本文關鍵詞：CD151對人結腸癌干細胞裸鼠移植瘤生長作用及機制的研究

  更多相關文章： 結腸癌干細胞 CD151 CD133 CD44 Wnt-5a β-catenin

【摘要】：目的:本研究擬用篩選后的人結腸癌干細胞,建立裸鼠移植瘤模型。在細胞水平和整體動物水平上,探討在人結腸癌干細胞裸鼠成瘤模型中CD151基因?qū)nt信號轉導通路的作用影響。方法:1運用細胞培養(yǎng)技術對HT29細胞系及被敲除CD151的HT29細胞系在含有血清的培養(yǎng)基中進行貼壁培養(yǎng),對CD133+CD44+結腸癌干細胞和敲除CD151的CD133+CD44+結腸癌干細胞在無血清培養(yǎng)基中進行懸浮培養(yǎng),觀察細胞的生長狀況,獲取足量對數(shù)生長期的結腸癌干細胞及普通結腸癌細胞,并通過含有血清的培養(yǎng)基對結腸癌干細胞進行誘導分化來鑒定結腸癌干細胞。2運用激光共聚焦顯微鏡檢測HT29細胞組和敲除CD151的HT29細胞組中CD44蛋白和CD133蛋白的熒光表達情況。3裸鼠皮下移植瘤模型的構建:將HT29細胞和敲除CD151的HT29細胞及其分選后的兩種CD133+CD44+的結腸癌干細胞分別接種于裸鼠皮下,觀察其成瘤情況及進行病理學檢查。4采用實時熒光定量RT-PCR技術檢測兩組CD133+CD44+的結腸癌干細的裸鼠移植瘤中Wnt-5a m RNA、β-catenin m RNA的表達。結果:1 HT29細胞和敲除CD151的HT29細胞在含有血清的培養(yǎng)基中貼壁生長狀況良好,CD133+CD44+結腸癌干細胞和敲除CD151的CD133+CD44+結腸癌干細胞在無血清培養(yǎng)基中呈球狀懸浮生長,生長狀況良好。腫瘤干細胞球通過含有血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),在其誘導分化后均貼壁生長。2激光共聚焦顯微鏡檢測到HT29細胞組CD44蛋白、CD133蛋白的熒光強度明顯高于敲除CD151的HT29細胞組。3 CD133+CD44+結腸癌干細胞組的裸鼠成瘤率、瘤體體積、惡性程度均高于HT29細胞組和敲除CD151的CD133+CD44+結腸癌干細胞組。4應用實時熒光定量的RT-PCR技術檢測到CD133+CD44+結腸癌干細胞所形成的裸鼠移植瘤中Wnt-5a m RNA、β-catenin m RNA的表達量明顯高于敲除CD151的CD133+CD44+結腸癌干細胞組。結論:1經(jīng)CD133抗體和CD44抗體標記篩選的結腸癌干細胞有較強的增殖和侵襲能力;CD151基因缺失的HT29細胞中結腸癌干細胞特征性標記物CD44蛋白和CD133蛋白的表達較原株HT29細胞明顯減少。2結腸癌干細胞組敲除CD151基因后可使與調(diào)節(jié)細胞增殖和分化功能密切相關的Wnt-5a和β-catenin基因轉錄水平明顯降低,其裸鼠成瘤率、瘤體體積、組織的惡性程度及對周圍組織的侵襲能力也隨之降低,提示CD151可能通過Wnt通路影響結腸癌的增殖和侵襲功能。3進一步闡明CD151基因的生理功能及監(jiān)測其基因的表達水平,可能為今后結腸癌的治療提供有力依據(jù)。
【關鍵詞】：結腸癌干細胞 CD151 CD133 CD44 Wnt-5a β-catenin
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRAST6-8
• 英文縮寫8-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-19
• 1 實驗材料10-12
• 2 實驗方法12-19
• 結果19-21
• 附圖21-29
• 附表29-32
• 討論32-35
• 結論35-36
• 參考文獻36-38
• 綜述 腫瘤干細胞的研究進展38-50
• 參考文獻45-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

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本文編號：888502