本文關(guān)鍵詞：miR-4449在多發(fā)性骨髓瘤中的表達及生物學功能的研究

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【摘要】：目的通過檢測骨髓和血清標本mi R-4449表達水平,探討mi R-4449作為多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)血清輔助診斷標志物的臨床價值及與其它臨床指標的相關(guān)性,并進一步通過細胞水平實驗驗證mi R-4449的腫瘤細胞生物學行為,證實其在MM中的癌基因作用及相關(guān)臨床應用價值。方法用基因芯片法檢測4例MM病人和3例健康對照者的骨髓樣本中不同mi RNA的表達水平,將數(shù)據(jù)進行標準化后,對差異mi RNA進行聚類分析。用TRIzol Reagent法提取骨髓總RNA,用AMBION mir Vana PARIS Kit法提取血清總RNA,隨后采用特異莖環(huán)引物將內(nèi)參基因U6與目的基因mi R-4449分別逆轉(zhuǎn)錄,采用SYBR Green I q RT-PCR法檢測16例MM病人和5例健康對照者骨髓mi R-4449的表達量,同法檢測71例MM病人以及46例健康對照者血清mi R-4449的表達量,分析它們與其他臨床指標的相關(guān)性以及MM病人骨髓及血清標本mi R-4449相對表達量的相關(guān)性。將mi R-4449模擬物、抑制物以及各自陰性對照分別轉(zhuǎn)染入U266細胞,使用q RT-PCR檢測各組mi R-4449的表達水平,通過Transwell小室檢測各組細胞的遷移能力,WST-1法檢測各組細胞的增殖能力,FCM法檢測各組細胞的凋亡情況。結(jié)果芯片結(jié)果顯示,MM病人骨髓mi R-4449的相對表達量5.28±0.763顯著高于健康對照者2.47±1.27(P0.05)。用q RT-PCR法驗證發(fā)現(xiàn),MM病人骨髓mi R-4449的相對表達量2.140±1.423顯著高于健康對照者0.815±0.165(P0.05);其血清mi R-4449的相對表達量2.112±2.101也顯著高于健康對照者0.357±0.235(P0.05)。MM病人骨髓mi R-4449相對表達量與對應血清mi R-4449相對表達量呈正相關(guān)(r=0.833,P0.05)。將血清mi R-4449相對表達量與臨床相關(guān)指標進行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn),MM病人血清mi R-4449相對表達量與血清β2-M、輕鏈λ和輕鏈κ濃度呈正相關(guān)(r=0.48,P0.05;r=0.56,P0.05;r=0.56,P0.05)。血清mi R-4449相對表達量與輕鏈λ、輕鏈κ和β2-M聯(lián)合檢測能有效提高MM的診斷靈敏度。U266細胞轉(zhuǎn)染mi R-4449模擬物和抑制物后,模擬物組細胞增殖能力顯著高于抑制物組,細胞遷移數(shù)也顯著高于抑制物組(P0.05),細胞凋亡數(shù)則顯著低于抑制物組(P0.05)。結(jié)論Mi R-4449在MM病人骨髓和血清中均異常高表達,且兩者表達水平呈正相關(guān),其在MM中可能起著癌基因的作用,血清mi R-4449可成為MM輔助診斷的一個標志物。血清mi R-4449相對表達量與血清輕鏈λ、輕鏈κ和β2-M濃度呈正相關(guān),將四個指標聯(lián)合檢測能有效提高MM的診斷靈敏度。在體外抑制MM細胞內(nèi)mi R-4449的表達,可抑制MM細胞的增殖和遷移,并促進其凋亡,mi R-4449有機會成為MM靶向治療新靶點。
【關(guān)鍵詞】：mi R-4449 多發(fā)性骨髓瘤 血清
【學位授予單位】：南通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.3
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 緒論11-14
• 1.1 課題來源、研究目的和意義11-12
• 1.2 國內(nèi)外研究概況12-13
• 1.3 論文的主要研究內(nèi)容13-14
• 第二章 材料與方法14-24
• 2.1 研究資料及儀器設備14-15
• 2.1.1 研究對象14
• 2.1.2 主要設備與儀器14-15
• 2.1.3 實驗試劑15
• 2.2 實驗流程與方法15-24
• 2.2.1 血清標本采集及處理15
• 2.2.2 骨髓、細胞標本采集及處理15-16
• 2.2.3 血清總RNA提取16-17
• 2.2.4 骨髓、細胞總RNA提取17-18
• 2.2.5 基因芯片技術(shù)18
• 2.2.6 逆轉(zhuǎn)錄反應18-19
• 2.2.7 實時熒光定量PCR（q RT-PCR）19-20
• 2.2.8 臨床標本miR-4449 表達水平的檢測20
• 2.2.9 細胞培養(yǎng)技術(shù)20-21
• 2.2.9.1 細胞復蘇20-21
• 2.2.9.2 細胞培養(yǎng)21
• 2.2.9.3 細胞凍存21
• 2.2.10 細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)21-22
• 2.2.11 細胞增殖實驗（WST-1）22
• 2.2.12 細胞遷移實驗22-23
• 2.2.13 細胞凋亡檢測實驗23
• 2.2.14 統(tǒng)計學分析23-24
• 第三章 結(jié)果24-35
• 3.1 基因芯片篩查異常表達的miRNA24-25
• 3.2 實時熒光定量PCR檢測miR-4449 表達水平方法的建立25-26
• 3.3 miR-4449 的骨髓相對表達量檢測及檢測診斷價值26-27
• 3.3.1 MM病人血骨髓清miR-4449 相對表達量26-27
• 3.3.2 miR-4449 骨髓檢測診斷價值27
• 3.4 miR-4449 的血清相對表達量檢測及意義27-31
• 3.4.1 MM病人血清miR-4449 相對表達量27-28
• 3.4.2 miR-4449 血清檢測診斷價值28
• 3.4.3 MM病人的骨髓及血清標本miR-4449 相對表達量的相關(guān)性28
• 3.4.4 MM病人血清miR-4449 相對表達量與性別及臨床分型的關(guān)系28-29
• 3.4.5 MM病人血清miR-4449 相對表達量與臨床生化指標的相關(guān)性29-30
• 3.4.6 血清miR-4449 與輕鏈λ、輕鏈κ、β2-M的聯(lián)合檢測30-31
• 3.5 轉(zhuǎn)染效率直觀圖31-32
• 3.6 miR-4449 促進U266細胞增殖32-33
• 3.7 miR-4449 促進U266細胞遷移33-34
• 3.8 miR-4449 抑制U266細胞凋亡34-35
• 第四章 討論35-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-45
• 英文縮寫詞表45-46
• 綜述46-62
• 綜述參考文獻56-62
• 在攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文與參加的項目62-63
• 致謝63

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本文編號：849397