組大鼠海馬神經元Bax蛋白表達26-28
• 3.5 免疫組化法檢測各組大鼠海馬神經元Bcl-2 蛋白表達28-30
• 4.小結30-31
• 實驗二 不同時間點針刺介入對心肌缺血大鼠腦損傷海馬神經元Bax、Bcl-2 調控的作用31-48
• 1.實驗材料31-33
• 1.1 實驗動物31
• 1.2 主要試劑31-32
• 1.3 主要儀器32-33
• 1.4 軟件33
• 2.實驗方法33-37
• 2.1 動物選擇、分組及模型制備33-34
• 2.2 針刺治療34
• 2.2.1 穴位選擇34
• 2.2.3 針刺方法34
• 2.3 標本采集34
• 2.4 指標檢測34-37
• 2.4.1 HE染色光鏡檢測35
• 2.4.2 免疫組化法檢測海馬組織Bax、BCl-2 的表達35
• 2.4.3 RT-PCR檢測各組海馬組織BaxmRNA、Bcl-2mRNA的表達35-37
• 2.5 統(tǒng)計學方法37
• 3.實驗結果與分析37-46
• 3.1 HE染色光鏡觀察37-38
• 3.2 免疫組織化學法檢測Bax、Bcl-2 蛋白變化結果與分析38-42
• 3.2.1 免疫組化法檢測各組大鼠海馬組織Bax蛋白的表 達38-40
• 3.2.2 免疫組化法檢測各組大鼠海馬組織Bcl-2 蛋白的表達40-42
• 3.3 實時熒光定量PCR檢測結果與分析42-46
• 3.3.1 RT-PCR技術檢測Bax、Bcl-2 基因含量的溶解曲線圖42-43
• 3.3.2 RT-PCR技術檢測Bax、Bcl-2 基因含量的擴增曲線圖43-44
• 3.3.3 各組海馬組織BaxmRNA、Bcl-2mRNA相對表達量變化比較44-46
• 4.小結46-48
• 七、討論48-55
• 1.“心主神明”理論及現代研究48-49
• 2.心肌缺血腦損傷研究進展49
• 3.凋亡基因Bax、Bcl-2 在心肌缺血腦損傷中的應用研究49-52
• 3.1 凋亡基因Bax、Bcl-2 的概述49-50
• 3.2 Bax、Bcl-2 作用機制50
• 3.3 在治療心肌缺血中的應用研究50-51
• 3.4 在治療腦損傷中的應用研究51-52
• 4. 穴位選取依據52-53
• 5. 心肌缺血后腦組織形態(tài)學改變及針刺對其影響53
• 6. 心肌缺血大鼠腦損傷不同時間點Bax、Bcl-2 的變化及針刺對其影響53-55
• 八、結論55-56
• 九、不足與展望56-57
• 十、創(chuàng)新57-58
• 十一、參考文獻58-65
• 十二、附件材料65-75
• 附件材料 1：綜述65-73
• 參考文獻69-73
• 附件材料 2：研究生在讀期間發(fā)表論文和參與課題情況73-74
• 附件材料 3：個人簡介74-75
• 十三、致謝75

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 王靚;趙殊;杜明蘭;;幾種常用中藥對心肌缺血—再灌注損傷的防治研究[J];中國衛(wèi)生產業(yè);2014年01期

2 王曙光,徐小虎,高慶春,黃如訓;急性心肌缺血再灌注對腦組織的影響[J];中國神經精神疾病雜志;2001年03期

3 劉雅,董振明;白細胞與心肌缺血再灌注損傷[J];河北醫(yī)藥;2001年12期

4 林函;心肌缺血再灌注損傷中線粒體的作用[J];國外醫(yī)學.麻醉學與復蘇分冊;2002年05期

5 張英杰;血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑在心肌缺血再灌注損傷中的作用[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志;2002年02期

6 高國棟,韓志巖;核因子-κB與心肌缺血再灌注損傷[J];中國分子心臟病學雜志;2002年06期

7 楊陽;中醫(yī)藥防治心肌缺血再灌注損傷研究新進展[J];現代中西醫(yī)結合雜志;2003年11期

8 楊彥玲,師養(yǎng)榮,李建龍,陳雅慧;心肌缺血再灌注損傷研究進展[J];心血管病學進展;2003年02期

9 李領召,張昱;中醫(yī)藥防治心肌缺血再灌注損傷研究進展[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2003年S1期

10 朱彬,萬朝敏,郭慧玲,肖靜,王正榮;心肌缺血再灌注損傷時心肌肌球蛋白ATP酶活性的改變[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2004年02期

中國重要會議論文全文數據庫 前10條

1 王彩歌;王永霞;;心肌缺血再灌注損傷研究進展[A];第二屆全國中西醫(yī)結合心血管病中青年論壇暨第二屆黃河心血管病防治論壇資料匯編[C];2011年

2 李長嶺;蔣峻;樊友啟;丁芳;Wieming Fan;Ling Wei;;腫瘤壞死因子a受體1敲除對心肌缺血再灌注損傷作用的研究[A];2006年浙江省內科學學術年會、2006年浙江省老年醫(yī)學學術年會論文匯編[C];2006年

3 王彩歌;王永霞;;心肌缺血再灌注損傷研究進展[A];2011年中華中醫(yī)藥學會心病分會學術年會暨北京中醫(yī)藥學會心血管病專業(yè)委員會年會論文集[C];2011年

4 陳協(xié)輝;李鵬;黃小平;王東明;陳宋明;楊澤民;陳智凡;許文敏;陳麗萍;;氣體信號分子硫化氫對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

5 李培軍;;心肌缺血再灌注損傷——基礎與臨床[A];中華醫(yī)學會第一屆重癥心臟全國學術大會暨第二屆西湖重癥醫(yī)學論壇、2013年浙江省重癥醫(yī)學學術年會論文匯編[C];2013年

6 彭濤;徐明江;滕旭;管又飛;;AZ12417698對大鼠心肌缺血/再灌注損傷保護作用的研究[A];中國生理學會第23屆全國會員代表大會暨生理學學術大會論文摘要文集[C];2010年

7 吳儀;謝中光;;心肌缺血再灌注,有關自由基的幾個問題(簡報)[A];第三次全國急診醫(yī)學學術會議論文摘要匯編[C];1990年

8 辛平;朱偉;李靜;劉銘雅;李京波;Andrew N.Redington;魏盟;;缺血后處理聯合遠端缺血期處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護的研究[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

9 吳志明;董麗莉;樊冰;潘翠珍;舒先紅;;斑點追蹤顯像技術評價心肌缺血再灌注對心肌扭轉影響的實驗研究[A];第十屆全國超聲心動圖學術會議論文[C];2010年

10 袁肇凱;黃獻平;曹金枝;胡志希;簡亞平;;心肌缺血再灌注損傷大鼠冠狀微循環(huán)改變的實驗研究[A];中國微循環(huán)學會第五屆中國微循環(huán)學術大會論文摘要匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數據庫 前7條

1 陶春祥;何占德;中藥單體防治心肌缺血/再灌注損傷[N];中國醫(yī)藥報;2004年

2 陶春祥 何占德;中醫(yī)方藥防治MI／R損傷研究[N];中國醫(yī)藥報;2004年

3 廣文;讓心肌重現生機[N];醫(yī)藥經濟報;2003年

4 武開宏;心肌也能再生[N];健康報;2005年

5 ;防治急性心肌缺血再灌注損傷實驗研究通過鑒定[N];中國高新技術產業(yè)導報;2001年

6 江蘇省中醫(yī)藥研究院 李偉　沈明勤 陸曉暉;中藥防治心肌缺血再灌注損傷作用機制探討[N];中國醫(yī)藥報;2011年

7 ;中藥可用于心臟保存[N];中國醫(yī)藥報;2003年

中國博士學位論文全文數據庫 前10條

1 姚恒臣;HMGB1對大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用及信號傳導通路[D];山東大學;2015年

2 郭小芙;內質網應激在高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用[D];蘇州大學;2015年

3 高超;TXNIP在心肌缺血再灌注中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

4 趙智剛;蒽貝素對心臟驟停模型中心肌缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究[D];武漢大學;2015年

5 陳邦黨;CaMEK基因靶向轉導減輕老齡心肌缺血再灌注損傷的機制研究[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

6 李俊平;益氣活血安神法通過抑制鈣超載減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷的實驗研究[D];中國中醫(yī)科學院;2016年

7 張娟;HMGB1在電針內關穴對心肌缺血再灌注損傷保護作用中的機制研究[D];上海交通大學;2015年

8 吳娜;硝酸酯藥物后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的研究[D];青島大學;2015年

9 幺天保;維生素D受體在心肌缺血再灌注損傷中的作用及其機制研究[D];上海交通大學;2014年

10 閆福曼;心肌微環(huán)境誘導間充質干細胞通道蛋白表達及丹參酮的干預作用研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2009年

中國碩士學位論文全文數據庫 前10條

1 保善錄;藏藥四味辣根菜湯散對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[D];青海大學;2016年

2 陳曦;PPENK-MIDGE-NLS轉染白細胞減輕心肌缺血再灌注損傷[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

3 陳才;川陳皮素后處理減輕心肌缺血再灌注損傷時細胞凋亡[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

4 趙仙雅;熊去氧膽酸在恢復舒芬太尼后處理減輕2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

5 伊力哈木·阿卜杜外力;維醫(yī)成熟療法對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[D];新疆醫(yī)科大學;2016年

6 黃丹;ClC-3氯通道蛋白在腎上腺素能受體激動所致心肌肥厚中的作用研究[D];廣東藥科大學;2016年

7 趙雯潔;新型合成化合物DIMO后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護[D];蘇州大學;2016年

8 張靜靜;右美托咪定抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信號通路減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷[D];蘇州大學;2016年

9 付慧;長鏈非編碼RNA在嗎啡成癮及心肌缺血再灌注損傷中作用的初步探究[D];山東大學;2016年

10 張曉露;電針內關對心肌缺血ASIC3~(-/-)小鼠內向整流鉀離子通道相關蛋白表達的影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2016年

  本文關鍵詞：不同時間點針刺介入對心肌缺血大鼠腦損傷神經元保護作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：251297