本文關(guān)鍵詞：沉默CHAF1b對人肝癌細胞株SMMC-7721生物學(xué)行為的影響

  更多相關(guān)文章： CHAF1b 肝細胞癌 SMMC-7721 RNA干擾

【摘要】：目的:1、檢測染色質(zhì)組裝因子1(Chromatin assembly factor 1,CAF-1)的亞基p60(CHAF1b)在原發(fā)性肝細胞癌組織中的表達情況,并分析其表達與臨床病理因素(性別、年齡、腫瘤直徑、門靜脈侵犯、肝硬化、分化程度、TNM分期)的關(guān)系。2、通過檢測CHAF1b基因RNAi的重組慢病毒對人肝癌細胞株SMMC-7721增殖、凋亡、細胞周期、細胞克隆能力的影響,初步闡明CHAF1b在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法:1、收集經(jīng)手術(shù)切除的110例肝癌組織及相應(yīng)的癌旁組織(至少距離癌組織1cm),以及20例正常肝組織,采用免疫組化法檢測3種組織中CHAF1b的表達情況,并比較分析其表達差異與臨床病理因素(性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、門靜脈侵犯、肝硬化、TNM分期)的關(guān)系。2、采用real-time PCR在mRNA水平檢測目的基因(CHAF1b)在各種人肝癌細胞株(SMMC-7721、HepG2、Hep3B、Huh-7)中的表達情況。3、構(gòu)建針對CHAF1b基因的RNAi慢病毒表達載體并轉(zhuǎn)染入人肝癌細胞株SMMC-7721,分成CHAF1b-RNAi慢病毒組(實驗組)和慢病毒空載組(對照組)。4、采用real-time PCR在mRNA水平檢測構(gòu)建的RNAi慢病毒對人肝癌細胞株SMMC-7721中CHAF1b表達的抑制效果;并檢測抑制CHAF1b的表達后對細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、細胞克隆形成能力的影響。結(jié)果:1、以CHAF1b抗體行HCC、癌旁組織及正常肝組織免疫組織化學(xué)染色,細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為CHAF1b表達陽性。CHAF1b在HCC、癌旁組織及正常肝組織中的陽性率分別為63.6%(70/110)、3.6%(4/110)、0.0%(0/20),三者之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001),其中CHAF1b在肝癌組織中陽性率高于癌旁組織,CHAF1b在肝癌組織中的陽性率高于正常組織,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。CHAF1b在肝癌組織中的表達與性別、年齡、門靜脈侵犯、肝硬化、分化程度及TNM分期無關(guān)(P0.05),與腫瘤直徑有關(guān)(P0.05)。2、人肝癌細胞株SMMC-7221中有CHAF1b m RNA顯著表達。3、成功構(gòu)建了針對CHAF1b基因的RNAi慢病毒表達載體,并經(jīng)PCR和測序鑒定干擾片段的堿基序列及插入位點完全正確。4、構(gòu)建的RNAi慢病毒感染人肝癌細胞株SMMC-7721后可使CHAF1b mRNA表達量顯著下降(P=0.006);Cellomics細胞計數(shù)檢測細胞生長:實驗組細胞的生長明顯慢于對照組(P0.05);FACS細胞周期檢測:實驗組G1的細胞顯著減少(P0.05),G2/M期與S期細胞顯著增多(P0.05);Annexin V-APC單染法流式細胞儀檢測細胞凋亡:實驗組發(fā)生凋亡的細胞明顯高于對照組(P0.05);細胞克隆形成檢測:實驗組SMMC-7721細胞集落數(shù)目明顯低于對照組(P0.05);MTT法檢測細胞增殖:實驗組細胞MTT值比值(即增殖倍數(shù))低于對照組(P0.05)。結(jié)論:1.肝癌組織的CHAF1b的表達明顯高于癌旁組織及正常肝組織,肝癌組織的CHAF1b的表達情況與性別、年齡、門靜脈侵犯、肝硬化、分化程度及TNM分期無關(guān),與腫瘤直徑有關(guān)。2.人肝癌細胞株SMMC-7721表達CHAF1b。3.構(gòu)建的針對CHAF1b基因的RNAi慢病毒表達載體能有效抑制CHAF1b基因的表達,干擾CHAF1b基因表達后能顯著抑制的人肝癌細胞株SMMC-7721的增殖能力,促進其凋亡,影響其細胞周期。
【關(guān)鍵詞】：CHAF1b 肝細胞癌 SMMC-7721 RNA干擾
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 CHAF1b在肝細胞癌組織中的表達及其臨床意義14-19
• 2.1 研究對象14
• 2.2 主要儀器和試劑14-15
• 2.2.1 主要儀器14-15
• 2.2.2 主要試劑15
• 2.3 實驗步驟15
• 2.4 設(shè)立對照15-16
• 2.5 結(jié)果判定16
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析方法16
• 2.7 結(jié)果16-18
• 2.7.1 肝癌組、癌旁組、正常組中CHAF1b的表達16-17
• 2.7.2 CHAF1b的表達與肝癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系17-18
• 2.8 結(jié)論18-19
• 第3章 CHAF1b在人肝癌細胞株中的表達19-24
• 3.1 實驗材料19
• 3.1.1 研究對象19
• 3.1.2 主要儀器與試劑19
• 3.2 實驗方法19-23
• 3.2.1 引物設(shè)計19-20
• 3.2.2 實驗步驟20-23
• 3.3 統(tǒng)計學(xué)分析方法23
• 3.4 結(jié)果23
• 3.5 結(jié)論23-24
• 第4章 CHAF1b基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建與包裝24-34
• 4.1 實驗材料24-25
• 4.1.1 慢病毒載體系統(tǒng)24
• 4.1.2 細胞與菌株24
• 4.1.3 主要儀器24
• 4.1.4 主要試劑24-25
• 4.2 實驗方法25-31
• 4.2.1 CHAF1b基因RNA干擾慢病毒載體的制備25-29
• 4.2.2 慢病毒包裝29-31
• 4.3 結(jié)果31-33
• 4.3.1 載體酶切線性化31
• 4.3.2 目的基因陽性克隆31-32
• 4.3.3 陽性克隆測序結(jié)果分析32-33
• 4.4 結(jié)論33-34
• 第5章 重組慢病毒對人肝癌細胞株SMMC-7721的生物學(xué)影響34-44
• 5.1 研究對象34
• 5.2 主要儀器和試劑34-35
• 5.2.1 主要儀器34
• 5.2.2 主要試劑34-35
• 5.3 實驗方法35-38
• 5.3.1 慢病毒感染目的細胞35-36
• 5.3.2 Real-time PCR檢測敲減效率36
• 5.3.3 Cellomics細胞計數(shù)檢測細胞生長36
• 5.3.4 FACS細胞周期檢測36-37
• 5.3.5 Annexin V-APC單染法流式細胞儀檢測細胞凋亡37
• 5.3.6 細胞克隆形成檢測37
• 5.3.7 MTT法檢測細胞增殖37-38
• 5.4 統(tǒng)計學(xué)分析方法38
• 5.5 結(jié)果38-42
• 5.5.1 慢病毒轉(zhuǎn)染效率檢測38-39
• 5.5.2 Real-time PCR檢測敲減效率結(jié)果39-40
• 5.5.3 Cellomics細胞計數(shù)檢測細胞生長結(jié)果40
• 5.5.4 FACS細胞周期檢測結(jié)果40-41
• 5.5.5 Annexin V-APC單染法流式細胞儀檢測細胞凋亡結(jié)果41
• 5.5.6 細胞克隆形成檢測結(jié)果41-42
• 5.5.7 MTT法檢測細胞增殖結(jié)果42
• 5.6 結(jié)論42-44
• 第6章 討論44-47
• 6.1 目的基因的選擇44
• 6.2 免疫組織化學(xué)技術(shù)和Real-time PCR44-45
• 6.3 RNA干擾技術(shù)與慢病毒載體45
• 6.4 實驗設(shè)計45
• 6.5 實驗結(jié)論45-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述52-58
• 參考文獻56-58

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛平傳，吳孟超，陳漢，黃承誠，謝天培，屠振興，，鄧海琳;抗藥性人肝癌細胞株的建立[J];肝膽外科雜志;1994年04期

2 陳曉品,何少琴,馮炎;照射誘發(fā)人肝癌細胞株凋亡觀察[J];中國癌癥雜志;1998年02期

3 李龍江,陳志瓊,湯為學(xué),楊曉蘭,余瑜;德氮吡格對人肝癌細胞株增殖抑制的體外研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2005年03期

4 談榮玖;陳宗瓊;江明萬;唐春紅;;人肝癌細胞株線粒體DNA缺失對多藥耐藥表型的影響[J];世界華人消化雜志;2006年34期

5 黃剛婭;王麗;段承剛;何濤;;古抑菌素A對人肝癌細胞株HepG2增殖和凋亡的影響及其機制研究[J];中國全科醫(yī)學(xué);2010年30期

6 鄧君健;徐細明;郭紅庭;向淼;吳耀貴;張一橋;戈偉;宋啟斌;;5-脂氧合酶抑制劑對人肝癌細胞株HepG2增殖和凋亡的影響[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年03期

7 王強;武華;;雙氫青蒿素體外抑制人肝癌細胞株HepG2生長作用的實驗研究[J];中國醫(yī)療前沿;2012年11期

8 劉遠;蔣力云;李文學(xué);朱偉;;吲哚-3-甲醇對人肝癌細胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影響[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2012年08期

9 劉遠;蔣力云;李文學(xué);朱偉;;吲哚-3-甲醇抑制人肝癌細胞株SMMC-7721生長作用及機理探討[J];江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年03期

10 包永睿;楊欣欣;孟憲生;王帥;蔡琳;;四味肝泰軟膠囊對人肝癌細胞株SMMC-7721細胞周期及凋亡影響的初步研究[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2013年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙建東;顧科;蔣國梁;;亞致死性照射誘發(fā)人肝癌細胞株血管內(nèi)皮生長因子的分泌增加[A];中華醫(yī)學(xué)會放射腫瘤治療學(xué)分會六屆二次暨中國抗癌協(xié)會腫瘤放療專業(yè)委員會二屆二次學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

2 葛曰萍;陳尊器;;低血清培養(yǎng)的人肝癌細胞株及其特性[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

3 劉瑤;吳小翎;王志剛;汪朝霞;李攀;康娟;;載紫杉醇超聲微泡造影劑對人肝癌細胞株HepG2增殖影響及誘導(dǎo)凋亡作用研究[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第七屆全國腹部超聲學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文匯編[C];2007年

4 薛凈;李瑜元;沙衛(wèi)紅;聶玉強;;苦參堿作用前后人肝癌細胞株HepG2細胞基因表達譜的改變[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

5 張建軍;黃育華;晏雪生;張赤志;盛國光;王伯祥;;富硒綠茶對人肝癌細胞株惡性表型逆轉(zhuǎn)作用的血清藥理學(xué)研究[A];2002全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

6 夏國豪;章永紅;潘良熹;馮繼峰;;光葉番荔枝中二萜類化合物對人肝癌細胞株SMMC-7721生長抑制及其機制的研究[A];第四屆中國腫瘤大會中國藥理學(xué)會腫瘤藥理專業(yè)委員會分會場學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

7 丁偉;司維柯;孫世俊;潘靜;李招權(quán);;過表達外源性CCN1對人肝癌細胞株HepG2生長和遷移的影響[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2008年

8 李成剛;李嘉林;梁欣;海春旭;;過氧化氫對人肝癌細胞株HepG_2促增殖作用的研究[A];第六屆全國自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議和海峽兩岸自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

9 郭新彪;索中軍;;乙醇對肝細胞增殖的影響機理探討[A];海峽兩岸首屆毒理學(xué)研討會論文（摘要）集[C];2001年

10 劉賢稱;陳不尤;肖明兵;倪潤洲;;高能X線照射對人肝癌細胞株凋亡及bcl-2、fas基因表達的影響[A];2007第六屆全國放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 潘婷婷;缺氧誘導(dǎo)因子2α在肝細胞癌中的表達意義及其分子機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

2 呂麗虹;抗腫瘤藥物促進人肝癌細胞釋放攜帶熱休克蛋白的exosomes及其高效誘導(dǎo)自然殺傷細胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)的體外研究[D];中山大學(xué);2012年

3 薛建鋒;凝血酶敏感蛋白-1對人肝癌細胞株HCCLM3的作用及其機制的初步研究[D];浙江大學(xué);2006年

4 朱倩;連接蛋白32在人原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移中的作用及其機制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

5 張國橋;mtDNA缺失的人肝癌細胞株p～0SK-Hep1的建立及其表型改變的觀察[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

6 李波;重組腺病毒介導(dǎo)多藥耐藥基因反義RNA逆轉(zhuǎn)人肝癌細胞株的MDR表型的實驗研究[D];四川大學(xué);2004年

7 潘躍銀;尼美舒利的抑制肝細胞癌作用及其機制的實驗及臨床研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

8 蘇曉通;shRNA沉默人肝癌細胞株SK-Hep1 Kir6.2基因的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉亞婷;siRNA特異性沉默TLR4基因?qū)θ烁伟┘毎甑脑鲋澈偷蛲龅挠绊懸约皺C制的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 劉慧;新型全反式維甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯對人肝癌細胞株HepG2增殖的影響及其分子機制的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

3 黃燦;沉默CHAF1b對人肝癌細胞株SMMC-7721生物學(xué)行為的影響[D];南昌大學(xué);2016年

4 仇冬則;蟾毒靈對人肝癌細胞株增殖遷移侵襲黏附能力的影響及其機理研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

5 凌華毓;尼妥珠單抗聯(lián)合表阿霉素對人肝癌細胞株HepG2體外生長的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

6 劉鵬;維生素C、順鉑及二者聯(lián)合對人肝癌細胞株HepG2細胞抑制作用體外實驗研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2013年

7 宋莉;人參環(huán)氧炔醇對人肝癌細胞株HepG2、SMMC-7721的誘導(dǎo)分化作用[D];上海交通大學(xué);2007年

8 邢宏松;iNOS抑制劑1400W對人肝癌細胞SMMC-7721增殖及VEGF表達的影響[D];南昌大學(xué);2008年

9 李廣志;青蒿素和姜黃素聯(lián)用對人肝癌細胞株HepG2細胞增殖、凋亡以及端粒酶活性的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

10 孫瑛瑋;不同濃度的芬太尼對體外培養(yǎng)人肝癌細胞株HepG2的影響[D];中南大學(xué);2011年

本文編號：924195