本文關(guān)鍵詞：模擬缺血再灌注損傷誘導(dǎo)Hepg2細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)基因與蛋白的表達(dá)及意義

  更多相關(guān)文章： 缺血再灌注 缺氧誘導(dǎo)因子1α 多藥耐藥

【摘要】：目的:我國(guó)肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的發(fā)病率及死亡率僅次于肺癌。我國(guó)HCC多發(fā)現(xiàn)于中晚期。化療是治療進(jìn)展期HCC、晚期HCC主要手段之一。相關(guān)研究表明目前多數(shù)HCC對(duì)化療不敏感,多藥耐藥(Multidrug Resistance,MDR)相關(guān)基因及蛋白的高表達(dá)是主要原因之一。在HCC的規(guī)范化治療中,手術(shù)切除和肝移植為主的綜合治療仍然是主要手段,手術(shù)過(guò)程中常常會(huì)使用肝門(mén)阻斷甚至是全肝血流控制以有效的減少出血,但肝臟恢復(fù)供血后會(huì)出現(xiàn)缺血再灌注損傷(Ischemia Reperfusion Injury,IRI),如果損傷嚴(yán)重反而會(huì)增加手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)甚至導(dǎo)致術(shù)后肝衰竭。有研究表明腫瘤細(xì)胞細(xì)胞長(zhǎng)處于缺氧、低糖的微環(huán)境中其MDR相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)會(huì)增加,導(dǎo)致化療效果差甚至耐藥,而且缺氧會(huì)引起缺氧誘導(dǎo)因子1α(Hypoxia-Inducible Factor 1α,HIF-1α)的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α可以調(diào)控MDR相關(guān)基因表達(dá),沉默或者增強(qiáng)HIF-1α的表達(dá),可以降低或者增強(qiáng)MDR相關(guān)基因的表達(dá),表明HIF-1α是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞MDR的原因之一。因此為了進(jìn)一步深入了解IRI對(duì)Hepg2細(xì)胞MDR的影響,本實(shí)驗(yàn)采用Hepg2細(xì)胞模擬缺血再灌注損傷模型,探索IRI對(duì)Hepg2細(xì)胞MDR相關(guān)基因、蛋白以及HIF-1α的影響,探討HIF-1α與多耐藥基因1(Multidrug Resistance Gene1,MDR1)、多藥耐藥蛋白2(Multidrug Resistance associated Protein 2,MRP2)、肺耐藥蛋白(Lung Resistance Protein,LRP)的關(guān)系。方法:建立體外Hepg2細(xì)胞模擬缺血再灌注損傷模型。細(xì)胞分組情況:空白對(duì)照組,無(wú)缺血、再灌處理;缺血再灌注實(shí)驗(yàn)組,均予以缺血40min處理,分別再灌注0h、6h、12h、24h、48h處理。光鏡下觀察hepg2細(xì)胞干預(yù)后形態(tài)改變。實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)mdr1、mrp2、lrp以及hif-1α基因表達(dá),westblot法檢測(cè)hepg2細(xì)胞p-糖蛋白(p-glycoprotein,p-gp)、mrp2、lrp、hif-1α蛋白的表達(dá)。采用統(tǒng)計(jì)分析軟件spss17.0進(jìn)行對(duì)所有數(shù)據(jù)分析,組間比較單因素方差分析(one-wayanova檢驗(yàn))。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:模擬缺血再灌注損傷后細(xì)胞形態(tài)較正常細(xì)胞形態(tài)不一,死細(xì)胞明顯增多,細(xì)胞間隙增寬。各實(shí)驗(yàn)組分別與空白對(duì)照組比較:從ir-6h組開(kāi)始mdr1表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=116.16,p0.05),最高的ir-48h組為對(duì)照組3倍;從ir-0h組開(kāi)始mrp2基因表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=133.81,p0.05),最高的ir-48h組為對(duì)照組2.5倍;從ir-12h組開(kāi)始lrp基因表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=146.64,p0.05),最高的ir-48h組為對(duì)照組3倍;從ir-24h組開(kāi)始hif-1α基因表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=113.01,p0.05),最高的ir-48h組為對(duì)照組3倍。從ir-0h組開(kāi)始p-gp表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=83.75,p0.05),最高的ir-48h組為對(duì)照組5倍;從ir-0h組開(kāi)始mrp2蛋白表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=52.70,p0.05),最高的ir-48h組為對(duì)照組2倍;從ir-48h組開(kāi)始lrp蛋白表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=2.01,p0.05),最高的ir-48h組為對(duì)照組17倍;從ir-0h組開(kāi)始hif-1α蛋白表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=88.44,p0.05),最高的ir-12h組為對(duì)照組1.9倍。結(jié)論:1.模擬缺血再灌注參與了hepg2細(xì)胞mdr相關(guān)基因mdr1、mrp2、lrp以及其相應(yīng)蛋白p-gp、mrp2、lrp的表達(dá)增加;2.模擬缺血再灌注可以誘導(dǎo)hepg2細(xì)胞hif-1α的基因和蛋白表達(dá)增加;3.模擬缺血再灌注誘驗(yàn)證了HIF-1α對(duì)MDR1表達(dá)的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：缺血再灌注 缺氧誘導(dǎo)因子1α 多藥耐藥
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-15
• 材料與方法15-25
• 結(jié)果25-35
• 討論35-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 英漢縮略詞對(duì)照表50-51
• 致謝51-53
• 肝缺血再灌注損傷機(jī)制及相關(guān)保護(hù)措施的研究進(jìn)展(綜述)53-69
• 參考文獻(xiàn)63-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 王百林,楊海燕,翟淑萍,陳孝平,仲永,張慶業(yè),孟磊;多藥耐藥相關(guān)蛋白基因、肺耐藥蛋白基因在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國(guó)普通外科雜志;2005年02期

2 郭俊超,趙玉沛,廖泉,陳革,張立陽(yáng);胰腺癌耐藥細(xì)胞株SW1990/FU的建立、鑒定及生物學(xué)特性[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2005年05期

3 Clarice Silvia Taemi Origassa;Niels Olsen Saraiva C浜mara;;Cytoprotective role of heme oxygenase-1 and heme degradation derived end products in liver injury[J];World Journal of Hepatology;2013年10期

4 石明;陳繼安;林小軍;陳敏山;郭榮平;李升平;李錦清;;肝動(dòng)脈栓塞化療不同化療方案治療不可切除肝癌的前瞻性隨機(jī)對(duì)照研究[J];中國(guó)腫瘤臨床;2009年01期

，

本文編號(hào)：989493