【摘要】：目的:波棱瓜子是藏藥防治肝病的傳統(tǒng)藥物,具有清熱解毒、保肝利膽等功效,臨床上主要用于對(duì)肝炎的防護(hù),以及肝病的輔助治療。本課題組前期實(shí)驗(yàn)表明,波棱瓜子總木脂素部位是波棱瓜子治療肝病的有效部位之一,對(duì)CCl4(四氯化碳)、酒精等引起的的急、慢性肝損傷和治療ConA(刀豆球蛋白)等引起的免疫性肝損傷具有確切的保護(hù)作用。肝臟因物理、化學(xué)或藥物等因素造成損傷后,機(jī)體自身會(huì)分泌各種因子自我調(diào)節(jié),從而恢復(fù)肝臟功能及修復(fù)損傷組織,并在損傷嚴(yán)重時(shí)刺激肝細(xì)胞的再生,但藏藥波棱瓜子總木脂素部位是否對(duì)70%(2/3)肝切除所引起的肝損傷具有修復(fù)作用和是否對(duì)肝再生具有促進(jìn)作用目前尚未清楚。因此,本研究將建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,從波棱瓜子總木脂素部位對(duì)肝功能、肝再生藥效作用及機(jī)制,以及波棱瓜子總木脂素部位對(duì)不同月齡的小鼠術(shù)后肝功能、肝再生藥效作用等多個(gè)方面,系統(tǒng)的研究藏藥總木脂素部位對(duì)肝部分切除模型的損傷修復(fù)及肝再生的作用,并初步探討其作用機(jī)制。方法:1小鼠70%(2/3)肝切除模型的建立:采用結(jié)扎切除的手術(shù)方法,建立肝臟切除模型,在無菌環(huán)境條件下通過乙醚麻醉小鼠,切開小鼠腹部暴露肝臟,取4-0醫(yī)用縫合線,依次結(jié)扎小鼠的左外葉、左中葉及右中葉的肝蒂并將其切下(約切除小鼠原肝臟68%的重量),縫合腹部并等待小鼠蘇醒,記錄體重及肝重。以小鼠成功蘇醒并活動(dòng)自由作為手術(shù)成功的標(biāo)志。2藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝功能及肝再生的影響:(1)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝臟修復(fù)的影響:小鼠平均分為空白組、模型(手術(shù))組、丹參注射劑組、總木脂素(15 g/kg)組和總木脂素(25 g/kg)組,建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,(1)通過生化檢測(cè)肝切除小鼠血清中AST、ALT、ALB含量及小鼠再生肝組織中CRP含量,觀察藥物對(duì)小鼠術(shù)后肝功能的影響;(2)通過組織病理檢測(cè)小鼠肝臟組織形態(tài),免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝切除小鼠再生肝組織中PCNA和Ki67蛋白的表達(dá),記錄肝重并計(jì)算肝再生率,觀察藥物對(duì)小鼠術(shù)后肝再生的影響。(2)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)不同月齡小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝臟修復(fù)的影響:小鼠按月齡分成4組,即低齡模型組、低齡總木脂素25 g/kg組和高齡模型組、高齡總木脂素25 g/kg組,建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,(1)通過生化檢測(cè)肝切除小鼠血清中AST、ALT、ALB含量,觀察藥物對(duì)不同月齡小鼠術(shù)后肝功能的影響;(2)肝通過組織病理檢測(cè)小鼠肝臟組織形態(tài),免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝切除小鼠再生肝組織中PCNA蛋白的表達(dá),觀察藥物對(duì)不同月齡小鼠術(shù)后肝再生的影響。3藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝臟修復(fù)的影響機(jī)制:建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,檢測(cè)肝切除小鼠再生肝組織中IL-6、NF-κB和TNF-a的含量,初步探討藥物對(duì)小鼠術(shù)后肝臟的修復(fù)機(jī)制。結(jié)果:1小鼠70%(2/3)肝切除模型的建立:從麻醉小鼠到縫合并消毒切口,完成一只小鼠手術(shù)的時(shí)間為15~20 min。實(shí)驗(yàn)在確保每組小鼠存活數(shù)量的前提下,小鼠實(shí)施手術(shù)的成功率為93.4%。手術(shù)成功的小鼠術(shù)后能夠自由活動(dòng),正常飲食,腹部傷口愈合良好。2藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝功能及肝再生的影響:(1)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝臟修復(fù)的影響:相比空白組,術(shù)后模型組小鼠的AST升高而ALB減少,ALT及CRP的含量在7 d左右達(dá)到峰值,血清中其酶活力隨術(shù)后時(shí)間變化呈現(xiàn)下降趨勢(shì),但效果緩慢,通過給予相應(yīng)劑量的總木脂素和丹參注射劑后,與模型組相比,給予總木脂素的小鼠可見AST和ALT隨時(shí)間有不同程度的下降趨勢(shì),CRP含量明顯下降,ALB的含量上調(diào);觀察小鼠肝組織病理,各組小鼠肝臟細(xì)胞在術(shù)后短期內(nèi)出現(xiàn)細(xì)胞壞死、水腫及炎癥,與模型組相比,給予相應(yīng)藥物的小鼠細(xì)胞情況得以改善,肝臟細(xì)胞增殖數(shù)量逐漸增多,細(xì)胞的形態(tài)也隨時(shí)間的變化趨于正常;觀察小鼠術(shù)后PCNA和Ki67表達(dá),與空白組和模型組對(duì)比,各給藥組小鼠PCNA和Ki67蛋白的表達(dá)在后期均有不同程度的增加。(2)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)不同月齡小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝臟修復(fù)的影響:不同月齡小鼠在肝切除術(shù)后AST及ALT升高,ALB的含量隨時(shí)間有不同程度的減少,與模型組比較,通過給予總木脂素的小鼠AST和ALT隨時(shí)間有不同程度的下降趨勢(shì),而ALB的含量均隨時(shí)間有所上調(diào);觀察不同月齡小鼠術(shù)后組織病理,模型組小鼠在1 d時(shí)出現(xiàn)大量的水腫、空泡變性和壞死,隨時(shí)間細(xì)胞開始出現(xiàn)少量的分裂增殖現(xiàn)象,與模型組比較,不同月齡總木脂素組小鼠術(shù)后肝細(xì)胞出現(xiàn)少量、輕度的空泡樣變或顆粒變性,肝細(xì)胞核分裂相增多,細(xì)胞體積變小,數(shù)量增多,肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對(duì)完整;觀察小鼠術(shù)后PCNA表達(dá),與模型組對(duì)比,給予總木脂素的不同月齡小鼠的PCNA蛋白表達(dá)在后期均有不同程度的增加,但不同月齡小鼠間比較并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)小鼠70%(2/3)肝切除術(shù)后肝臟修復(fù)的影響機(jī)制:與空白組比較,模型組小鼠術(shù)后IL-6、NF-κB和TNF-a的表達(dá)均有不同程度的上升,與模型組比較,給予總木脂素的肝切除小鼠能夠不同程度的降低前期IL-6、NF-κB和TNF-a的含量,提示機(jī)制可能與抑制IL-6/STAT-3等信號(hào)通路有關(guān),藏藥波棱瓜子總木脂素部位能夠減輕手術(shù)引起的損傷及炎癥,保護(hù)肝臟。結(jié)論:以上實(shí)驗(yàn)表明,藏藥波棱瓜子總木脂素部位對(duì)70%肝切除小鼠具有一定的保護(hù)作用,對(duì)肝損傷有一定的修復(fù)作用,能夠促進(jìn)肝臟再生及延長(zhǎng)再生時(shí)間,抑制IL-6/STAT-3等信號(hào)通路,對(duì)不同月齡的肝切除小鼠同樣具有抗炎抗損傷及促進(jìn)肝再生作用,推測(cè)其機(jī)制可能與減輕炎癥因子的釋放、減少炎癥、恢復(fù)細(xì)胞形態(tài)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R29

【參考文獻(xiàn)】

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2 王蕾;劉思洋;孫寧陽;李佳川;顧健;;藏藥波棱瓜子有效成分波棱素對(duì)ConA誘導(dǎo)的免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2016年05期

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本文編號(hào)：2478406