本文關鍵詞：人天冬氨酸-β-羥化酶基因修飾樹突狀細胞介導CTLs對肝癌細胞SMMC-7721的殺傷作用

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【摘要】：目的:探索含人天冬氨酸-β-羥化酶(aspartate-β-hydroxylase,ASPH)基因的重組腺病毒轉導未成熟樹突狀細胞(immature dendritic cells,imDCs)誘導細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)對肝癌細胞系SMMC-7721的體外殺傷效應。方法:C57BL/6小鼠骨髓分離培養(yǎng)DCs,重組腺病毒(Ad-ASPH-IRES2-EGFP)感染未成熟DCs制備DCs疫苗,分為三組:Ad-ASPH-IRES2-EGFP感染未成熟DCs組(DCs-ASPH組)、Ad-IRES2-EGFP感染未成熟DCs組(DCs-GFP組)和未成熟DCs組(imDCs組),各組DCs中ASPH蛋白的表達采用Western blot檢測、ASPH mRNA的表達采用real-time PCR檢測,流式細胞術檢測成熟DCs表型變化。分離同一來源的小鼠脾T淋巴細胞,流式細胞儀測定其表面特異性分子表達量,DCs疫苗誘導產生CTLs后與SMMC-7721細胞混合培養(yǎng),采用CCK-8法、流式細胞術檢測CTLs對SMMC-7721細胞的殺傷作用,ELISA檢測CTLs上清液中IFN-γ含量。結果:成功培養(yǎng)出DCs并制備DCs疫苗,ASPH蛋白和ASPH mRNA在DCs-ASPH組中高表達,DCs-ASPH組DCs細胞表面標志物CD80、MHCⅡ和CD11c顯著高于DCs-GFP組和imDCs組�？俆淋巴細胞純度CD3為79.240%,CD4為43.230%,CD8為28.930%,DCs-ASPH誘導的CTLs組SMMC-7721細胞的增殖能力顯著低于其它組、凋亡率高于其它組,DCs-ASPH誘導的CTLs上清液中IFN-γ含量高于其它組,差異具有統(tǒng)計學意義(P?0.05)。結論:Ad-ASPH-IRES2-EGFP修飾DCs疫苗體外誘導產生的CTLs對SMMC-7721細胞具有顯著的殺傷作用。
【關鍵詞】：天冬氨酸-β-羥化酶 樹突狀細胞 SMMC-7721細胞 共培養(yǎng)
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-13
• 參考文獻11-13
• 第一部分 Ad-ASPH-IRES2-EGFP致敏DCs疫苗的制備及鑒定13-26
• 1 材料及方法13-19
• 2 結果19-23
• 3 討論23-25
• 參考文獻25-26
• 第二部分 DCs疫苗誘導產生CTLs體外殺傷SMMC-7721 細胞26-39
• 1 材料與方法26-31
• 2 結果31-35
• 3 討論35-38
• 參考文獻38-39
• 全文總結39-40
• 文獻綜述40-49
• 參考文獻46-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文50

【參考文獻】

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1 Yu-Peng Hong;Zi-Duo Li;Pankaj Prasoon;Qi Zhang;;Immunotherapy for hepatocellular carcinoma: From basic research to clinical use[J];World Journal of Hepatology;2015年07期

2 ;Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with tumor lysates induce anti-tumor immunity against gastric cancer ex vivo[J];World Journal of Gastroenterology;2008年46期

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本文編號：950834