本文關(guān)鍵詞：常山酮聯(lián)合放射治療對(duì)小鼠移植瘤免疫微環(huán)境影響及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:探討常山酮聯(lián)合放射治療對(duì)小鼠移植瘤免疫微環(huán)境影響,并探索其可能的機(jī)制。方法:將40只健康雌性C57BL/6J小鼠右后肢皮下接種Lewis細(xì)胞,建立Lewis肺癌移植瘤模型,接種后第6天(腫瘤長(zhǎng)徑達(dá)0.5厘米大小時(shí))進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。挑選35只腫瘤負(fù)荷較相近小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、常山酮組、放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組,放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組,每組7只。對(duì)照組不做處理;常山酮組于接種后第6天至第15天予常山酮腹腔給藥,每只鼠2ug/0.1ml/d;放射治療組于接種后第8天、9天給予移植瘤6MV-X線照射,放射治療劑量為10Gy×2;放射治療聯(lián)合常山酮組給藥處理同常山酮組,放射治療的時(shí)間及劑量同放射治療組;放射治療聯(lián)合抑制劑組于接種后第6天至第15天予TGF-β抑制劑(SB431542終濃度1u M)腹腔給藥,每只小鼠0.1ml/d,放射治療處理同放射治療組。自治療開始每隔l天用游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤徑。接種后第15天(照射結(jié)束后第6天)各組隨機(jī)處死3只小鼠,取脾臟制備單細(xì)胞懸液后行FACS檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞中CD4+CD25+Fox P3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Treg細(xì)胞含量;剝離小鼠腫瘤組織,一部分制備單細(xì)胞懸液行FACS檢測(cè)腫瘤組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中Treg細(xì)胞含量,剩余部分福爾馬林固定及凍存并通過免疫組織化學(xué)、Elisa、Western Blot等技術(shù)研究不同處理組移植瘤TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路的變化;剩余小鼠觀察移植瘤生長(zhǎng)抑制情況,并計(jì)算生存期。結(jié)果:流式結(jié)果顯示:空白對(duì)照組、常山酮組腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中Treg含量無明顯差異(P=0.989),放射治療組腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中Treg含量較對(duì)照組明顯升高(P0.001),聯(lián)合應(yīng)用常山酮或TGF-β抑制劑組腫瘤組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中Treg含量較放射治療組明顯下降(P值均0.05)。空白對(duì)照組、常山酮組脾臟Treg含量無明顯差異(P=0.742),單純放射治療組脾臟Treg含量較空白對(duì)照組明顯升高(P=0.021),放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組脾臟Treg含量較放射治療組明顯下降(P值均0.05);Elisa結(jié)果:空白對(duì)照組和常山酮組腫瘤組織中TGF-β水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.271),放射治療組TGF-β水平較對(duì)照組明顯升高(P=0.001),而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β水平較單純放射治療組均明顯降低(P值均0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果:空白對(duì)照組和常山酮組腫瘤組織中TGF-β1低表達(dá),放射治療組TGF-β1呈陽(yáng)性表達(dá),放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β1低表達(dá)。Western Blot結(jié)果顯示,各處理組Smad2蛋白表達(dá)無明顯差異,空白對(duì)照組與常山酮組p-Smad 2蛋白表達(dá)水平無明顯差異,放射治療組p-Smad 2蛋白表達(dá)較對(duì)照組升高,放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組p-Smad 2的表達(dá)較單純放射治療組降低;各組Smad 6蛋白表達(dá)水平亦有差異,常山酮組和空白對(duì)照組Smad 6蛋白表達(dá)無明顯差異,放射治療組Smad 6蛋白表達(dá)較對(duì)照組下降,而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組Smad 6的表達(dá)較單純放射治療組均升高。治療前各組小鼠腫瘤體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.377),治療后各時(shí)間點(diǎn)空白對(duì)照組及常山酮組小鼠腫瘤體積均無明顯差異(P值均0.05),放射治療結(jié)束后第5天,放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組移植瘤體積開始小于對(duì)照組(P值分別為0.008、0.023、0.007),放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均0.5),放射治療結(jié)束后第9天,放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積開始小于放射治療組(P值分別為0.049、0.025),治療后各時(shí)間點(diǎn)放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積均無明顯差異(P值均0.05)�？瞻讓�(duì)照組及常山酮組小鼠生存期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.784),OS分別為28天和34天,放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組生存期均顯著長(zhǎng)于空白對(duì)照組(P值均0.05),OS分別為41天、53天、54天;放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組小鼠生存期未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.837),但均明顯長(zhǎng)于放射治療組(P值均0.05)。結(jié)論:常山酮可以改善電離輻射所致的腫瘤免疫抑制狀態(tài)并增強(qiáng)放射治療療效,其可能作用機(jī)制是通過抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路來實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：常山酮 放射治療 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 免疫微環(huán)境
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 對(duì)象和方法14-26
• 1.1 材料與儀器14-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與動(dòng)物14
• 1.1.2 試劑14-15
• 1.1.3 耗材15
• 1.1.4 照射裝備及參數(shù)15
• 1.1.5 儀器設(shè)備15-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-26
• 1.2.1 試劑的配制16
• 1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)16-18
• 1.2.3 動(dòng)物的飼養(yǎng)管理18
• 1.2.4 移植瘤模型的建立18
• 1.2.5 小鼠分組及治療法18
• 1.2.6 小鼠腫瘤組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞及脾臟淋巴細(xì)胞中Treg含量測(cè)定18-20
• 1.2.7 Elisa法檢測(cè)小鼠腫瘤組織中TGF-β1 水平20-21
• 1.2.8 非生物素免疫組化二步法檢測(cè)腫瘤組織TGF-βl表達(dá)情況21-22
• 1.2.9 Western Blot法測(cè)定smad蛋白水平22-25
• 1.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25-26
• 結(jié)果26-32
• 2.1 各組小鼠腫瘤組織及脾臟淋巴細(xì)胞中Treg細(xì)胞含量26-28
• 2.2 各組小鼠移植瘤TGF-β1 水平28-30
• 2.2.1 Elisa法檢測(cè)小鼠移植瘤TGF-β1 水平28-29
• 2.2.2 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠移植瘤TGF-β1 水平29-30
• 2.3 不同處理組TGF-β/smad通路蛋白表達(dá)變化30
• 2.4 各組小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制情況及生存30-32
• 討論32-37
• 3.1 放射治療引起腫瘤免疫微環(huán)境中Treg細(xì)胞增多32-33
• 3.2 放射治療激活TGF-β 信號(hào)通路33-34
• 3.3 TGF-β 促進(jìn)Tregs的增殖和分化，促進(jìn)腫瘤的免疫逃避34-35
• 3.4 常山酮抑制放射治療導(dǎo)致的TGF-β 通路激活及腫瘤免疫微環(huán)境中Treg細(xì)胞增多35-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 綜述45-60
• 綜述參考文獻(xiàn)53-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：929831