本文關鍵詞：長鏈非編碼RNA在多發(fā)性骨髓瘤細胞中的表達水平及對其生物學行為的影響

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【摘要】：背景及目的多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是人類漿細胞病中最常見的一種類型,約占所有血液系統(tǒng)腫瘤的10%,好發(fā)于中老年人,但病因尚不清楚。其是由于惡性漿細胞在骨髓內(nèi)增殖、浸潤并導致大量單克隆免疫球蛋白在體內(nèi)不同部位分泌與沉積,從而引起了腎功能不全、高黏滯綜合征、骨質(zhì)破壞、貧血、高鈣血癥、淀粉樣變性等一系列臨床表現(xiàn)。雖然近10年來,隨著新藥的不斷研發(fā)與干細胞移植術的開展,MM患者的總體生存時間和生活質(zhì)量都得到了極大的提高,但MM至今仍然是一種難以治愈的疾病。MM是一種高度異質(zhì)性疾病,患者的首發(fā)癥狀、臨床表現(xiàn)及生存時間等都具有明顯的差異性,因此個體化治療方式的選擇及對其進行分期分層等預后評估具有極大的臨床意義。因此尋找新的判斷預后及治療的方法成為當今MM研究重點和熱點,尋找對MM有效的判斷預后的標志物及新的治療靶點具有重要的臨床意義,新的特征性靶分子可能為尋找MM的治療及預后評估的新途徑提供可能。研究表明表觀遺傳與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關系密切,表觀遺傳受非編碼RNA(ncRNA)調(diào)控,隨著對ncRNA的認識的深入,人們越來越關注屬于ncRNA范疇內(nèi)的長鏈非編碼RNA所具有的重要調(diào)控功能。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類長度超過200nt的RNA分子,不具備編碼蛋白的能力或者只能編碼很短的多肽,可通過與DNA、RNA、蛋白質(zhì)等分子的互相作用,在多個水平發(fā)揮極為重要的調(diào)控功能。大量研究證明lncRNA廣泛參與調(diào)控人類生長發(fā)育和細胞的增殖、凋亡、周期等正常的生理活動,也與心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病及癌癥等的發(fā)生具有相關性。尤其發(fā)現(xiàn)lncRNA與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及患者的預后及治療效果評價之間關系密切,因此研究lncRNA在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其相應的機制非常重要,本課題組前期通過最新的生物學信息方法,整合大通量數(shù)據(jù)庫,篩選出了可能與多發(fā)性骨髓瘤患者預后相關的lncRNA,分別是CRNDE、PMS2P3和LOC400657,但lncRNA CRNDE、PMS2P3和LOC400657在MM中尚無相關報道。方法本研究選取的MM骨髓樣本均來自于在我院接受PAD方案治療的MM患者。我們將120例MM患者的骨髓瘤細胞作為實驗組,將10例正常人骨髓漿細胞作為正常健康對照組,應用qRT-PCR方法檢測目的lncRNACRNDE、PMS2P3和LOC400657的表達水平并應用Kolmogorov-Smirnov進行正態(tài)性檢驗。以檢測的目的lncRNA的原始表達量的中位數(shù)為界值,即將120例MM患者骨髓瘤細胞中目的基因的表達水平由高到低排列,以目的lncRNA的中位表達量作為界值,將MM患者劃分為高、低目的lncRNA表達水平組,每組60例患者,并結(jié)合患者的臨床病理資料,分析兩組間的年齡、血鈣、性別、血紅蛋白、肌酐、血小板、乳酸脫氫酶、β2微球蛋白和染色體檢查等相關指標的差異;并結(jié)合接受硼替佐米+表柔比星+地塞米松(pad)化療后2療程和4療程的患者的療效進行分析;通過隨訪患者的疾病無進展生存時間(pfs)和總體生存時間(os),探究目的lncrna的高低表達水平與mm患者預后的相關性。我們應用干擾sirna下調(diào)骨髓瘤細胞系rpmi-8226、u266中crnde的表達水平,通過細胞增殖、凋亡、周期等細胞功能實驗研究crnde對于mm細胞生物功能的影響。結(jié)果(1)正態(tài)性分布檢驗分析發(fā)現(xiàn)目的基因的表達量不成正態(tài)分布(k-s檢驗,p0.05),對目的基因的表達量進行對數(shù)處理后呈正態(tài)分布(k-s檢驗,p0.05)。我們發(fā)現(xiàn)三個目的lncrnacrnde、pms2p3和loc400657在mm患者的骨髓瘤細胞中均呈現(xiàn)上調(diào)表達:相較于正常對照,lgcrnde的相對表達量為實驗組2.432±0.029vs.正常對照組0.144±0.029(p0.01);lgpms2p3的相對表達量為實驗組2.135±0.033vs.正常對照組0.169±0.038(p0.01);lgloc400657的相對表達量為實驗組2.410±0.033vs.正常對照-0.027±0.057(p0.01)。(2)結(jié)合mm患者的臨床病理指標分析結(jié)果顯示,高表達crnde的患者相較于低表達crnde的患者,在iss分期(p=0.027)、血小板(p=0.032)、p53缺失(p=0.032)、13q14.3缺失(p=0.009)及1q21擴增(0.026)方面存在差異;高表達pms2p3的患者相較于低表達pms2p3的患者,乳酸脫氫酶(p=0.043)、p53缺失(p=0.032)及13q14.3缺失(p=0.003)方面存在差異;高表達loc400657的患者相較于低表達loc400657的患者,β2-mg(p=0.036)及13q14.3缺失(p=0.025)方面存在差異。(3)療效分析結(jié)果顯示crnde、pms2p3和loc400657在mm患者的骨髓瘤細胞中的表達水平與患者接受2個療程及4個療效pad治療方案的療效無顯著相關性。(4)預后因素分析顯示mm患者的骨髓瘤細胞中高表達crnde的患者,其pfs(p=0.035)、os(p=0.030)相較于低表達crnde的mm患者要差。多因素分析并未發(fā)現(xiàn)crnde在骨髓瘤細胞中的表達水平能夠作為判斷mm患者os的獨立預后因素(p=0.140)。(5)細胞功能實驗結(jié)果表明,下調(diào)crnde在骨髓瘤細胞中的表達,能夠顯著抑制細胞的增殖,使細胞凋亡增加,并能夠?qū)е耮0/g1細胞周期阻滯。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn),相較于正常人群,crnde、pms2p3和loc400657在mm患者骨髓瘤細胞中顯著上調(diào)表達。骨髓瘤細胞中高表達crnde的mm患者的pfs及os更短,但多因素分析未發(fā)現(xiàn)crnde高表達可作為預測mm預后的獨立危險因素,為crnde、pms2p3和loc400657應用于mm的進一步深入研究提供理論依據(jù),為尋找mm潛在的特征性靶向分子提供思路。下調(diào)骨髓瘤細胞系rpmi-8226、u266細胞中crnde的表達后可抑制骨髓瘤細胞增殖并促進骨髓瘤細胞凋亡,使細胞周期阻滯于G0/G1期,提示CRNDE可能通過影響細胞增殖與凋亡促進MM的發(fā)生、發(fā)展。這些新的研究發(fā)現(xiàn)將為今后深入研究MM分子機制及治療新靶點提供新思路。
【關鍵詞】：lncRNA CRNDE PMS2P3 LOC400657 多發(fā)性骨髓瘤
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.3
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 中英文略縮詞表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 三個LncRNA在多發(fā)性骨髓瘤細胞中的表達水平及與臨床指標的相關性分析14-41
• 一、資料和方法15-21
• 二、實驗結(jié)果21-34
• 三、討論34-36
• 參考文獻36-41
• 第二部分 LncRNACRNDE對多發(fā)性骨髓瘤細胞功能的影響41-55
• 一、材料與方法41-46
• 二、實驗結(jié)果46-51
• 三、討論51-53
• 參考文獻53-55
• 綜述55-67
• 參考文獻60-67
• 致謝67

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本文編號：928013