本文關鍵詞：食管鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展相關基因的功能研究

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【摘要】：食管鱗狀細胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)是我國食管癌的主要病理類型。其易發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移,預后較差,目前食管癌的治療主要為放化療,所以需要研究一種新的治療食管癌治療的方法,提高治療效果。原兒茶酸乙酯(Ethyl-3,4-dihydroxybenzoate, EDHB)主要存在與植物根、葉部位,具有一定的抗氧化作用,能作為α-酮戊二酸的底物類似物抑制膠原的合成。前期研究發(fā)現(xiàn),原兒茶酸乙酯(EHDB)可以誘導食管鱗狀細胞癌細胞凋亡和自噬,食管癌細胞經(jīng)EHDB處理后醛酮還原酶(AKR)亞家族AKR1C基因表達顯著升高。AKR亞家族是藥物和體內(nèi)毒素代謝過程中的關鍵酶,參與稠環(huán)芳香烴的代謝,與腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性相關。目前研究發(fā)現(xiàn)AKR超家族的AKR1C亞家族高度保守,包含AKR1C1-AKR1C4分子量約34-37kDa的4個同工酶。本研究旨在探索AKR1C促進EDHB誘導食管癌細胞死亡的分子機理。首先,篩選了差異表達AKR1C的食管癌細胞系,含高表達AKR1C的食管癌細胞KYSE 180和低表達AKR1C的食管癌細胞KYSE 510。經(jīng)EDHB處理后,食管癌細胞增殖受到抑制,抑制效應具有濃度和時間依賴性,表現(xiàn)為對高表達AKR1C的食管癌細胞EDHB抑制效應更為明顯。由于尚無有效區(qū)分每一種AKR1C家族成員適用的抗體,因此選擇定量蛋白質(zhì)組多反應監(jiān)測(MRM)技術,以抗體非依賴的方式監(jiān)測EDHB處理后AKR1C亞家族各個成員的變化,從而鑒定促進EDHB作用的AKR1C有效亞型。結果顯示,EDHB處理的KYSE 180細胞中AKR1C1/C2表達增加,進一步用siRNA敲降AKR1C1/C2后降了食管癌細胞對EDHB的敏感性。EDHB處理后,AKR1C1/C2促進EDHB代謝；NDRG1表達升高,caspase-3和caspase-9活化細胞發(fā)生內(nèi)源凋亡；同時BNIP3、 Beclin和LC3-Ⅱ表達升高,提示細胞發(fā)生自噬；自噬抑制劑3-MA與EDHB共同處理后,細胞凋亡更明顯。與KYSE 510相比,AKR1C1/C2促進EDHB誘導食管癌細胞凋亡和自噬�？傊�,EDHB處理食管癌細胞后AKR1C1/C2表達升高,AKR1C1/C2通過代謝EDHB,增加食管癌細胞對EDHB的敏感性和食管癌細胞的死亡。所以EDHB可能作為高表達AKR1C1/C2的食管鱗狀細胞癌病人的潛在的藥物。上皮間葉轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是腫瘤獲得遷移能力和耐藥性的重要的生物學特征。富含嘌呤元件結合蛋白α(Purine-rich element binding protein alpha, PURa)能夠直接或間接與DNA結合發(fā)揮調(diào)控細胞DNA損傷修復的功能并與腫瘤相關基因表達有關,同時PURa也可以與RNA結合調(diào)控RNA的轉(zhuǎn)運。前期研究發(fā)現(xiàn)在食管癌中過表達PURa后可以引起食管癌細胞發(fā)生EMT。本文旨在研究PURa促進食管癌細胞發(fā)生EMT的分子機理。首先在不同的食管癌細胞中過表達PURa,檢測到Snail和N-cadherin的表達升高、E-cadherin的表達降低；敲降PURa后,檢測到EMT標志分子Snail和N-cadherin的表達量降低,證明PURa可以促進食管癌細胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變。通過RNA-seq分析穩(wěn)定過表達PURa的食管癌細胞及其對照細胞,結果發(fā)現(xiàn),過表達PURa后,WNT5A、 LEF1和SNAI基因表達顯著升高,P-catenin由胞漿定位轉(zhuǎn)向胞核定位,提示W(wǎng)NT信號通路的活化；另外,SNAI基因下游的靶基因,包括介導細胞間緊密連接和粘附連接的一些分子表達明顯降低,增加了細胞轉(zhuǎn)移的能力�？傊�,PURa通過活化WNT信號通路,引起轉(zhuǎn)錄因子SNAI的表達升高,調(diào)節(jié)下游介導細胞間緊密連接和粘附連接的分子表達下調(diào),促進了食管癌細胞EMT的發(fā)生。所以,腫瘤細胞過表達PURa是導致食管癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要原因,為食管鱗狀細胞癌的治療提供了潛在的治療靶點。
【關鍵詞】：食管鱗狀細胞癌 原兒茶酸乙酯 AKR1C1/C2 MRM PURα 上皮間葉轉(zhuǎn)化
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 縮略語索引表8-10
• 摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 第一部分 AKR1C1/C2促進原兒茶酸乙酯誘導食管癌細胞死亡機理的研究14-54
• 引言16-18
• 材料和方法18-32
• 一、材料18-22
• 二、方法22-32
• 結果32-47
• 1. 食管癌細胞中AKR1C差異表達影響EDHB的敏感性食管癌32-35
• 2. 用MRM蛋白質(zhì)組分析策略鑒定EDHB處理后AKR1C家族變化35-38
• 3. 敲降AKR1C1/C2降低食管癌細胞對EDHB的敏感性38-41
• 4. AKR1C1/C2促進EDHB誘導的食管癌細胞凋亡41-43
• 5. AKR1C1/C2促進EDHB誘導的食管癌細胞自噬43-44
• 6. EDHB與自噬抑制劑聯(lián)合使用促進食管癌細胞增殖抑制44-47
• 討論47-50
• 小結50-51
• 參考文獻51-54
• 第二部分 PURα促進食管癌細胞EMT分子機理研究54-94
• 引言56-58
• 材料和方法58-68
• 一、材料58-60
• 二. 方法60-68
• 結果68-83
• 1. PURα在食管癌細胞中的定位68-69
• 2. PURα過表達誘導多種食管癌細胞發(fā)生EMT改變69-70
• 3. PURα過表達穩(wěn)定食管癌細胞系的構建70-71
• 4. KYSE510-PURα-1穩(wěn)定細胞中檢測EMT改變71-72
• 5. KYSE510-PURα-1穩(wěn)定細胞中檢測細胞生長72-73
• 6. KYSE510-PURα-1穩(wěn)定細胞中檢測細胞的遷移73
• 7. KYSE 510-PURα-1穩(wěn)定細胞中檢測細胞的侵襲73-74
• 8. siRNA敲降PURA基因抑制食管癌細胞EMT74-76
• 9. PURα過表達的食管癌細胞RNA-seq分析76-83
• 討論83-89
• 小結89-90
• 參考文獻90-94
• 文獻綜述94-102
• 參考文獻99-102
• 個人簡歷102-105
• 致謝105-106
• 研究生期間發(fā)表的論文和獲獎證書106-134

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1 曹富民,王小玲,張祥宏,嚴霞,邢凌霄,王俊靈,王鳳榮;食管鱗狀細胞癌熱休克蛋白27、70表達及臨床意義[J];中國腫瘤臨床;2004年08期

2 Katada C;Muto M;Manabe T;郝筱倩;;食管鱗狀細胞癌內(nèi)鏡下黏膜切除術后的局部復發(fā)[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(胃腸病學分冊);2005年08期

3 王少彬;陳俊輝;陳理明;沈忠英;程本坤;;食管鱗狀細胞癌中熱休克蛋白10和60的表達及其意義[J];國際腫瘤學雜志;2006年02期

4 祖世寬，孫喜斌，戴滌新，周夢強，陸建幫，，段文杰，張育萍，王振軍;食管鱗狀細胞癌患者生存及預后因素分析[J];腫瘤;1995年S1期

5 王彥武,陳軍;食管鱗狀細胞癌合并平滑肌瘤1例[J];腫瘤研究與臨床;2000年06期

6 徐衛(wèi)國,張力建,謝玉泉;血管內(nèi)皮生長因子在原發(fā)性食管鱗狀細胞癌中的表達及意義[J];中華醫(yī)學雜志;2001年14期

7 李旭東,任玉波;食管鱗狀細胞癌伴平滑肌瘤一例[J];河南腫瘤學雜志;2001年04期

8 王翠芳,任力,張麗穎;食管鱗狀細胞癌臨床病理與耐藥基因表達的研究[J];診斷病理學雜志;2001年04期

9 趙高峰,僧靖靜,張振龍,衛(wèi)洪超,陳冬,李惠翔,趙胡方,趙志忠;食管鱗狀細胞癌中微血管密度的研究[J];河南腫瘤學雜志;2002年01期

10 張洵,支會英,張健,王秀琴,周傳農(nóng),吳e

本文編號：981447