本文關(guān)鍵詞：Ad-ING4-P53聯(lián)合順鉑對(duì)下咽癌FADU抑瘤增效作用的體內(nèi)研究

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【摘要】：目的下咽癌在耳鼻喉頭頸外科中,是較為常見的惡性腫瘤,約占0.8%-1.5%,因腫瘤細(xì)胞的分化水平不高,因而多以中、低分化鱗狀細(xì)胞癌為主,由于腫瘤生長(zhǎng)位置較深,不容易被發(fā)現(xiàn),初始表現(xiàn)不規(guī)范,約有50%病人第一次就診時(shí)就已經(jīng)有頸部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。當(dāng)今,下咽癌的治療主要是以手術(shù)加術(shù)后放化療為首選,但是下咽癌具有顯著的耐藥性和轉(zhuǎn)移特性,因此目前對(duì)下咽癌的預(yù)后很差�？v然最近幾年來對(duì)下咽癌的治療方法一直在改進(jìn),其5年生存率依舊較低。我們的實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)腺病毒(Ad)攜帶生長(zhǎng)抑制因子4(ING4)和抑癌基因P53的雙基因共表達(dá)(Ad-ING4-P53)聯(lián)合順鉑(Cisplatin,DDP)對(duì)人下咽癌FADU細(xì)胞株移植瘤發(fā)生發(fā)展和凋亡的作用,初步研究Ad-ING4-P53對(duì)下咽癌細(xì)胞DDP化療敏感性的影響及其作用機(jī)制,探討Ad-ING4-P53作為潛在加強(qiáng)對(duì)于抗腫瘤化療藥物敏感性的基因治療載體的可行性。方法:培養(yǎng)QBI-293A細(xì)胞,進(jìn)行重組基因的轉(zhuǎn)染,擴(kuò)增。在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)下咽癌FADU細(xì)胞,建立裸鼠人下咽癌FADU細(xì)胞系移植瘤模型。腫瘤長(zhǎng)出后達(dá)到一定體積時(shí),任意5只分一組,分別給予干預(yù),每次干預(yù)之前測(cè)量腫瘤體積,處死動(dòng)物后取出完整腫瘤組織并測(cè)其重量,最后按照腫瘤重量通過公式計(jì)算抑瘤率,觀察Ad-ING4-P53、DDP對(duì)裸鼠人下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤的抑瘤作用;應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織內(nèi)ING4、P53、Bax、Bcl-2的基因表達(dá)情況;用HE染色觀察腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡情況以及藥物對(duì)肝腎細(xì)胞的毒性作用;通過TUNEL法觀察移植瘤細(xì)胞中早期凋亡的情況;應(yīng)用免疫組化檢測(cè)ING4、P53以及凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2在腫瘤組織細(xì)胞中的表達(dá)情況。結(jié)果:通過用重組基因感染QBI-293A細(xì)胞,重組基因成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞,進(jìn)行擴(kuò)增。體內(nèi)瘤體生長(zhǎng)曲線顯示:Ad-ING4-P53+DDP對(duì)裸鼠人下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤具有非常顯著的抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用,并且優(yōu)于單獨(dú)DDP化療和單獨(dú)Ad-ING4-P53治療(P0.05),并且兩者具有抑瘤增效的協(xié)同作用(Q=1.19)。RT-PCR和免疫組化結(jié)果顯示:Ad-ING4-P53聯(lián)合DDP能顯著上調(diào)裸鼠人下咽癌細(xì)胞FADU移植瘤內(nèi)ING4、P53、Bax并下調(diào)Bcl-2的表達(dá),且較單獨(dú)DDP組和單獨(dú)Ad-ING4-P53組作用更加顯著(P0.05)。HE染色和TUNEL結(jié)果顯示:Ad-ING4-P53聯(lián)合DDP對(duì)裸鼠人下咽癌FADU移植瘤具有明顯的促凋亡作用,且較單獨(dú)組更加明顯(P0.05)。HE染色結(jié)果顯示:Ad-GFP組、單獨(dú)Ad-ING4-P53組和Ad-ING4-P53聯(lián)合DDP組對(duì)裸鼠肝臟有明顯毒性作用,對(duì)腎臟無(wú)明顯毒性作用。結(jié)論:1.Ad-ING4-P53能增強(qiáng)順鉑對(duì)下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤的殺傷作用。2.Ad-ING4-P53聯(lián)合順鉑能誘導(dǎo)下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤細(xì)胞的凋亡。凋亡可能與啟動(dòng)關(guān)鍵凋亡蛋白Bax并抑制Bcl-2有關(guān)。3.Ad-GFP組、Ad-ING4-P53組和Ad-ING4-P53組聯(lián)合順鉑組對(duì)裸鼠肝臟有明顯毒性作用,對(duì)腎臟無(wú)明顯毒性作用。
【關(guān)鍵詞】：下咽癌 基因治療 化療增敏
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 材料和方法12-23
• 1 材料與儀器12-14
• 2 實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 結(jié)果23-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 附錄41-53
• 附錄A 中英文對(duì)照41-42
• 附錄B 溶液配制42-44
• 附錄C 致謝44-45
• 附錄D 已發(fā)表論文45-46
• 附錄E 綜述46-53
• 參考文獻(xiàn)49-53

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本文編號(hào)：849987