本文關(guān)鍵詞：代謝組學(xué)研究冠心病中醫(yī)分型的體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

2009 第十一卷

第一期

★Vol.11 No.1

代謝組學(xué)研究冠心病中醫(yī)分型的體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)＊
□王廣基＊＊ 阿基業(yè) 嚴(yán) 蓓 郝海平 劉林生 張 穎 顧勝華 鄭媛婷
（中國藥科大學(xué)藥物代謝動(dòng)力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南京 210009） 南京 210029）

朱萱萱
（江蘇省中醫(yī)院臨床研究所藥理實(shí)驗(yàn)室

摘

要： 目的： 研究冠心病不同中醫(yī)證型的體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)以探索中醫(yī)分型的科學(xué)內(nèi)涵。方法： 采

用基于 GC-TOF/MS 測定技術(shù)的代謝組學(xué)研究手段對痰阻心脈和氣陰兩虛型冠心病患者血漿中小分 子化合物進(jìn)行全面檢測， 利用多變量數(shù)據(jù)分析和方差分析等統(tǒng)計(jì)方法研究血漿內(nèi)源性化合物在各組 間差異。結(jié)果： 代謝組學(xué)分析不但可把痰阻心脈型和氣陰兩虛型冠心病患者區(qū)別分開， 還可以與健康 組明顯區(qū)分。利用 PLS_DA 建立的痰阻心脈和氣陰兩虛組數(shù)學(xué)模型參數(shù)與臨床中醫(yī)癥狀分級量化指 氨基酸代謝 標(biāo)具有顯著的相關(guān)性。兩證型間多個(gè)內(nèi)源性代謝物的含量存在明顯差異并與能量代謝、 和核苷酸代謝異常相關(guān)。結(jié)論： 代謝組學(xué)的整體數(shù)據(jù)和標(biāo)志物信息均顯示出痰阻心脈和氣陰兩虛型 冠心病的差異， 提示代謝組學(xué)所研究的體內(nèi)小分子化合物可能正是中醫(yī)分型的物質(zhì)基礎(chǔ)。 關(guān)鍵詞： 代謝組學(xué) 痰阻心脈 氣陰兩虛 中醫(yī)證型 冠心病

中醫(yī)的辨證施治是長期臨床實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)， 千百年來，中醫(yī)在辨證施治思想的指導(dǎo)下在臨床上 取得了巨大成就，但其理論的科學(xué)性一直缺乏有力 的直接證據(jù)加以證實(shí)。其中最為根本的問題是中醫(yī) 分型理論基礎(chǔ)缺乏人體內(nèi)在科學(xué)證據(jù)加以詮釋。這 也是長期以來困擾中醫(yī)藥學(xué)家的難題。最新出現(xiàn)的 高通量小分子化合物測定分析方法—— —代謝組學(xué)為 中醫(yī)辨證分型的研究提供了一個(gè)嶄新的平臺。

代謝組學(xué)是后基因組時(shí)代興起的一門新的系統(tǒng) 蛋白質(zhì)組學(xué)并稱為三 生物學(xué)技術(shù)方法， 與基因組學(xué)、 大組學(xué)。它在許多學(xué)科領(lǐng)域都取得了喜人的成果， 特 [1~6] 別是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域 ， 它在疾病診斷和模型評價(jià)方 面顯示了極大的優(yōu)勢。代謝組學(xué)定量檢測生物體受 病理生理刺激和遺傳修飾后的生物基質(zhì)中代謝組 （即小分子代謝物群） 的變化 [7]。代謝組學(xué)的研究對象 是生物體整體代謝物，這與中醫(yī)理論的整體觀相一 致。從中醫(yī)角度看來， 一種病表現(xiàn)的 “證” 可能有所差 異， 而不同的病可以表現(xiàn)出相似的 “證” 中醫(yī) ， “證” 必

收稿日期：2008-11-11 修回日期：2009-01-08 ＊

國家自然科學(xué)基金資助 （30630076 ： ） 中藥復(fù)雜藥效物質(zhì)的確證及整體藥代動(dòng)力學(xué)研究新思路與方法， 負(fù)責(zé)人： 王廣基； 國家自然科學(xué)基金資助 (30572228 ： ） 代謝組學(xué)與人參雙向調(diào)節(jié)血壓作用新評價(jià)與機(jī)制探索， 負(fù)責(zé)人： 王廣基； 國家科技支撐計(jì)劃基金資助 （2006BAI08B04-05 ： ） 中藥復(fù) 方作用和配伍評價(jià)研究， 負(fù)責(zé)人： 王廣基。

＊＊

聯(lián)系人：王廣基， 教授， 博士研究生導(dǎo)師， 主要研究方向： 藥物代謝動(dòng)力學(xué)新技術(shù)與新方法的建立及其在創(chuàng)新藥物臨床前藥代動(dòng)力學(xué)評價(jià)中的 E-mail: guangjinong@hotmail.com。 應(yīng)用， 中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與整體藥代動(dòng)力學(xué)研學(xué)， 代謝組學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)整合研究，

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然伴隨著病人體內(nèi)生理、 病理變化， 那么體內(nèi)的小分 子化合物群也應(yīng)該發(fā)生著相應(yīng)的改變，代謝組學(xué)可 以通過對這些由疾病誘導(dǎo)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物的變化進(jìn) 行分析，運(yùn)用化學(xué)計(jì)量學(xué)等多變量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法對 不同證型進(jìn)行分類，挖掘出與某一證型相關(guān)的共性 特征標(biāo)志物 （群） 及相應(yīng)代謝網(wǎng)絡(luò)， 幫助了解 “證” 的 生物學(xué)本質(zhì)。 國內(nèi)已經(jīng)有研究開展了基于液相/質(zhì)譜和核磁共 振測定技術(shù)的中醫(yī)證的動(dòng)物代謝組學(xué)研究 [8~10]。我們 研究組曾經(jīng)對高血壓病人的中醫(yī)分型進(jìn)行了研究 ， 發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué)可以區(qū)分正常和高血壓病人，但各個(gè)
[11]

氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜 （GC/TOF-MS） 監(jiān)測系統(tǒng) （GC： 安捷倫 6890N 氣相色譜儀， 配安捷倫 7683B 自 動(dòng)進(jìn)樣器和 G2614A 型 100 位樣品進(jìn)樣盤； TOF-MS： Pegasus III，Leco 公司， 美國） 氣相毛細(xì)管柱為熔融 ， 的 硅 烷 化 石 英 毛 細(xì) 管 （DB -5 固 定 相 ， 內(nèi) 膜 厚 度 0.18μm， 10m×0.18mm 直徑， J&W Scientific， 美國） 。 2． 實(shí)驗(yàn)對象和篩選標(biāo)準(zhǔn) 健康對照組為南京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院體 檢中心經(jīng)普通體檢及實(shí)驗(yàn)室檢查排除心腦血管、 肝 腎、內(nèi)分泌等疾病的健康志愿者 27 例 （其中男 13 例、 14 例） 且無下述兩種中醫(yī)證型。所有冠心病 女 ， 病例均來源于該院心內(nèi)科住院病人，冠心病診斷標(biāo) 準(zhǔn)參照國際心臟病學(xué)會(huì)和協(xié)會(huì)及世界衛(wèi)生組織臨床 命名標(biāo)準(zhǔn)化聯(lián)合專題組報(bào)告 《缺血性心臟病的命名
[15] 中醫(yī)辨證分型參照 《中藥(新藥)臨床 及診斷標(biāo)準(zhǔn)》 ， [16] 研究指導(dǎo)原則》 ， 并經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診為冠心病， 經(jīng)過肝腎等項(xiàng)目檢查無其它生化和器質(zhì)性疾病。最

中醫(yī)病癥間分型不明確，特別是各組缺乏特征的生 物標(biāo)志物，使得研究結(jié)果不能與體內(nèi)生化代謝過程 取得聯(lián)系， 難以深入說明中醫(yī)證型的內(nèi)在本質(zhì)。但在 近期中醫(yī)證型心肌缺血的大鼠模型中 發(fā)現(xiàn)了一些 病證特異的代謝通路。該研究結(jié)果也在一定程度上 為中醫(yī)證型研究提供了有力支持。本研究以冠心病
[12]

患者為研究對象，研究中選取痰阻心脈和氣陰兩虛 兩種實(shí)證和虛證為代表，運(yùn)用已建立的基于氣相色 譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜 （GC/TOF-MS） 測定技術(shù)的代謝組 學(xué)方法 [13~14] 分析不同中醫(yī)證型冠心病間的血漿代謝 物變化規(guī)律， 研究冠心病中醫(yī)辨證分型的客觀指標(biāo)， 并為認(rèn)識冠心病中醫(yī)證候的本質(zhì)和闡明中醫(yī)分型的 科學(xué)內(nèi)涵提供直接證據(jù)。 一、材料與方法 1． 試劑與儀器 1,2-13C2-肉寇酸 （穩(wěn)定的同位素內(nèi)標(biāo)， SigmaAldrich） 鹽酸甲氧胺 ， （Sigma-Aldrich） 系列烷烴標(biāo)準(zhǔn) ， 溶 液 （C8 -C20 和 C20 -C40，Sigma -Aldrich） 吡 啶 ， （Sigma-Aldrich） MSTFA 含 1% TMCS ， （MSTFA， N-甲 基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺； TMCS，三甲基氯硅 烷；Pierce 化學(xué)公司， 美國） 甲醇 ， （色譜純，Tedia 公 司， 美國） 正庚烷 、 （色譜純，Merck 公司， 德國） 超純 ， 水 （自制， Millipore， 美國） 各鑒定用標(biāo)準(zhǔn)品、 ， EDTANa 等其它試劑 （色譜純或分析純） 。 低溫高速離心機(jī) （Sorvall Biofuge Stratos， 德國） ， 真 空旋轉(zhuǎn)揮干 儀 （Speed-vac， Thermo Savant， 國） 美 ，

終篩選出兩種中醫(yī)證型， 一種是痰阻心脈 （共 29 例， 其中男 17 例、 12 例） 屬實(shí)證， 女 ， 另一種是氣陰兩虛 其中男 9 例、 5 例） 屬虛證。所有參加 女 ， （共 14 例， 實(shí)驗(yàn)的病人和健康志愿者均經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)批 準(zhǔn)并簽署書面同意書。記錄患者舌質(zhì)、 舌苔、 脈象， 根 據(jù)中醫(yī)癥狀的程度， 給胸痛、 胸悶、 氣短、 心悸、 疲倦 乏 力、 畏寒肢冷 、 腰膝酸軟 、 自汗、 不寐等 癥狀打 分 （無、 輕度、 中度、 重度分別為 0、 2、 分） 1、 3 。 3． 樣品采集、 處理與 GC/TOF-MS 測定 采 所有樣品均在冠狀動(dòng)脈造影前 1～3d 內(nèi)采集， 血前一天統(tǒng)一進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)餐，次日晨經(jīng)肘靜脈抽取受 試 者空腹 12h 靜 脈 血 2mL 置 EDTA -Na 抗 凝 管 中 ， 室溫靜置后 3000 rpm 離心 10min，然后取上層血漿 置于-80 °C 冰箱保存。 樣品處理與 GC/TOF-MS 測定參照已經(jīng)建立的 方法 ：100μl 血漿用含內(nèi)標(biāo)的甲醇沉淀， 移取
[12~13， 17~18]

上清減壓揮干， 之后進(jìn)行肟化和三甲基硅烷化處理； 處理好的樣品 1μl 不分流進(jìn)樣， 為使多種化合物能更 好地分析和分離， 采用程序升溫模式。 4． 統(tǒng)計(jì)分析 采集的各個(gè)樣品的譜圖信息，經(jīng)過 Leco TOF128

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MS 自帶 ChromaTOF 2.0 軟件轉(zhuǎn)換為 CSV 文件， 經(jīng)過 自編軟件對譜圖數(shù)據(jù)進(jìn)行解析，解析出的色譜峰的 鑒定由其質(zhì)譜圖和保留指數(shù)與化合物譜圖庫或標(biāo)準(zhǔn) 對照品的質(zhì)譜圖和保留指數(shù)進(jìn)行對照而確定，然后 用 SIMCA-P11 （Umetrics， Ume覽， 瑞典） 軟件進(jìn)行主成 分分析 （PCA） 或數(shù)據(jù)內(nèi)在關(guān)系投影－偏最小二乘－判 [12~14， 17~18] 別分析 （PLS-DA） 。數(shù)據(jù)經(jīng)過統(tǒng)計(jì) One-way ANOVA （多重比較選用 Bonferroni） ，在 0.05 或 0.01 水平有顯著性差異 （Bon－ ferroni 校 正 的 P 值 為 0.016 或 0.003， 分 別 由 0.05/3 或 0.01/3 算得 ， 其 中 3 為多重檢驗(yàn)的次 數(shù)） ，最終確定多組間差 異有顯著性意義的變量， 并鑒定這些可能的生物 標(biāo)志物。 二、結(jié) 果

證， 最終確定可能的生物標(biāo)志物 （見表 1） 。 結(jié)果顯示： 痰阻心脈患者血漿軟脂酸、 脯氨酸、 門 冬氨酸、 油酸、 谷氨酸、 苯丙氨酸和尿酸顯著高于健康 對照組； 而次黃嘌呤和 4-羥基苯甲酸顯著低于健康對 照組。 氣陰兩虛患者血漿琥珀酸、 門冬氨酸， 3-羥基丁 油酸、 軟脂酸、 硬脂酸、 脯氨酸、 谷氨酸、 苯丙氨酸 酸、 顯著高于健康對照組； （門） 而天 冬酰胺， 色氨酸、 次黃 嘌呤和 4-羥基苯甲酸顯著低于健康對照組。

1． 人 血 漿 總 離 子 流 色譜圖 （TIC） 經(jīng)過 GC/TOF-MS 的 分析得到血漿總離子流

1, 丙氨酸; 2, 2-羥基丁酸; 3, 纈氨酸; 4, 磷酸; 5, 甘氨酸; 6, 絲氨酸; 7, 蘇氨酸; 8, 氨基丙二酸; 9, 2,5-二氨基戊內(nèi)酰胺; 10, 焦谷氨酸; 11, 羥脯氨酸; 12, 肌酸酐; 13, 半胱氨酸; 14, 脯氨酸; 15, 谷氨酸; 16, 苯丙氨酸; 17, 鳥氨酸; 18, 檸檬酸; 19, 葡萄糖; 20, 酪氨酸; 21, 1H-吲哚-3-丙酸; 22, 棕櫚酸; 23, 尿酸; 24, 亞油酸, 油酸; 25, 色氨酸; 26, 膽固醇 圖1 人血漿總離子流色譜圖 （TIC）

色譜圖 （TIC） ，每個(gè) TIC 即是每個(gè)人的代謝圖譜 （圖 1） 。由 ChromaTOF 2.0 軟 件解析以及利用 NIST 譜庫和標(biāo)準(zhǔn)樣品發(fā)現(xiàn)其中包 含大量的內(nèi)源性代謝物， 例如氨基酸、 有機(jī)酸、 糖類、 脂肪酸等。 2． 多元數(shù)據(jù)處理結(jié)果 全體受試者血漿的 PLS-DA 分析得到三個(gè)主成 分的模型， 模型的解釋度 （R2Y） 70.0%， 是 預(yù)測度是 （Q2Y） 44.4%， 它可解釋 GC/TOF-MS 響應(yīng)變量 （R2X） 的 29.2%。 PLS-DA 三維得分圖 （圖 2） 顯示健康、 痰阻 心脈和氣陰兩虛三組間能夠明顯的區(qū)分開來，圖中 每個(gè)點(diǎn)表示一個(gè)樣本。從 PLS-DA 載荷圖中尋找出 對 分 型 做 出 貢 獻(xiàn) 的 差 異 變 量 ， 進(jìn) 一 步 用 One -way ANOVA 和 Bonferroni 多重比較的方法處理來驗(yàn)證上 并用標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行確 述結(jié)果， NIST 譜庫中檢索， 在
圖 2. 健康對照、 痰阻心脈、 氣陰兩虛三組血漿代謝組的 PLS-DA 得分圖 （PC1/ PC2/ PC3）

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痰阻心脈和氣陰兩虛組血漿中多種化合物存在 顯著差異， 遺憾的是其中幾個(gè)化合物未能鑒定。痰阻 心脈組色氨酸和天 （門） 冬酰胺顯著高于氣陰兩虛 組； 而琥珀酸、 硬脂酸， 3-羥基丁酸顯著低于氣陰兩 虛組。提示它們是區(qū)分這兩種病證的可能的生物標(biāo) 志物。 3． 主成分得分與中醫(yī)癥狀分級量化得分的相關(guān) 性分析 對冠心病患者血漿進(jìn)行 PLS-DA 分析后， 痰阻心脈和氣 陰 兩 虛 組 在 PLS -DA 二 維 得 分 圖中也可明顯區(qū)分開來， 這兩組 在第一個(gè)和第二個(gè)主成分上都 有一個(gè)得分值， 每位患者的每種 中醫(yī)癥狀都有分級量化得分， 將 每個(gè)主成分上的得分和每種 中 醫(yī)癥狀得分做 Pearson 相關(guān)性分 析。如表 2 所示， 第一個(gè)主成分 （PC1） 的得分值分別與腰膝酸 不寐、 疲倦乏力的得分值有 軟、 顯著的相關(guān)性 （P < 0.01） 第 二 ； 個(gè)主成分 （PC2） 的得分值分別與 腰膝酸軟、 不寐的得分值有顯著 的相關(guān)性 （分別為 P < 0.05 和 P < 0.01） 。 三、討 論
相關(guān)代 謝通路 內(nèi)源性 代謝物 表1

陰兩虛組數(shù)學(xué)模型參數(shù)與臨床中醫(yī)癥狀分級量化指 標(biāo)具有顯著的相關(guān)性，說明代謝組學(xué)所測定的體內(nèi) 小分子化合物信息與臨床各證型表現(xiàn)高度一致， 進(jìn) 一步提示代謝組學(xué)所研究體內(nèi)小分子化合物可能正 是中醫(yī)分型的物質(zhì)基礎(chǔ)。而三組間內(nèi)源性代謝物的 含量存在明顯差異，提示兩種證型冠心病患者的相 關(guān)生物代謝通路發(fā)生了改變，并且不同病證間生化 代謝通路又有所不同。

痰阻心脈和氣陰兩虛型冠心病患者血漿代謝物變化的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果 痰阻心脈 氣陰兩虛 兩證型的比較 氣陰兩虛 顯著性 與健康對 顯著性 與健康對 顯著性 與痰阻心 水平 照的比值 水平 照的比值 水平 脈的比值 +1.05 +1.70 +1.45＊＊ +1.23 +1.05 +1.20＊ +1.71 -1.13 +1.28＊ +1.22 +1.03 -1.25＊ +1.36
＊＊ ＊＊ ＊＊ ＊

三羧酸循環(huán) 琥珀酸 脂代謝 3-羥基丁酸 油酸 軟脂酸 硬脂酸 氨基酸代謝 脯氨酸 谷氨酸 色氨酸 門冬氨酸 苯丙氨酸 天(門)冬酰胺 核苷酸代謝 次黃嘌呤 尿酸 其它

N.S. N.S. 0.010 0.036 N.S. 0.050 0.000 N.S. 0.021 0.005 N.S. 0.043 0.001 0.000

+1.71＊ +3.93 +1.38
＊＊

0.032 0.000 0.002 0.003 0.006 0.004 0.000 0.000 0.020 0.001 0.016 0.001 N.S. 0.000

-1.63☆ -2.32 -1.14 -1.12 -1.20☆ -1.14 -1.08 +1.34 -1.05 -1.09 +1.32☆☆ +1.24 +1.16 +1.54
☆☆ ☆☆

0.049 0.008 N.S. N.S. 0.033 N.S. N.S. 0.000 N.S. N.S. 0.005 N.S. N.S. N.S.

+1.64＊＊
＊＊

+1.26＊＊ +1.36＊＊ +1.86＊＊ -1.52 +1.33
＊＊

+1.35＊
＊＊

-1.28＊ -1.55＊＊ +1.17 -4.20＊＊

4-羥基苯甲酸 -2.73＊＊

痰阻心脈型 冠心病患者 主 要表現(xiàn)為心悶如窒而痛， 或痛引 肩背， 氣短喘促， 體胖多痰， 身體

注： +” “-” “ 和 分別表示與健康對照組相比， 患者血漿中化合物相對濃度有所升高和降 ＊ ＊＊ 分別在 0.05 和 0.01 水平與健康對照組相比， 低， N.S.： 無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異； ， ： 有顯著 ☆ ☆☆ 痰阻心脈和氣陰兩虛患者血漿化合物相對濃度分別在 0.05 和 0.01 性差異； ， ： 水平有顯著差異 （One-way ANOVA 和 Bonferroni 。 ） 表2 主成分得分與中醫(yī)癥狀分級量化得分的相關(guān)性分析 ） 主成分 （PC 得分 PC1 癥狀得分 Pearson 相關(guān)系數(shù) 腰膝酸軟 不寐 -0.659
＊＊

困重， 舌苔濁膩或滑， 脈滑； 氣陰兩虛證患者主要表 現(xiàn)為胸悶隱痛， 時(shí)作時(shí)止， 心悸氣短， 倦怠懶言， 頭昏 乏力， 口干咽干， 心煩失眠， 多夢， 舌紅或有齒痕， 苔 薄， 脈沉細(xì)弱。本研究運(yùn)用基于 GC/TOF-MS 的代謝 組學(xué)技術(shù)分析痰阻心脈型及氣陰兩虛型冠心病患者 和健康人血漿的代謝組，結(jié)果顯示不僅兩個(gè)證型與 健康對照組能夠明顯區(qū)分，而且兩個(gè)證型之間也能 得到很好的分型。 利用 PLS_DA 建立的痰阻心脈和氣

PC2 P值 0.000 0.000 Pearson 相關(guān)系數(shù) -0.331
＊

P值 0.030 0.008

-0.540＊＊
＊＊

-0.399＊＊

疲倦乏力 -0.573 0.000 -0.189 0.225 注： P < 0.05， ＊ ＊＊P < 0.01， 主成分得分與癥狀得分顯著相關(guān) （雙尾 。 ） 130

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能量代謝方面 與健康對照組相比，痰阻心脈患 者血漿脂肪酸，氣陰兩虛患者血漿琥珀酸和脂肪酸 顯著升高，主要是因?yàn)樾募∪毖獣?huì)使交感腎上腺素 能系統(tǒng)的活動(dòng)增強(qiáng)， 血中兒茶酚胺增高，， 導(dǎo)致蛋白脂 酶的活性增加， 內(nèi)生性脂解作用增強(qiáng)， 使游離脂肪酸 增加。但由于脂肪酸的 β-氧化和三羧酸循環(huán)過程中 的各種脫氫反應(yīng)因受氫體缺乏而受阻，三羧酸循環(huán) 中介產(chǎn)物琥珀酸堆積，心肌所攝取的脂肪酸不能氧 化供能。這種心肌脂肪的代謝障礙不僅使 ATP 消耗 增加、 合成減少， 還使得心肌耗氧量增加 [19]。此外， 氣 陰兩虛患者血漿高水平 3-羥基丁酸 （痰阻心脈患者 有升高趨勢， 但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義） 也與能量代謝的異常 相關(guān)， 這可能是由機(jī)體代償保護(hù)作用引起的， 因?yàn)?3羥基丁酸是脂肪酸在肝中氧化分解的中間產(chǎn)物， 是 肝外組織不可缺少的能量來源，它可以改善缺血過 程中的能量代謝并抑制再灌后的脂質(zhì)過氧化，具有 中樞保護(hù)作用 [20~21]。只有氣陰兩虛患者血漿琥珀酸升 高， 氣陰兩虛患者血漿脂肪酸升高程度也更加顯著， 且 3-羥基丁酸顯著高于痰阻心脈患者，說明氣陰兩 虛伴隨更嚴(yán)重的能量代謝異常。能量代謝障礙有可 “心 能導(dǎo)致氣血運(yùn)行不暢， 這與痰阻心脈證表現(xiàn)出的 悶如窒而痛” 身體困重” 、 “ ，以及氣陰兩虛證表現(xiàn)出 的 “胸悶隱痛” 倦怠” 乏力” 、 “ 、 “ 相一致。 氨基酸代謝方面 文獻(xiàn)報(bào)道指出炎癥和免疫激活 是冠心病的重要致病機(jī)制，免疫激活與色氨酸的降 解密切相關(guān)， 因此冠心病人體內(nèi)色氨酸水平會(huì)降低， 這可能是情緒障礙和抑郁的主要病機(jī) [22]。本研究中， 與健康對照組相比，痰阻心脈患者血漿色氨酸水平 稍有下降 （無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義） 而氣陰兩虛患者血漿色 ， 氨酸水平顯著下降且顯著低于痰阻心脈患者，這就 、 “ 、 “ 與氣陰兩虛患者所表現(xiàn)出的“懶言” 頭昏” 心煩 失眠” 等情緒障礙相一致。此外， 谷氨酸代謝異常也 [23] 與中樞疲勞有關(guān) ， 因此， 氣陰兩虛證中的頭昏乏力 感可能也與谷氨酸的代謝異常有一定關(guān)系。脯氨酸 是由谷氨酸合成的，是蛋白膠原的主要成分 （The Human Metabolome Database, html） 而膠原作為動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的主要成分， ， 在 冠心病的穩(wěn)定性/不穩(wěn)定性和發(fā)展過程中有非常重要

的作用，所以兩種證型冠心病患者血漿脯氨酸的升 高提示著其潛在的危險(xiǎn)性 [24]。 核苷酸代謝尿苷和次黃嘌呤是缺血心肌核苷酸 降解的主要產(chǎn)物。次黃嘌呤會(huì)進(jìn)一步代謝成尿酸 [25]。 痰阻心脈和氣陰兩虛患者血漿核苷酸中間產(chǎn)物次黃 嘌呤顯著降低， 而終產(chǎn)物尿酸水平升高 （氣陰兩虛組 只有升高趨勢， 而無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義） 均說明缺血的心 ， 肌核苷酸代謝被激活，從次黃嘌呤到尿酸的轉(zhuǎn)換與 毒性自由基的形成呈正相關(guān) [26]。 高水平的血漿尿酸是 心血管疾病和高血壓疾病的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，它與 與腎功能異常也有密切關(guān)系 [27~29]。此外， 有學(xué)者指出 高血尿酸與肥胖密切相關(guān)， 肥人多痰， 血尿酸增加血 小板的黏附性， 促進(jìn)粥樣斑塊的形成， 都可引起瘀血 內(nèi)生, 所以高血尿酸可能是 “痰瘀” 致病因素的物質(zhì) [30] 基礎(chǔ)之一 。 兩種中醫(yī)證型的共同特點(diǎn)是它們與能量代謝、 氨基酸代謝、核苷酸代謝等多種代謝通路的異常相 關(guān)， 這是機(jī)體多個(gè)系統(tǒng)功能改變共同造成的結(jié)果， 但 是不同病證之間又有不同的代謝特點(diǎn)， 其中琥珀酸、 硬脂酸、 色氨酸、 3-羥基丁酸水平在兩種證型間有顯 著差異，它們的高低與患者表現(xiàn)出的癥狀有良好的 相關(guān)性， 有可能成為這兩種證客觀量化的診斷指標(biāo)。 由此說明利用代謝組學(xué)技術(shù)能夠全面地反映痰阻心 脈和氣陰兩虛證心肌缺血冠心病的代謝共性和各自 特征， 它是中醫(yī)現(xiàn)代化研究的有效手段。 參考文獻(xiàn)
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131 〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica 〕

世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化★專題討論

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2009 第十一卷

第一期

★Vol.11 No.1

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Metabonomic investigation on Traditional Chinese Medicine patterns of coronary artery disease Wang Guangji，A Jiye，Yan Bei，Hao Haiping，Liu Linsheng，Zhang Ying，Gu Shenghua，Zheng Yuanting (Key Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China) Zhu Xuanxuan (Pharmacological Laboratory of Clinical Research Institute, Jiangsu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China) To investigate on the pharmacological materia of Traditional Chinese Medicine (TCM) patterns of coronary

artery disease for revealing the essence of "Bian Zheng (pattern identification)", in the present study GC/TOF-MS based metabonomic method was utilized to profile plasma endogenous metabolites of patients with "Tan Zu Xin Mai Zheng (phlegm obstructing heart and vessels pattern)" and "Qi Yin Liang Xu Zheng (qi and yi vacuity pattern)". Significant metabonomic difference was observed between the two TCM pattern groups, patients and the healthy con－ trol, and the three groups were distinguished clearly by pattern recognition. Very good correlativity was observed be－ tween clinic TCM pattern index values and parameters in PLS_DA model of the two TCM pattern groups. The en－ dogenous compounds differentiating the two TCM patterns were involved in perturbation in energy, amino acid and nucleotide metabolism. In general, the whole model and biomarkers differentiated and characterized the two TCM patterns, suggesting that metabonomic phenotype, i.e., the endogenous compounds, be the pharmacological materia of TCM patterns. （責(zé)任編輯： 張志華 ）
（Continued from Page 152 ）

Progress of Sample Preparation Technique coupled with Analytical Technique in the Research of Natural Products Zhou Ting，Wang Jiayue，Xiao Xiaohua，Li Gongke （School of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275 ） This review summarizes the progress of sample pretreatment method coupled with analytical technique in the research of natural products. Hyphenated techniques include supercritical fluid extraction, high-speed counter-current chromatography, microwave -assisted extraction, subcritical water extraction, solid phase extraction, solid phase microextraction and ultrasound -assisted extraction, which are coupled with analytical technique. 55 references are cited. Keywords: Natural Products; Sample Preparation; Hyphenated Technique; Progress. （責(zé)任編輯： 張志華 ）
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