發(fā)布時(shí)間：2017-10-04 23:35

  本文關(guān)鍵詞：肝癌H22細(xì)胞微粒對(duì)小鼠移植瘤生長的影響

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【摘要】：背景與目的研究表明,腫瘤微環(huán)境中的腫瘤細(xì)胞源性微粒(Tumor-derived microparticles,TMPs)作為一種細(xì)胞間通訊的介質(zhì),參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。本研究通過梯度差速離心的方法分離提取肝癌H22細(xì)胞微粒(H22 cell-derived microparticles,HMPs),建立肝癌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,研究H22細(xì)胞微粒對(duì)肝癌生長的影響。并且用肝素和Dynasore干預(yù)H22細(xì)胞微粒與肝癌H22細(xì)胞的相互作用,進(jìn)一步研究H22細(xì)胞微粒對(duì)肝癌生長的影響。方法1.將經(jīng)BALB/c小鼠腹腔傳代培養(yǎng)的肝癌H22細(xì)胞,采用懸浮細(xì)胞離心甩片處理、HE染色,光鏡下對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察。2.將經(jīng)小鼠腹腔穩(wěn)定培養(yǎng)3代的H22細(xì)胞體外無血清誘導(dǎo)48h,通過梯度差速離心的方法分離提取肝癌H22細(xì)胞微粒,采用透射電鏡對(duì)其形態(tài)進(jìn)行觀察,流式細(xì)胞術(shù)檢測微粒的大小、數(shù)量和其分子表型,以及利用Bradford法對(duì)其進(jìn)行蛋白定量。3.將H22細(xì)胞與不同劑量的微粒共孵育后接種于BALB/c小鼠皮下,觀察不同的劑量對(duì)小鼠皮下移植瘤生長的作用。4.選擇某一有作用的劑量進(jìn)行肝素(Heparin)和Dynasore的干預(yù)處理,進(jìn)一步研究肝癌H22細(xì)胞微粒對(duì)肝癌生長的影響。結(jié)果1.本實(shí)驗(yàn)通過梯度差速離心的方法分離提取了H22細(xì)胞微粒,透射顯微電鏡結(jié)果顯示,分離提取的H22細(xì)胞微粒為直徑1μm、大小不一、閉合的微囊泡。通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其進(jìn)行絕對(duì)計(jì)數(shù)和表面磷脂酰絲氨酸(PS)的檢測,總共分離提取到1×107(約為6.7mg的蛋白當(dāng)量)H22細(xì)胞微粒,足夠用于本研究的在體實(shí)驗(yàn),而且PS陽性的微粒比例為7.36%。2.H22細(xì)胞微粒高劑量組的移植瘤體積較PBS對(duì)照組和H22細(xì)胞微粒低劑量組的均大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其移植瘤瘤重也較PBS對(duì)照組和H22細(xì)胞微粒低劑量組重,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而H22細(xì)胞微粒中劑量組分別與高劑量組和低劑量組比較,其移植瘤的體積和瘤重均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.對(duì)于肝素干預(yù)組,結(jié)果顯示,經(jīng)肝素處理的H22細(xì)胞微粒與H22細(xì)胞共孵育組(Heparin-HMPs-H22組)的小鼠移植瘤的瘤重較未處理組(HMPs-H22組)的輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同樣,其移植瘤的體積也較HMPs-H22組的小,差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4.對(duì)于Dynasore干預(yù)組,結(jié)果顯示,經(jīng)Dynasore干預(yù)H22細(xì)胞微粒與H22細(xì)胞共孵育組(Dy-HMPs-H22組)的移植瘤體積較未處理組(HMPs-H22組)的小,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與HMPs-H22組比較,Dy-HMPs-H22組的移植瘤瘤重也較輕,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論1.高劑量的H22細(xì)胞微�？赡芡ㄟ^促進(jìn)小鼠肝癌移植瘤的生長,從而促進(jìn)腫瘤體積與瘤重的增長;2.H22細(xì)胞微粒對(duì)小鼠肝癌移植瘤生長的促進(jìn)作用可以被肝素和Dynasore抑制。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤源性微粒 H22細(xì)胞微粒 肝癌H22細(xì)胞 肝素 Dynasore
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 英文縮略詞表3-4
• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-22
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法14-21
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 結(jié)果22-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 在學(xué)期間的研究成果39-40
• 致謝40

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