赤芍和白芍抗炎作用的UPLC
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赤芍和白芍抗炎作用的UPLC_MS代謝組學(xué)初步研究
第36卷第6期2011年3月
Vol.36,Issue6March,2011
體重隨機(jī)分為4組,即模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、赤芍和
白芍給藥組。各給藥組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后灌胃給予實(shí)驗(yàn)供試液,給藥劑量折合成生藥量為15g·kg-1;陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予阿司匹林50mg·kg-1,
-1
給藥容積0.01mL·g,供試液均用雙蒸水配制,模型組灌服同容積生理鹽水,連續(xù)給藥6d。第6d
給藥1h后,分別在每鼠右后足趾皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1mL,分別于致炎前及致炎后30min,1,2,3h分別測(cè)定足趾體積并計(jì)算腫脹度[6]。各組大鼠致炎3h后分別于腹主動(dòng)脈收集血液,至4000r·min-1離心10室溫下靜置2h析出血清,min,取上層淡黃色透明血清-80℃保存。取100μL解凍后血清加入400μL乙腈-甲醇(3∶1)混合溶液沉淀蛋白,4℃下12000r·min-1離MS分析。心15min,移取上清液供UPLC-2.2色譜條件與質(zhì)譜條件色譜條件:WatersHSST3色譜柱(2.1mm×100mm,1.7μm);流動(dòng)相5mmol·L-1乙酸銨水溶液(含0.1%甲酸,A)-乙腈(B),0~1min,98%A;1~3min,98%~梯度洗脫,50%A;3~12min,50%~40%A;12~16min,40%~10%A;16~20min,10%~98%A。流速0.3mL·min
;柱溫45℃;進(jìn)樣量5μL。
質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI),正離子模式;
-1
-1
圖1MS代謝指紋總離子流圖大鼠血清樣品的UPLC-
2.3
±s表示,數(shù)據(jù)處理藥理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x珋采用
統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS12.0的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行組間MS數(shù)據(jù)通過(guò)m/z識(shí)別、MassLynx軟差異比較。LC-件匹配、歸一化等計(jì)算過(guò)程得到矩陣,導(dǎo)入SMCA-P12.0(Umetrics,Umea,瑞典)軟件中進(jìn)行主成分分
DA)。析(PCA)與偏最小二乘判別分析(PLS-
33.1響
結(jié)果
赤芍和白芍對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明大鼠連續(xù)給藥6d后,赤芍和白
鞘氣(N2)流速30L·min;輔助氣(N2)流速10L
·min-1;毛細(xì)管電壓38.00V,毛細(xì)管溫度300℃,毛細(xì)管源內(nèi)電壓5.00kV,掃描范圍m/z100~
1000.00。總離子流圖見(jiàn)圖1
。
表1
組別模型赤芍給藥白芍給藥阿司匹林
劑量/g·kg-1
-15150.2
0.5h23.84±10.3911.70±5.952)
12.71±4.832)11.24±6.242)
芍提取物在0.5~1h對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾腫脹均有較好的抑制作用,與模型組相比有顯著性差異,但組間無(wú)明顯差別;在2~3h僅赤芍提取物對(duì)大鼠角叉菜膠致足趾腫脹有較好的抑制作用,與對(duì)照組相比有顯著性差異,見(jiàn)表1。
腫脹率/%
1h28.26±10.1416.91±7.341)19.32±9.631)13.72±6.612)
2h25.33±13.598.13±8.272)21.51±17.169.05±6.542)
3h17.53±11.006.51±8.031)17.85±15.526.96±5.832)
±s,n=10)赤芍和白芍對(duì)大鼠足趾腫脹的影響(x珋
2)
P<0.01。注:與模型組相比1)P<0.05,
3.2
赤芍和白芍對(duì)角叉菜膠致足趾腫脹大鼠血清MS結(jié)果進(jìn)行PCA和PLS-DA代謝物的影響將LC-分析。模型組與赤芍和白芍給藥組樣本點(diǎn)完全分
離,且各組內(nèi)樣本點(diǎn)聚集較好,說(shuō)明大鼠口服給予赤芍和白芍提取物后機(jī)體生理及物質(zhì)代謝狀況已經(jīng)發(fā)生明顯改變,并根據(jù)其變化可以將各組樣品進(jìn)行區(qū)
分,結(jié)果見(jiàn)圖2。給予白芍提取物3h后代謝物組輪
廓更趨近模型組成分區(qū)間,與藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。使用變量重要性投影(VIP)評(píng)價(jià)潛在的生物標(biāo)
DA計(jì)算VIP值,識(shí)物,利用PLS-取大鼠血清代謝物譜中VIP值大于1的變量為生物標(biāo)示物,共發(fā)現(xiàn)
691個(gè)。通過(guò)HMDB[7]網(wǎng)站檢索,初步鑒定部分可
69
5·
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