本文關(guān)鍵詞：糖代謝機制在丹參酮ⅡA和姜黃素抑制食管癌細胞增殖的作用研究

  更多相關(guān)文章： 丹參酮ⅡA 姜黃素 M2型丙酮酸激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 食管癌細胞

【摘要】：近年來發(fā)現(xiàn)細胞代謝異常是腫瘤細胞增殖的一個重要因素,而一些天然產(chǎn)物具有很好的抗腫瘤作用,但其對腫瘤細胞代謝水平的影響和作用機制目前尚未完全闡明。本課題觀察天然產(chǎn)物姜黃素和丹參酮ⅡA能否通過抑制腫瘤糖酵解途徑,進而抑制腫瘤細胞增殖。姜黃素對食管癌Ec109細胞產(chǎn)生劑量依賴性抑制作用,可以誘導其出現(xiàn)G2/M周期阻滯。姜黃素下調(diào)糖酵解關(guān)鍵酶,包括葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白(GLUT4),己糖激酶(HK2),果糖磷酸激酶(PFKFP3)和丙酮酸激酶(PKM2)的mRNA和蛋白表達。姜黃素誘導Ec109細胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路蛋白的顯著性激活,并且呈濃度依賴性;AMPK激活劑AICAR促進了姜黃素介導的Ec109細胞中糖酵解酶的下調(diào),然而其抑制劑compound C逆轉(zhuǎn)了姜黃素介導的Ec109細胞中糖酵解酶的下調(diào)現(xiàn)象,同時,小分子干擾RNA特異靶向AMPK顯著地逆轉(zhuǎn)了姜黃素介導Ec109細胞中糖酵解酶的下調(diào)現(xiàn)象。敲低GLUT4,HK2,PFKFP3和PKM2的表達后Ec109細胞存活率降低,然而敲低AMPK后促進Ec109細胞的增殖,此現(xiàn)象表明姜黃素對Ec109細胞增殖的抑制是通過促進AMPK的磷酸化激活AMPK信號通路來實現(xiàn)的,并最終抑制了Ec109細胞的增殖。丹參酮IIA能夠顯著的抑制Ec109細胞增殖,可以誘導其出現(xiàn)S期阻滯。丹參酮IIA誘導Ec109細胞中GLUT4,HK2,PFKFP3和PKM2表達的顯著性下調(diào)。敲低PKM2后可以促進丹參酮ⅡA誘導Ec109細胞中PKM2表達的顯著性下調(diào)。TargetScan軟件預測PKM2是miR-122的潛在靶標,敲低miR-122后Ec109細胞中PKM2的表達明顯升高,而miR-122過表達顯著抑制了PKM2的表達,結(jié)果表明Ec109細胞中miR-122是PKM2表達的負調(diào)控子,丹參酮ⅡA誘導miR-122上調(diào)與PKM2的表達呈負相關(guān)。丹參酮ⅡA誘導miR-122上調(diào)有助于抑制Ec109細胞增殖,其通過靶向下調(diào)PKM2的表達實現(xiàn)。研究表明丹參酮IIA對PKM2表達的下調(diào)是通過促進miR-122的表達上調(diào)來實現(xiàn)的,并最終抑制Ec109細胞的增殖。綜上所述,代謝重編程的逆轉(zhuǎn)在丹參酮ⅡA和姜黃素抑制Ec109細胞增殖中起著關(guān)鍵作用。深入認識糖酵解途徑中限速酶和通路蛋白在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到怎樣的機制,從而為進一步解釋Warburg效應的分子機制,以及研發(fā)出靶向調(diào)控腫瘤代謝的藥物提供了新思路。
【關(guān)鍵詞】：丹參酮ⅡA 姜黃素 M2型丙酮酸激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 食管癌細胞
【學位授予單位】：北京工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R73-3
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文縮寫詞7-11
• 第1章 緒論11-23
• 1.1 癌癥研究概況11-13
• 1.2 腫瘤糖酵解13-14
• 1.3 糖酵解通路中的關(guān)鍵酶與腫瘤14-16
• 1.3.1 己糖激酶 2(HK2)14
• 1.3.2 丙酮酸激酶(PK)14-15
• 1.3.3 果糖磷酸激酶 2(PFK2/PFKFB3)15-16
• 1.3.4 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白(GLUT)16
• 1.4 糖酵解通路中的信號途徑與腫瘤16-18
• 1.4.1 PI3K-AKT信號通路16-17
• 1.4.2 mTOR信號通路與腫瘤糖代謝17
• 1.4.3 AMPK信號通路與腫瘤糖代謝17-18
• 1.5 天然產(chǎn)物對腫瘤代謝的影響18-21
• 1.5.1 姜黃素19-20
• 1.5.2 丹參酮20-21
• 1.6 miRNA調(diào)控糖酵解途徑中的關(guān)鍵酶與腫瘤21-22
• 1.7 研究內(nèi)容與意義22-23
• 第2章 姜黃素通過AMPK通路介導的代謝轉(zhuǎn)變抑制Ec109細胞生長23-41
• 2.1 引言23-24
• 2.2 實驗材料24-27
• 2.2.1 藥品24
• 2.2.2 儀器設(shè)備24
• 2.2.3 試劑及耗材24-26
• 2.2.4 引物的設(shè)計合成26-27
• 2.3 實驗方法27-32
• 2.3.1 細胞培養(yǎng)27
• 2.3.2 MTS法細胞毒檢測27-28
• 2.3.3 細胞凋亡試驗28
• 2.3.4 RNA提取及RT-PCR實驗28-30
• 2.3.5 蛋白質(zhì)提取及Western檢測30-32
• 2.3.6 轉(zhuǎn)染32
• 2.3.7 統(tǒng)計學處理32
• 2.4 實驗結(jié)果32-37
• 2.4.1 姜黃素抑制Ec109細胞生長32-33
• 2.4.2 姜黃素誘導Ec109細胞周期阻滯在G2/M期33-35
• 2.4.3 姜黃素下調(diào)Ec109細胞中的糖酵解酶的表達35-36
• 2.4.4 AMPK參與姜黃素介導的Ec109細胞中糖酵解酶的下調(diào)過程36
• 2.4.5 AMPK介導的糖酵解酶下調(diào)阻遏Ec109細胞的生長36-37
• 2.5 討論37-39
• 2.6 本章小結(jié)39-41
• 第3章 糖代謝機制在丹參酮ⅡA抑制Ec109細胞增殖的作用研究41-59
• 3.1 引言41
• 3.2 實驗材料41-42
• 3.2.1 藥品41-42
• 3.3 實驗方法42-45
• 3.3.1 細胞培養(yǎng)42
• 3.3.2 MTS法細胞毒檢測42
• 3.3.3 細胞周期分析42
• 3.3.4 RNA提取及RT-PCR實驗42-43
• 3.3.5 蛋白質(zhì)提取及Western檢測43
• 3.3.6 micro RNA轉(zhuǎn)染43-44
• 3.3.7 轉(zhuǎn)染44-45
• 3.3.8 統(tǒng)計學處理45
• 3.4 實驗結(jié)果45-55
• 3.4.1 丹參酮ⅡA對腫瘤細胞增殖的抑制作用45-46
• 3.4.2 丹參酮ⅡA對Ec109細胞細胞周期和細胞凋亡的影響46-48
• 3.4.3 丹參酮ⅡA對糖酵解通路關(guān)鍵酶mRNA表達的影響48-49
• 3.4.4 丹參酮ⅡA對糖酵解通路關(guān)鍵酶蛋白表達的影響49-51
• 3.4.5 siRNA轉(zhuǎn)染檢測丹參酮ⅡA對腫瘤細胞糖酵解通路關(guān)鍵酶的抑制作用51-52
• 3.4.6 丹參酮ⅡA通過miRNA下調(diào)PKM2的表達從而抑制Ec109細胞的增殖52-55
• 3.5 討論55-57
• 3.6 本章小結(jié)57-59
• 結(jié)論59-61
• 參考文獻61-71
• 攻讀碩士學位期間所發(fā)表的學術(shù)論文71-73
• 致謝73

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魏巍;;丹參酮的臨床應用進展[J];天津藥學;2007年04期

2 陳紅霞;陳芳芳;顏新宇;;丹參中丹參酮ⅡA三種提取方法的比較研究[J];中國現(xiàn)代藥物應用;2010年04期

3 陳建明;童曉潔;陳瑾;;丹參酮ⅡA對人牙周膜成纖維細胞增殖的影響[J];中國當代醫(yī)藥;2014年12期

4 張立海,宋友華,孫春華,任百健,傅得興;反相高效液相色譜法測定藿貞膠囊中丹參酮Ⅱ_A的含量[J];中國藥學雜志;2000年08期

5 杜志謙,馮坤,劉月桂,趙新杰,王廣強,薛素娟;丹參中丹參酮Ⅱ_A受熱含量降低的規(guī)律研究[J];中草藥;2002年10期

6 林佳,徐麗珍,李琰,楊世林;不同產(chǎn)地丹參中丹參酮Ⅱ_A的含量比較[J];中國中藥雜志;2002年02期

7 杜天信,桂偉;丹參酮Ⅱ_A的檢測在丹參質(zhì)量控制中的應用[J];河南中醫(yī);2002年05期

8 廉蓮;丹參中丹參酮ⅡA含量變化的研究[J];遼寧中醫(yī)學院學報;2003年04期

9 韓占友,李景清;反相高效液相色譜法測定冠心七味片中丹參酮ⅡA的含量[J];內(nèi)蒙古民族大學學報(自然科學版);2005年02期

10 范江勇;張志勇;韓U哢，

本文編號：907667