【摘要】：實(shí)驗(yàn)一痰濕體質(zhì)DNA甲基似表達(dá)譜研究目的：1、在全基因組范圍內(nèi)比較痰濕體質(zhì)和平和體質(zhì)外周血單個(gè)核細(xì)胞中DNA甲基化表達(dá)水平,進(jìn)行DNA甲基化表達(dá)譜構(gòu)建。2、篩選痰濕體質(zhì)特異的DNA甲基化位點(diǎn),為痰濕體質(zhì)的微觀辨識(shí)提供生物學(xué)依據(jù),探討DNA甲基化在痰濕體質(zhì)形成中的潛在作用。方法：1、通過(guò)收集痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)8例和平和體質(zhì)健康狀態(tài)4例外周血樣本,分離單個(gè)核細(xì)胞提取DNA進(jìn)行Illumina Human Methylation 450K BeadChip高通量基因芯片檢測(cè)。2、通過(guò)對(duì)表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,篩選出差異表達(dá)DNA甲基化位點(diǎn)。3、對(duì)差異表達(dá)位點(diǎn)所注釋到的基因進(jìn)行功能富集分析。結(jié)果：1、兩組樣本間性別、年齡、BMI等基本情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)共篩選出288個(gè)DNA甲基化差異位點(diǎn),包括187個(gè)高甲基化位點(diǎn)和101個(gè)低甲基化位點(diǎn)。這些差異位點(diǎn)可注釋到256個(gè)基因,其中有169個(gè)高甲基化基因和87個(gè)低甲基化基因。3、Δβ差異最大位點(diǎn)為cg21498547(Δβ=0.495)被注釋到基因DLGAP2經(jīng)1PA注釋顯示與非胰島素依賴型糖尿病相關(guān)。另外通過(guò)曼哈頓圖分析我們篩選出了差異表達(dá)位點(diǎn)(p1e-04),依據(jù)△β進(jìn)行排序,差異最明顯的CpG位點(diǎn)是cgl 7796323,被注釋到基因N4BP3。另外在總共288個(gè)差異位點(diǎn)中cg22151-4和cg18473521兩個(gè)位點(diǎn)都被注釋到基因HOXC4,文獻(xiàn)報(bào)道顯示HOXC4基因與脂肪積累和肥胖具有相關(guān)性。4、IPA分析揭示高甲基化差異基因如B4GALNT1, ST6GALNAC5, DHCR24, MVK, STARD3, PRKCZ與脂類代謝密切相關(guān),另外IPA分析顯示高甲基化差異基因的分子和細(xì)胞功能主要與免疫和炎癥反應(yīng)性疾病相關(guān),與前期研究相符合。結(jié)論：1、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)在全基因組層面存在系統(tǒng)性的DNA甲基化表達(dá)譜差異。2、在性別、年齡、BMI等基本情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異并且兩組樣本皆為未病狀態(tài)下,發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)存在DNA甲基化表達(dá)差異,證明痰濕體質(zhì)是有別于肥胖的-種獨(dú)立致病因素。3、痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)下即存在著DNA甲基化層面的異常改變,并且注釋到的基因可富集到代謝相關(guān)的分子通路,顯示痰濕體質(zhì)具有易發(fā)代謝性疾病的分子基礎(chǔ)。4、本研究初步構(gòu)建了痰濕體質(zhì)DNA甲基化表達(dá)譜,并篩選了差異表達(dá)位點(diǎn),為后續(xù)的痰濕體質(zhì)微觀辨識(shí)和分子機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)二痰濕體質(zhì)miRN A表達(dá)譜研究目的：1、在全基因組范圍內(nèi)比較痰濕體質(zhì)和平和體質(zhì)外周血單個(gè)核細(xì)胞中miRNA表達(dá)水平,進(jìn)行]miRNA表達(dá)譜構(gòu)建。2、篩選痰濕體質(zhì)的差異表達(dá)]miRNA,為痰濕體質(zhì)的微觀辨識(shí)提供生物學(xué)依據(jù),探討miRNA在痰濕體質(zhì)形成中的潛在作用。方法：1、本實(shí)驗(yàn)共招募平和體質(zhì)組健康狀態(tài)3例、痰濕體質(zhì)組未病狀態(tài)3例以及痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者4例共10名志愿者,空腹采集外周血,分離單個(gè)核細(xì)胞提取RNA進(jìn)行Human miRNA OneArray(?)高通量基因芯片檢測(cè)。2、通過(guò)對(duì)miRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,篩選出差異表達(dá)miRNA。3、對(duì)差異表達(dá)miRNA進(jìn)行靶基因分析,并對(duì)靶基因進(jìn)行功能富集分析。結(jié)果：1、本研究發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)與平和體質(zhì)健康組相比共有73個(gè)差異表達(dá)miRNA包括32個(gè)上調(diào)差異miRNA和41個(gè)下調(diào)差異]miRNA。另外痰濕體質(zhì)代謝綜合征組與痰濕體質(zhì)未病組比餃,共篩選出14個(gè)差異表達(dá)miRNA,包括8個(gè)上調(diào)差異miRNA和6個(gè)下調(diào)差異miRNA。2、痰濕體質(zhì)差異表達(dá)miRNA上調(diào)最顯著者為!hsa-miR-1228-5p,下調(diào)最顯著者為1isa-miR-363-5p,可為痰濕體質(zhì)分子辨識(shí)提供潛在生物標(biāo)記物。3、通過(guò)對(duì)差異表達(dá)：miRNA的靶基因進(jìn)行功能分析發(fā)現(xiàn),靶基因可富集到多個(gè)代謝相關(guān)的GO生物過(guò)程條目,以及多個(gè)KEGG腫瘤相關(guān)通路。結(jié)論：1、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)在全基因組層面存在系統(tǒng)性的miRNA表達(dá)譜差異。2、痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)下即存在著miRNA層面的異常改變,并且差異miRNA的靶基因可富集到代謝相關(guān)的分子通路,顯示痰濕體質(zhì)具有易發(fā)代謝性疾病的分子基礎(chǔ)。3、本研究初步構(gòu)建了痰濕體質(zhì)miRNA表達(dá)譜,并篩選了差異表達(dá)miRNA,為后續(xù)的痰濕體質(zhì)微觀辨識(shí)和分子機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)三痰濕體質(zhì)IncRNA表達(dá)譜研究目的：1、在全基因組范圍內(nèi)比較痰體質(zhì)和平和體質(zhì)外周血單個(gè)核細(xì)胞中l(wèi)ncRNA表達(dá)水平,進(jìn)行IncRNA表達(dá)譜構(gòu)建。2、篩選痰濕體質(zhì)的差異表達(dá)IncRNA,為痰濕體質(zhì)的微觀辨識(shí)提供生物學(xué)依據(jù),探討IncRNA在痰濕體質(zhì)形成中的潛在作用。3、通過(guò)比較痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)與痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者的lncRNA差異表達(dá)以及mRNA的功能富集,探討痰濕體質(zhì)與疾病在分子層面的區(qū)別。方法：1、本實(shí)驗(yàn)共招募平和體質(zhì)組健康狀態(tài)8例、痰濕體質(zhì)組未病狀態(tài)10例以及痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者10例共28名志愿者,空腹采集外周血,分離單個(gè)核胞提取RNA進(jìn)行Agilent Human LncRNA高通量基因芯片檢測(cè),可同時(shí)檢測(cè)lncRNA和mRNA的表達(dá)。2、通過(guò)分析lncRNA和mRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù),并對(duì)三組間數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比較,篩選各組差異表達(dá)的lncRNA和mRNA。3、對(duì)差異表達(dá)mRNA進(jìn)行功能富集分析。結(jié)果：1、本研究發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)與平和體質(zhì)健康組相比共有597個(gè)差異表達(dá)lncRNA和311個(gè)差異表達(dá)mRNA。痰濕體質(zhì)代謝綜合征組與平和體質(zhì)健康組相比,篩選出705個(gè)差mRNA和2045個(gè)差異lncRNA。另外痰濕體質(zhì)代謝綜合征組與痰濕體質(zhì)未病組比較,篩選出275個(gè)差異mRNA和854個(gè)差異lncRNA。2、痰濕體質(zhì)差異表達(dá)lncRNA_蝴差異最顯著者為T(mén)CONS_00015846,下調(diào)最顯著者為NONHSAT009226。差異表達(dá)mRNA上調(diào)差異最顯著者為ZSWM5,下調(diào)最顯著者為IL1B,可為痰濕體質(zhì)分子辨識(shí)提供潛在生物標(biāo)記物。3、通過(guò)對(duì)痰濕體質(zhì)差異表達(dá)mRNA的靶基因進(jìn)行功能分析發(fā)現(xiàn),可富集到多個(gè)涉及糖脂代謝、炎癥反應(yīng)以及免疫應(yīng)答的分子通路。結(jié)論：1、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)在全基因組層面存在系統(tǒng)性的lncRNA表達(dá)譜差異。2、痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)下即存在著lncRNA層面的異常改變,并且差異mRNA可富集到代謝相關(guān)的分子通路,顯示痰濕體質(zhì)具有易發(fā)代謝燃的分子基礎(chǔ)。3、痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者與平和體質(zhì)健康人群相比表現(xiàn)出比痰濕體質(zhì)未病人群更大的差異,并且基因功能分析顯示痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者組比痰濕體質(zhì)未病組相比,除了炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答和糖脂代謝等共同的病理特點(diǎn)以外,更具有較高的罹患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn),顯示了痰濕體質(zhì)是介于健康與代謝性疾病的中間狀態(tài)。4、本研究初步構(gòu)建了痰濕體質(zhì)lncRNA表達(dá)譜,并篩選了差異表達(dá)lncRNA,為后續(xù)的痰濕體質(zhì)微觀辨識(shí)和分子機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R229
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本文編號(hào)：2476208