本文關(guān)鍵詞：SM-164聯(lián)合多柔比星（ADM）對人骨肉瘤U-2細胞增殖及凋亡的影響

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【摘要】：背景及目的:Smac作為一種新型線粒體蛋白質(zhì),自從2000年7月由Du等[16]首次報道以來作為一種新型抗癌藥物得以被廣泛研究,SM-164作為Smac蛋白的一種亞型,其抗癌效果更為顯著,同時,有多篇報導顯示,在體內(nèi)外試驗中,SM-164對人類多種類型腫瘤細胞有明確的抗腫瘤活性,包括前列腺癌,結(jié)腸癌,乳腺癌,卵巢癌以及惡性黑色素瘤等[21,25]。本文旨在探究SM-164單藥以及聯(lián)合鹽酸鹽多柔比星(ADM)對骨肉瘤U-2-OS的增值抑制和凋亡的作用,為進一步探討其作用機制和可能的信號轉(zhuǎn)導途徑,以及SM-164作為一種新型化療生物制劑用于人骨肉瘤(OS)治療的可能性。方法:(1)MTT法檢測SM-164單藥及聯(lián)合鹽酸多柔比星(ADM)對U-2-OS細胞的增殖抑制作用。1)檢測不同濃度梯度的SM-164分別單獨處理U-2-OS細胞24小時后,U-2-OS的增殖抑制作用,并繪制生長曲線;2)根據(jù)前期濃度梯度實驗,SM-164作用濃度分別設(shè)定為100nM、200nM,而ADM的作用濃度則分別設(shè)定為臨床用藥濃度0.5μg/mL和臨床半量濃度0.25μg/mL,分九組:單藥SM164-100nM組、SM164-200nM組、單藥ADM0.25μg/mL組、ADM0.5μg/mL組、聯(lián)合用藥(SM164-100nM+ADM0.25μg/mL)組、聯(lián)合用藥(SM164-100nM+ADM0.5μg/mL)組、聯(lián)合用藥(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)組以及聯(lián)合用藥(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)組和對照組。(2)Hoechst染色檢測U-2細胞凋亡。分別設(shè)置對照組、實驗組1(ADM0.25/0.5μg/ml)、實驗組2(ADM0.25/0.5μg/ml+SM164-100 nM)。(3)流式細胞儀檢測ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)聯(lián)合SM-164(100nM)誘導U-2細胞凋亡。結(jié)果:(1)MTT實驗顯示:1)當不同濃度梯度(1nM、10nM、50nmol/L、100nM、200 nM、500nM、1μmol/L)的SM-164分別單獨處理U-2-OS細胞24小時后,U-2-OS的增殖受到抑制,并隨著SM-164劑量的增加抑制程度逐漸增強,但抑制效果并不顯著,對U-2細胞存活率沒有顯著的改變(詳見表1,圖1);2)SM-164(100nM/200nM)聯(lián)合ADM(0.25/0.5μg/mL)比單獨使用相同濃度的ADM對U-2-OS抑制率均明顯加強,兩者均表現(xiàn)明顯協(xié)同效應(yīng)(詳見表2,圖2)。(2)Hoechst染色顯示:對照組(不加藥),其視野內(nèi)U-2細胞與加藥組相比數(shù)量雖然較多,但只有很微弱的藍色熒光;ADM(0.25/0.5μg/mL)組視野內(nèi)細胞數(shù)量有所減少,可見少量藍色熒光;ADM(0.25/0.5μg/mL)+SM-164(100nM)組視野內(nèi)U-2細胞致密濃染,清晰可見大量且較強藍色熒光,提示該組藥物促U-2-OS凋亡效果顯著。(3)流式細胞儀檢測顯示:單獨用ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)處理U-2細胞24小時,其凋亡率為(8.53±2.41)%、(12.2±3.11)%;SM-164-100nM處理U-2細胞24小時后,其凋亡率為(6.03±2.01)%;將SM-164-100nM聯(lián)合鹽酸多柔比星ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)處理U-2 OS 24小時,其凋亡率分別為(36.4±3.68)%、(50.2±5.19)%,SM-164可促進U-2細胞凋亡。結(jié)論:1)SM-164單藥對U-2-OS增殖抑制作用有限,但是SM-164聯(lián)合ADM對U-2-OS有明顯的增殖抵抗作用,且協(xié)同效應(yīng)十分顯著;2)SM-164能明顯加強鹽酸多柔比星(ADM)誘導U-2-OS的凋亡,在誘導凋亡方面二者協(xié)同作用同樣顯著。
【關(guān)鍵詞】：U-2細胞 SM-164 鹽酸多柔比星(ADM) 增殖抑制 細胞凋亡 IAPS
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R738.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-13
• 第2章 材料和方法13-20
• 2.1 實驗材料13-14
• 2.1.1 細胞來源13
• 2.1.2 主要試劑與材料13
• 2.1.3 主要儀器與設(shè)備13-14
• 2.1.4 常用試劑的配置14
• 2.2 實驗方法14-20
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)及傳代14-16
• 2.2.2 細胞凍存16-17
• 2.2.3 凍存細胞的復蘇17
• 2.2.4 MTT法檢測SM-164單藥及聯(lián)合鹽酸多柔比星（ADM）對U2OS的增殖抑制影響17-18
• 2.2.5 Hoechst熒光染色試劑盒觀察U2OS凋亡18
• 2.2.6 流式細胞儀(FCM)檢測ADM（0.25μg/m L、0.5μg/m L）聯(lián)合SM-164（100n M）誘導U-2 細胞凋亡18-19
• 2.2.7 統(tǒng)計學方法19-20
• 第3章 實驗結(jié)果20-27
• 3.1 不同濃度SM-164單藥作用下U2OS生長曲線20-21
• 3.2 SM-164聯(lián)合ADM對U2OS增殖的抑制實驗結(jié)果21-22
• 3.3 hoechst試劑盒染色U-2 細胞凋亡檢測結(jié)果22-24
• 3.4 流式細胞儀測ADM（0.25μg/m L、0.5μg/m L）聯(lián)合SM-164（100n M）誘導U-2 細胞凋亡結(jié)果24-27
• 第4章 討論27-30
• 4.1 SM-164聯(lián)合鹽酸多柔比星(ADM)對U-2 細胞增殖的影響27-28
• 4.2 SM-164聯(lián)合鹽酸多柔比星(ADM)對U-2 細胞凋亡的影響28
• 4.3 SM-164誘導U-2 細胞凋亡的相關(guān)作用機制28-29
• 4.4 本實驗的不足之處29-30
• 第5章 結(jié)論與展望30-31
• 5.1 結(jié)論30
• 5.2 進一步工作方向30-31
• 致謝31-32
• 參考文獻32-34
• 綜述34-42
• 參考文獻40-42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉國雄;婁楠;王洋;吳元成;黃嵐峰;;長春新堿對人成骨肉瘤MG63細胞的增殖抑制和凋亡促進作用及其機制[J];中國實驗診斷學;2013年09期

2 龍海濤;李康華;朱勇;肖文峰;祝偉宏;;非甾體類抗炎藥對骨肉瘤細胞株增殖和凋亡的影響[J];中國骨與關(guān)節(jié)雜志;2012年02期

3 牟鈺欽;周龍洋;楊秋s，

本文編號：932369