本文關(guān)鍵詞：多基因甲基化水平調(diào)控的乳腺癌MCF-7對他莫昔芬敏感性探究

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【摘要】：目的尋找ER/PR(+)乳腺癌MCF-7耐他莫昔芬(TAM)細胞株相關(guān)的抑癌基因Cp G島啟動子甲基化異常狀態(tài),篩選出能夠預測MCF-7對他莫昔芬敏感性相關(guān)的關(guān)鍵基因,為抑癌基因啟動子區(qū)域異常甲基化作為預測臨床內(nèi)分泌治療敏感性方法提供理論依據(jù)。方法1.用噻唑藍比色法(MTT)法對比檢測MCF-7/TAM耐藥倍數(shù)及乳腺癌MCF-7細胞株與耐藥株MCF-7/TAM生長增殖差異。2.流式細胞術(shù)(FCM)對比兩細胞株生長周期及凋亡率之間差異。3.RT-PCR和real-time PCR檢測親本與耐藥細胞株MCF-7/TAM相關(guān)基因(DAPK、RASSF1A、MGMT、P53、DNMT1、DNM3B、DNMT3A)的m RNA表達差異。4.MS-PCR檢驗候選基因(DAPK、MGMT、P53、RASSF1A)在MCF-7及MCF-7/TAM中的啟動子甲基化水平。結(jié)果1.MTT顯示:48h MCF/TAM的IC50值為(17.92±0.03)μmol/L,耐藥倍數(shù)為2.63(t=51.20,P0.05)MCF/TAM細胞株增殖水平較高(t=4.472,P0.001)。2.流式分析:MCF-7較MCF-7/TAM細胞株Gl期的部分阻滯,生長抑制,凋亡率較高。3.real-time PCR顯示:MCF-7/TAM細胞株中基因DAPK(Z=-2.087,P0.05)、RASSF1A(Z=-4.123,P0.001)m RNA表達水平低于親本MCF-7細胞株;而基因P53(Z=10.378,P0.001)、MGMT(Z=42.378,P0.001)、DNMT1(Z=19.378,P0.001)、DNM3B(Z=9.378,P0.001)的mRNA表達水平高于MCF-7細胞株;基因DNMT3A的mRNA表達水平過低,在耐藥株與親本細胞株中均未能檢出。4..MSP顯示,在MCF-7/TAM細胞株中,基因DAPK、P53、RASSF1A啟動子為甲基化狀態(tài);而親本細胞株中基因DAPK、P53、RASSF1A啟動子為非甲基化狀態(tài);MCF-7/TAM細胞株中MGMT去甲基化水平增高,結(jié)合real-time PCR各基因m RNA表達水平檢測,可見,各基因表達水平與其啟動子甲基化狀態(tài)呈負相關(guān)性,基因P53表達水平與甲基化狀態(tài)不一致,可能還受其他因素調(diào)控。結(jié)論1.乳腺癌MCF-7/TAM細胞株存在多種基因啟動子甲基化現(xiàn)象。2.在乳腺癌MCF-7/TAM細胞株中,基因MGMT去甲基化水平降低,表達水平顯著升高,可作為預測內(nèi)分泌治療耐受性的敏感基因。3.在乳腺癌MCF-7/TAM細胞株中,基因DNMT1、DNMT3B表達量明顯升高,將為運用表觀遺傳學逆轉(zhuǎn)藥物耐受性研究提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：MCF-7 DNA甲基化 內(nèi)分泌耐藥 抑癌基因
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 1 前言10-13
• 2 實驗材料與方法13-34
• 第一部分 MCF-7 和 MCF-7/TAM 細胞株的培養(yǎng)13-17
• 第二部分 MCF-7 和 MCF-7/TAM 細胞株生長增殖、凋亡檢測17-21
• 第三部分 MCF-7 和 MCF-7/TAM 細胞株抑癌基因表達差異檢測21-27
• 第四部分 MSP 法檢測兩細胞株相關(guān)基因的甲基化狀態(tài)27-33
• 統(tǒng)計處理33-34
• 3 結(jié)果34-41
• 4 討論41-44
• 5 結(jié)論44-45
• 6 展望45-46
• 參考文獻46-49
• 附錄49-51
• 致謝51-52
• 綜述52-59
• 參考文獻56-59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張燕青;王連生;;基因多態(tài)對他莫昔芬療效影響研究進展[J];中國藥理學與毒理學雜志;2012年03期

2 蔡樝;孫晉楓;黃朝暉;余堅;何英華;戴信蘭;周小羽;徐慧莉;顧峻;張紅宇;胡夕春;朱景德;;ABCC8、CHFR、BMP3B、LOX、PRSS21和RASSF1A基因啟動子的甲基化狀態(tài)可能與3種乳腺癌細胞株對5-FU的敏感性相關(guān)[J];腫瘤;2009年01期

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本文編號：947932