本文關(guān)鍵詞：守宮硫酸糖肽抑制肝癌細(xì)胞增殖與遷移的體外研究

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【摘要】：目的:臨床上,多數(shù)實(shí)體惡性腫瘤的硬度高于正常組織,軟堅(jiān)散結(jié)是中醫(yī)治療惡性腫瘤的重要方法之一。守宮硫酸糖肽是傳統(tǒng)軟堅(jiān)散結(jié)中藥守宮抗腫瘤的主要有效成份。本課題通過守宮硫酸糖肽對肝癌Hep G2細(xì)胞的體外研究,探究守宮硫酸糖肽對肝癌Hep G2細(xì)胞增殖與遷移的影響并初步探討其中的機(jī)制。方法:1.取肝癌Hep G2細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對照組、GSPP低劑量組(20μg/m L)、GSPP中劑量組(100μg/m L)、GSPP高劑量組(200μg/m L)。運(yùn)用MTS試驗(yàn)觀察守宮硫酸糖肽對肝癌Hep G2細(xì)胞增殖的影響,并依據(jù)不同觀察時間點(diǎn)的細(xì)胞數(shù)繪制細(xì)胞生長曲線。2.取肝癌Hep G2細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分組同上,通過劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)觀察守宮硫酸糖肽對Hep G2細(xì)胞遷移的影響。并通過免疫熒光法觀察不同實(shí)驗(yàn)組Hep G2細(xì)胞內(nèi)E-鈣粘蛋白,Vimentin以及α-SMA表達(dá)情況。3.取肝癌Hep G2細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分組同上,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測Hep G2細(xì)胞表面整合素β1表達(dá)情況,并通過Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞內(nèi)E-鈣粘蛋白及p-ERK表達(dá)情況。同時,運(yùn)用RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞內(nèi)整合素信號通路上Rho,Rac,cdc42,Arp3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.MTS法探究守宮硫酸糖肽對Hep G2細(xì)胞增殖的影響:分別于加藥12h,24h,36h,48h測量每組細(xì)胞的OD值。結(jié)果顯示:GSPP高中低劑量組Hep G2增殖的細(xì)胞數(shù)較空白對照組均明顯較少(P0.05),并且高劑量(200μg/m L)組對于增殖的抑制作用最強(qiáng)。2.(1)劃痕實(shí)驗(yàn):在加入藥物時和加入藥物12小時后,分別測量不同組別細(xì)胞遷移運(yùn)動的距離。通過觀察圖片和測量細(xì)胞遷移的距離我們可以看出,三個劑量守宮硫酸糖肽組Hep G2細(xì)胞的遷移距離與空白對照組比較,均明顯減少(P0.01)。(2)Transwell實(shí)驗(yàn):從穿過Transwell小室膜的細(xì)胞數(shù)看,GSPP三個劑量組較空白對照組細(xì)胞數(shù)均明顯減少(P0.01)。并且這種抑制遷移的作用呈劑量依賴性。(3)免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞內(nèi)E-鈣粘蛋白,Vimentin與α-SMA的表達(dá)情況:守宮硫酸糖肽三個劑量組與對照組比較,Hep G2細(xì)胞內(nèi)E-鈣粘蛋白表達(dá)增加,Vimentin與α-SMA表達(dá)減少。3.(1)流式細(xì)胞術(shù)檢測Hep G2細(xì)胞表面整合素β1蛋白的表達(dá):與空白對照組比較,加入守宮硫酸糖肽的三個劑量組整合素β1的表達(dá)均明顯減少(P0.05)。(2)通過Western-blot實(shí)驗(yàn)觀察Hep G2細(xì)胞內(nèi)p-ERK與E-鈣粘蛋白的表達(dá)情況:守宮硫酸糖肽三個不同劑量組p-ERK蛋白的表達(dá)量均明顯低于空白對照組,而E-鈣粘蛋白的表達(dá)量則高于對照組。(3)RT-PCR檢測Hep G2細(xì)胞內(nèi)整合素信號通路上蛋白的表達(dá):加藥組Hep G2細(xì)胞內(nèi)整合素通路上的Rho,Rac,cdc42,Arp3蛋白表達(dá)量均較空白對照組均明顯減少(P0.05)。結(jié)論:1.守宮硫酸糖肽能夠抑制Hep G2細(xì)胞的增殖,并且在高劑量(200μg/m L)組抑制作用最強(qiáng)。2.守宮硫酸糖肽能夠顯著抑制Hep G2細(xì)胞的遷移,并且這種抑制作用呈劑量依賴性。3.守宮硫酸糖肽通過抑制肝癌細(xì)胞EMT以及ERK磷酸化從而抑制腫瘤的增殖與遷移。4.守宮硫酸糖肽對Hep G2細(xì)胞生長與轉(zhuǎn)移的抑制作用,可能是通過抑制整合素信號通路實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：守宮硫酸糖肽肝癌 HepG2 細(xì)胞增殖遷移整合素通路
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、守宮硫酸糖肽對HepG2增殖與遷移的影響14-27
• 1.1 對象和方法14-20
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)14
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1.3 方法步驟15-20
• 1.2 結(jié)果20-23
• 1.2.1 守宮硫酸糖肽對肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響20
• 1.2.2 守宮硫酸糖肽對肝癌HepG2細(xì)胞遷移的影響20-23
• 1.2.3 守宮硫酸糖肽對肝癌HepG2細(xì)胞骨架蛋白的影響23
• 1.3 討論23-26
• 1.3.1 軟堅(jiān)散結(jié)法治療腫瘤的歷史沿革23-24
• 1.3.2 軟堅(jiān)散結(jié)中藥抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)24-25
• 1.3.3 EMT是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要步驟25-26
• 1.4 小結(jié)26-27
• 二、守宮硫酸糖肽抗HepG2生長與轉(zhuǎn)移機(jī)制初探27-40
• 2.1 對象與方法27-34
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)27
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 2.1.3 方法步驟28-34
• 2.2 結(jié)果34-36
• 2.2.1 守宮硫酸糖肽對HepG2表面整合素 β1 的表達(dá)的影響34
• 2.2.2 守宮硫酸糖肽對HepG2細(xì)胞內(nèi)p-ERK,E-鈣粘蛋白表達(dá)的影響2434-35
• 2.2.3 守宮硫酸糖肽對HepG2細(xì)胞內(nèi)整合素通路上蛋白表達(dá)的影響35-36
• 2.3 討論36-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 綜述 中藥治療腫瘤及預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究進(jìn)展46-61
• 綜述參考文獻(xiàn)54-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：912047