本文關(guān)鍵詞：鈣蛋白酶Capn1促進肝內(nèi)膽管細胞癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的實驗研究

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【摘要】：肝內(nèi)膽管細胞癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma, ICC)是一種具有膽管上皮特性的的肝內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤,肝內(nèi)膽管細胞癌作為發(fā)病率第二的原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer, PLC),約占10-15%,僅次于肝細胞性肝癌。近二十年來肝內(nèi)膽管細胞癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)有明顯升高,特別是東南亞地區(qū)。目前手術(shù)切除仍是肝內(nèi)膽管細胞癌首選且最有效的治療方法,但是,即使能夠手術(shù)切除腫瘤的患者,由于術(shù)后早期復(fù)發(fā)、腫瘤生長迅速及遠處轉(zhuǎn)移等原因,預(yù)后也很差,患者3年和5年生存率只有30%和18%。因此,探悉肝內(nèi)膽管細胞癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移過程中的分子機制,篩查新的關(guān)鍵分子,對提高肝內(nèi)膽管細胞癌患者的預(yù)后判斷準確性及開發(fā)新的治療靶點有著重要的臨床現(xiàn)實意義。鈣蛋白酶(Capn)是一類有著相似催化結(jié)構(gòu)域的性質(zhì)保守的半胱氨酸蛋白酶,催化眾多特殊的基質(zhì)調(diào)控蛋白水解。鈣蛋白酶參與體內(nèi)一系列細胞基本生理過程,包括細胞骨架重建,胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo),細胞的增殖及凋亡等。已知鈣蛋白酶系統(tǒng)在超過12種哺乳動物體內(nèi)存在。相關(guān)研究證實鈣蛋白酶在乳腺癌,子宮內(nèi)膜癌和胰腺癌等一系列腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程起著重要的調(diào)控作用。鈣蛋白酶家族包含十余種亞基,Capn1和Capn2的組織表達最為廣泛,因而最受關(guān)注。Capn1和Capn2根據(jù)體外激活所需的鈣離子濃度命名,和調(diào)節(jié)亞基Capn4 (28kDa)結(jié)合成異構(gòu)二聚體形式發(fā)揮其生理功能,其中Capn1只需要微摩爾級的鈣離子濃度就可以被激活而發(fā)揮作用。近期研究表明,鈣蛋白酶表達與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān),研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)鞘瘤、腦膜瘤和腎細胞癌腫瘤組織中Capn1表達均明顯升高,同時,在子宮內(nèi)膜癌組織中檢測到鈣蛋白酶抑制蛋白表達降低。到目前為止,Capn1在肝內(nèi)膽管細胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達改變及其作用未見報道。本研究通過檢測140肝內(nèi)膽管細胞癌患者癌組織和對應(yīng)正常肝臟組織中Capn1、E-cadherin及Snail的表達,并且利用組織芯片技術(shù)分析驗證了Cap n1表達異常與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后間的相關(guān)性,探討Capn1是否為肝內(nèi)膽管癌患者的預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。通過SiRNA干擾技術(shù)下調(diào)肝內(nèi)膽管腫瘤細胞系中Capn1的表達,觀察肝內(nèi)膽管癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移潛能的改變,闡明其對肝內(nèi)膽管癌細胞的生物學(xué)特性的影響,進而,通過研究Capn1對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-cadherin和Snai1表達的影響,對Capn1調(diào)控肝內(nèi)膽管癌的侵襲轉(zhuǎn)移機制進行了初步的探討。第一部分Capn1及EMT指標(biāo)在肝內(nèi)膽管細胞癌中的表達及其相關(guān)性的研究目的：研究Capn1及E-cadherin、Snail在肝內(nèi)膽管細胞癌組織和對應(yīng)的癌旁肝臟組織中的表達情況,探討Capn1與EMT標(biāo)志物細胞黏附分子上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)和間質(zhì)相關(guān)蛋白S nail在肝內(nèi)膽管細胞癌中的表達及其相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組化方法檢測140例肝內(nèi)膽管細胞癌患者病理組織中Capn1、Snail和E-cadhrein的表達：應(yīng)用western blot方法檢測四組肝內(nèi)膽管細胞癌組織Capn1的表達：應(yīng)用SPSS16.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：western bolt及免疫組化學(xué)結(jié)果均顯示在肝內(nèi)膽管細胞癌組織中,Capn1表達高于癌旁組織,兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)；早期復(fù)發(fā)病人Capn1表達較未復(fù)發(fā)組患者明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);免疫組化結(jié)果顯示Snai1在癌組織中的表達明顯高于癌旁組織,而E-cadheri n在癌組織中的表達低于癌旁組織。結(jié)論：Capn1、Snail在肝內(nèi)膽管細胞癌組織中表達上調(diào),而E-cadherin在肝內(nèi)膽管細胞腫瘤中表達下調(diào)；Capn1與Snail、E-cadherin之間具有顯著相關(guān)性(p0.05)；早期復(fù)發(fā)患者腫瘤組織中Capn1表達升高。第二部分Capn1與肝內(nèi)膽管細胞癌臨床病理特征的關(guān)系及其與EMT診斷預(yù)后的價值目的：通過免疫組化方法檢測Capn1、E-cadherin及Snail在肝內(nèi)膽管細胞癌組織中的表達,探討Capnl與肝內(nèi)膽管細胞癌臨床病理特征的關(guān)系及其與E-cadherin Snail的預(yù)后意義。方法：應(yīng)用免疫組化方法檢測140例肝內(nèi)膽管細胞癌病理組織中Capn1、E-cadherin及Snail的表達,探索Capn1與臨床病理特征的關(guān)系及其與E-cadherin、Snail預(yù)后診斷價值。結(jié)果：Capn1高表達與肝內(nèi)膽管細胞癌患者的血清CA19-9表達及腫瘤數(shù)目相關(guān)(p0.05)。Capn1、Snail高表達組術(shù)后總體生存率明顯低于Capnl低表達組(p0.05),累計復(fù)發(fā)率明顯高于Capn1低表達組(p0.05)；E-cadherin高表達組術(shù)后總體生存率高于Capnl低表達組而復(fù)發(fā)率低于Capn1低表達組。單因素及多因素分析顯示Capn1、E-cadherin及Snail 表達是患者總體生存率和累計復(fù)發(fā)率的獨立預(yù)后因子。結(jié)論：Capn1在肝內(nèi)膽管細胞癌組織及早期復(fù)發(fā)患者的腫瘤組織表達中升高,與肝內(nèi)膽管細胞癌的CA19-91表達及腫瘤TNM分期相關(guān)(p0.05)。腫瘤組織Capnl、Snail高表達及E-cadherin低表達患者其總體生存率更低,且術(shù)后早期復(fù)發(fā)幾率更高。Capn1、E-cadherin及Snail在腫瘤組織中的表達差異具有預(yù)后診斷價值。第三部分Capn1表達對肝內(nèi)膽管細胞癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移潛能的影響及其分子機制目的：探討Capn1表達改變與肝內(nèi)膽管癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移潛能的關(guān)系,并探索Capnl調(diào)控肝內(nèi)膽管癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機制。方法：應(yīng)用RNA干擾下調(diào)Capn1在肝內(nèi)膽管細胞癌細胞株中的表達,并且驗證干擾效率。應(yīng)用劃痕試驗檢測細胞遷移能力變化,transwell試驗檢測細胞侵襲能力變化,MTT試驗檢測細胞增殖能力的變化。利用western blot技術(shù)進一步探究Capn1表達調(diào)控肝內(nèi)膽管癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)鍵分子改變。結(jié)果：RNA干擾下調(diào)肝內(nèi)膽管癌細胞株QBC939口RBE中Capn1表達,發(fā)現(xiàn)干擾組細胞遷移與侵襲能力、增殖能力較對照組明顯減弱(p0.05),Capn1的表達改變與間質(zhì)相關(guān)蛋白Snai1呈正相關(guān)而與上皮相關(guān)蛋白E-cadherin呈負相關(guān)。結(jié)論：Capn1高表達與肝內(nèi)膽管癌細胞的侵襲遷移、增殖能力正相關(guān),并且Capn1的表達改變及Snai1表達呈正相關(guān),與E-cadherin表達呈負相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：鈣蛋白酶 Capn1 肝內(nèi)膽管細胞癌 預(yù)后 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.8
【目錄】：

• 中文摘要2-5
• 英文摘要5-9
• 英文縮略語9-10
• 前言10-11
• 第一部分 Capn1及EMT指標(biāo)在肝內(nèi)膽管細胞癌中的表達及其相關(guān)性的研究11-24
• 材料方法11-17
• 結(jié)果17-20
• 討論20-22
• 參考文獻22-24
• 第二部分 Capn1與肝內(nèi)膽管細胞癌臨床病理特征的關(guān)系及其與EMT診斷預(yù)后的價值24-33
• 材料方法24-26
• 結(jié)果26-30
• 討論30-31
• 參考文獻31-33
• 第三部分 Capn1表達改變對肝內(nèi)膽管細胞癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移潛能的影響及其分子機制33-44
• 材料方法33-39
• 結(jié)果39-42
• 討論42-43
• 參考文獻43-44
• 文獻綜述44-52
• 參考文獻47-52
• 致謝52-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄53-54

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