本文關(guān)鍵詞：Notch1底物特異性酶切抑制劑的篩選及其在T-ALL中的作用

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【摘要】：目的:Notch1通路的過度激活在T-ALL發(fā)病中起到關(guān)鍵作用。本研究旨在篩查我院T-ALL患兒的NOTCH1基因突變譜,探索其發(fā)病機(jī)制,闡明NOTCH1基因突變?cè)趦和疶細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)中的特征及臨床意義;制備抑制Notch1酶切的底物特異性抗體,并檢測(cè)其特異性抑制Notch1酶切的效用及其對(duì)T-ALL細(xì)胞的作用,以期開創(chuàng)針對(duì)T-ALL的新型、高特異性低毒副作用的輔助治療手段。方法:隨機(jī)入選2009年1月至2013年12月在上海兒童醫(yī)學(xué)中心血液腫瘤科進(jìn)行治療的78例T-ALL患兒,利用PCR、Sanger測(cè)序法篩查NOTCH1基因異二聚體(HD)區(qū)及脯氨酸-谷氨酸-絲氨酸-蘇氨酸(PEST)區(qū)(涵蓋26、27、28及34號(hào)外顯子)的序列,研究我國T-ALL患兒中NOTCH1基因突變的發(fā)生率、位點(diǎn)、類型及其與預(yù)后的相關(guān)性。通過Western blot方法檢測(cè)T-ALL患兒中的Notch1蛋白活性,并分析其臨床相關(guān)性;針對(duì)Notch1 S2酶切位點(diǎn)制備兔多克隆抗體,并檢測(cè)其對(duì)T-ALL細(xì)胞的作用;利用雜交瘤單抗篩選技術(shù),針對(duì)S2酶切位點(diǎn)篩選小鼠源性單克隆抗體,并檢測(cè)其對(duì)T-ALL細(xì)胞的作用。結(jié)果:78例患兒中有43例發(fā)生NOTCH1突變,總突變率為55.13%(43/78)。30例單獨(dú)發(fā)生于HD區(qū),3例單獨(dú)發(fā)生于PEST區(qū),10例同時(shí)發(fā)生于HD與PEST區(qū)。12例為既往未曾報(bào)道的新突變。所有隨訪患兒的一年短期緩解率為66.67%(46/69),突變組一年短期生存率為85.37%(35/41),無突變組的一年短期生存率為85.71%(24/28),兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.9678)。Western結(jié)果顯示針對(duì)S2酶切位點(diǎn)制備的兔多抗可與Notch1特異性相結(jié)合。流式結(jié)果顯示該多抗可結(jié)合于經(jīng)Notch1配體DLL4預(yù)處理的T-ALL細(xì)胞系并促進(jìn)其凋亡,表明兔多克隆抗體可特異性地、有效地抑制Notch1酶切,從而抑制Notch1通路的活性,阻礙T-ALL細(xì)胞增殖。同樣地,針對(duì)S2酶切位點(diǎn)制備的鼠單克隆抗體Western blot結(jié)果和流式結(jié)果顯示,該單抗具有特異性和有效性。結(jié)論:78例T-ALL患兒的NOTCH1基因突變發(fā)生率高、位點(diǎn)多樣;NOTCH1突變與患兒臨床疾病特征及預(yù)后相關(guān),突變組初診時(shí)疾病嚴(yán)重程度更高,短期總生存率與無突變組類似,盡管突變組短期復(fù)發(fā)率較低,但挽救治療預(yù)后更差。針對(duì)S2酶切位點(diǎn)制備的兔多克隆抗體及鼠單克隆抗體均具有特異性與有效性。
【關(guān)鍵詞】：T細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL) NOTCH1突變 酶切抑制劑 兒童
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 中英文縮略詞對(duì)照表10-12
• 緒論12-18
• 課題研究思路18-20
• 第一部分 T-ALL患者的NOTCH1突變的基因圖譜的建立及其突變特征與預(yù)后的關(guān)系20-37
• 1.1 主要試劑20-21
• 1.2 主要儀器21
• 1.3 試驗(yàn)方法21-28
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28
• 1.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析28-33
• 1.6 討論33-37
• 第二部分 針對(duì)Notch1 S2酶切位點(diǎn)序列為抗原制備兔多克隆抗體及鼠單克隆抗體并檢測(cè)其特異性和有效性37-59
• 2.1 實(shí)驗(yàn)耗材37
• 2.2 試劑37-38
• 2.3 儀器38-39
• 2.4 主要溶液配制39-40
• 2.5 試驗(yàn)方法40-46
• 2.6 結(jié)果-兔多克隆抗體46-50
• 2.7 結(jié)果-鼠單克隆抗體50-56
• 2.8 討論56-59
• 總結(jié)59-61
• 總論與展望61-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 致謝68-70
• 攻讀碩士期間所發(fā)表或錄用的論文70

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本文編號(hào)：971305