本文關(guān)鍵詞：生物鐘基因NPAS2對(duì)腸癌細(xì)胞株DLD-1生物學(xué)行為影響的基礎(chǔ)與臨床研究

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【摘要】：目的本研究試圖闡述人體生物鐘基因家族的NPAS2基因在結(jié)腸癌細(xì)胞株DLD-1中的作用以及在腸癌中相關(guān)臨床病理因素分析研究,討論生物鐘基因與腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn),在腸癌細(xì)胞株中分析研究NPAS2的表達(dá)異常對(duì)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及侵襲遷移的影響。為治療腸癌基因及周期性治療提供依據(jù)。方法采用定量PCR方法檢測(cè)108例腸癌患者的癌灶及癌旁組織中NPAS2表達(dá)量,分析其高/低表達(dá)與腫瘤臨床病理因素的相關(guān)性。使用RNA干擾技術(shù),敲除腸癌細(xì)胞株DLD-1中NPAS2基因表達(dá),建立瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NPAS2-siRNA的DLD-1細(xì)胞株,用qRT-PCR法對(duì)NPAS2基因敲除進(jìn)行鑒定。NPAS2基因沉默表達(dá)后:用CCK-8及免疫組化方法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的變化;用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化情況;用TUNEL方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的變化;使用細(xì)胞劃痕技術(shù)觀察細(xì)胞遷移能力變化,用Transwell方法檢測(cè)細(xì)胞侵襲情況。結(jié)果108例腸癌患者中,腫瘤癌灶組織NPAS2的mRNA表達(dá)量比相應(yīng)的癌旁組織減低(p0.05);臨床病理因素分析表明NPAS2的表達(dá)缺失與腫瘤的大小、TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(p0.05),而與患者年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腹膜轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(p0.05)。在腸癌細(xì)胞株DLD-1中,分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染干擾RNA:SiRNA-1#、SiRNA-2#,對(duì)照RNA:SiRNA-Con,成功獲得實(shí)驗(yàn)組NPAS2低表達(dá)DLD-1/SiRNA-1#組、DLD-1/SiRNA-2#組及對(duì)照組DLD-1/SiRNA-Con,實(shí)驗(yàn)組的NPAS2表達(dá)量分別被顯著下調(diào)(p0.05)。NPAS2表達(dá)沉默后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯比對(duì)照組增快(p0.05),同時(shí)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞相對(duì)于對(duì)照組細(xì)胞多處于G2/M分裂期(p0.05),但是NPAS2的表達(dá)缺失對(duì)兩組的細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響(p0.05)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)NPAS2表達(dá)沉默后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移能力較對(duì)照組增強(qiáng)(p0.05);Transwell實(shí)驗(yàn)同時(shí)表明實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞侵襲能力較對(duì)照組增強(qiáng)(p0.05)。結(jié)論108例組織標(biāo)本中,生物鐘基因NPAS2在腸癌患者腫瘤組織中表達(dá)下調(diào),其表達(dá)下調(diào)與腫瘤的大小、TNM分期及腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明NPAS2的表達(dá)缺失可使腸癌細(xì)胞處于S期及G2/M分裂期,減少G0/G1停滯,促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。同時(shí),NPAS2的表達(dá)沉默增強(qiáng)腸癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力。但生物鐘基因NPAS2的紊亂表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的凋亡之間未見明顯相關(guān)。通過(guò)臨床及基礎(chǔ)相關(guān)研究,我們證實(shí)生物鐘基因NPAS2可能作為抑癌因子,參與了腸癌的發(fā)生發(fā)展。其可能作為腸癌的新的腫瘤治療靶點(diǎn)及評(píng)估腸癌預(yù)后的標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：生物鐘基因 NPAS2 結(jié)直腸癌
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料與方法11-18
• 結(jié)果18-27
• 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述生物鐘基因 NPAS2 與實(shí)體腫瘤的研究進(jìn)展36-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 縮略詞表45-46
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論著、論文46-48
• 致謝48-49

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本文編號(hào)：852299