本文關(guān)鍵詞：EMMPRIN、ADAM17表達在肝外膽管癌中的預后價值

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【摘要】：研究背景肝外膽管癌是來源于肝外膽管上皮細胞的一種不常見但非罕見的惡性腫瘤,按解剖位置可分為遠端膽管癌和肝門部膽管癌。外科完全切除腫瘤(包括達到組織學切緣陰性)是肝外膽管癌患者獲得長期生存的唯一方法。然而,肝外膽管癌沿著膽管壁浸潤生長,使得長度有限的肝外膽管在手術(shù)時獲得組織學切緣陰性變得困難。盡管先前的研究讓肝膽外科醫(yī)師們意識到了多個臨床病理因素與肝外膽管癌的預后相關(guān),如腫瘤浸潤膽管壁的深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、切緣、組織學分化等,同時外科手術(shù)技術(shù)的發(fā)展使得根治性切除率增高,但術(shù)后長期生存率仍較低。近十年來文獻報道了接受外科手術(shù)切除治療的患者其術(shù)后5年生存率僅為30%左右。因此,對肝外膽管癌新的分子病理探索則顯得尤為重要。眾所周知,腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個復雜多步的信號調(diào)節(jié)過程,涉及細胞外基質(zhì)的降解重塑、細胞信號調(diào)節(jié)活動、血管生成等。而腫瘤細胞外基質(zhì)降解重塑是腫瘤侵襲性增加以及轉(zhuǎn)移中關(guān)鍵步驟,包括MMPs家族的成員、組織蛋白酶和纖維蛋白溶酶等多種蛋白水解酶參與了這一過程；同時,細胞外基質(zhì)蛋白降解重塑這一過程亦是惡性腫瘤微環(huán)境形成的始發(fā)事件。而細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的合成則主要受細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導劑(EMMPRIN/CD147)的調(diào)控。EMMPRIN的高表達是許多惡性腫瘤術(shù)后預后不良因素,包括肝內(nèi)膽管癌、腎細胞癌、結(jié)直腸癌、骨肉瘤、肝細胞癌等。Zhao等人通過siRNA技術(shù)沉默卵巢癌細胞系中EMMPRIN的表達后,觀察到其survivin, VEGF, Wnt5a, Akt, p70s6k, Bcl-xL and MMP-9在mRNA以及蛋白水平表達均下降,從而導致卵巢癌細胞出現(xiàn)較低生長、G1期阻滯、誘導凋亡、遷移及侵襲能力下降,提示EMMPRIN可能通過調(diào)節(jié)細胞周期、細胞增殖、細胞凋亡以及增加侵襲性來參與卵巢癌的發(fā)生、分化以及進展。ADAMs(去整合素-金屬蛋白酶)蛋白家族屬于膜錨定金屬蛋白酶,參與多種膜相關(guān)蛋白的蛋白水解脫落,在多種信號通路快速調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用。在腫瘤微環(huán)境中,ADAMs起著信號剪刀作用,參與已知7種EGFR(表皮生長因子受體)配體中的6種配體脫落(TGFa, amphiregulin, HB-EGF, epiregulin, EGF, betacellulin),從而調(diào)節(jié)腫瘤中表皮生長因子受體的活性。表皮生長因子受體激活是多種惡性腫瘤發(fā)生和進展的關(guān)鍵,已有文獻報道,肝外膽管癌中EGFR表達陽性的患者預后明顯差于陰性表達者。ADAM17(即TNF-a轉(zhuǎn)化酶)作為ADAMs蛋白家族成員中一員,在調(diào)節(jié)EGFR (Epidermal growth factor receptor)活性中起關(guān)鍵作用。已有實驗證實ADAM17可通過多種信號通路來調(diào)節(jié)腫瘤的生物學特性。例如,ADAM17通過EGFR-MEK-ERK、EGFR/PI3K/AKT這兩條信號通路來調(diào)節(jié)前列腺癌細胞系的侵襲和增殖,通過Notchl的激活可使非小細胞肺癌中表皮生長因子受體(EGFR)的表達上調(diào)。同時,越來越多的證據(jù)表明ADAM17的高表達與人類多種腫瘤差的預后相關(guān)。另外,最近的研究報道認為可能存在著ADAM17-EGFR-EMMPRIN軸來調(diào)節(jié)腫瘤的生物學特性。然而,在肝外膽管癌研究領(lǐng)域中,尚未見EMMPRIN和ADAM17相關(guān)文獻報道。本實驗將分兩部分圍繞EMMPRIN、ADAM17在肝外膽管癌中的表達情況和預后做初步研究,為將來肝外膽管癌后續(xù)細胞分子研究提供前期理論依據(jù)。第一部分肝外膽管癌中EMMPRIN、ADAM17表達情況及其與臨床病理特征之間的關(guān)系目的觀察EMMPRIN和ADAM17在肝外膽管癌中表達情況；探討EMMPRIN和ADAM17的表達與肝外膽管癌臨床病理特征之間的聯(lián)系；評估EMMPRIN和ADAM17的表達在肝外膽管癌中的相關(guān)性。方法從海軍總醫(yī)院肝膽外科病例數(shù)據(jù)庫中選出2003年3月至2013年12月間78例接受外科手術(shù)切除肝外膽管癌患者的臨床病例資料和病理標本。入選病例術(shù)后病理診斷為膽管細胞癌明確,無惡性腫瘤病史以及術(shù)前沒有行放化療等抗癌治療。另外,再收集20例肝外膽管癌相應(yīng)的癌旁組織用作正常對照。通過免疫組化染色方法,檢測EMMPRIN和ADAM17在肝外膽管癌中的表達情況�？ǚ綑z驗用于比較EMMPRIN、ADAM17表達與多個臨床病理特征之間的關(guān)系；使用Spearman's法分析EMMPRIN和ADAM17在肝外膽管癌中表達的相關(guān)性。結(jié)果EMMPRIN和ADAM17蛋白在腫瘤組織和癌旁組織中主要定位于細胞膜和細胞質(zhì)。在78例肝外膽管癌組織中,免疫組化染色發(fā)現(xiàn)46(占59.0%)例病人癌組織中EMMPRIN呈高表達,41(占52.6%)例患者癌組織中ADAM17蛋白呈高表達；EMMPRIN、ADAM17蛋白在20例癌旁組織中呈低表達或陰性表達；癌組織和癌旁組織中EMMPRIN、ADAM17蛋白表達的差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。EMMPRIN蛋白的高表達與病人的臨床病理參數(shù)如年齡(65歲,P=0.023)、組織學分化(低,P=0.010)、T分期(T3和T4,P=0.001),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(陽性,P=0.044)和血管侵犯(陽性,P=0.010)顯著相關(guān),但與性別、腫瘤位置、腫瘤大小、術(shù)前CA19-9水平和神經(jīng)侵犯不相關(guān)。ADAM17蛋白的高表達與病人臨床病理參數(shù)如腫瘤大小(腫瘤≥3cm,P=0.047)、T分期(T3和T4,P=0.007),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(陽性,P0.001)和血管侵犯(陽性,P=0.018)顯著相關(guān),但與性別、年齡、腫瘤位置、術(shù)前CA19-9水平、組織學分化和神經(jīng)侵犯不相關(guān)。EMMPRIN和ADAM17在肝外膽管癌中表達存在顯著相關(guān)性(r=0.356,P=0.001)。結(jié)論肝外膽管癌中EMMPRIN和ADAM17蛋白主要定位于細胞膜和細胞質(zhì)；其過度表達可能參加了肝外膽管癌的侵襲和進展；且在肝外膽管癌中兩者的表達存在相關(guān)性。第二部分肝外膽管癌中EMMPRIN、ADAM17過度表達對患者預后的影響目的探討EMMPRIN和ADAM17過表達與肝外膽管癌患者預后的關(guān)系。方法入選病例隨訪終點為2014年4月。以手術(shù)日期為起點計算病人術(shù)后腫瘤復發(fā)時間和死亡時間。Kaplane-Meier法繪制各組腫瘤復發(fā)和總體生存曲線圖,與預后可能相關(guān)的單因素組間比較使用log-rank法檢驗；將P值0.05的單因素變量選入Cox逐步回歸模型中進行多因素分析。結(jié)果78例肝外膽管癌病人術(shù)后3年和5年總體生存率分別為32.5%和23.2%。單因素分析顯示肝外膽管癌病人EMMPRIN和ADAM17蛋白高表達與病人術(shù)后差的預后顯著相關(guān)(EMMPRIN:3年生存率18.4%VS 50.2%,5年生存率18.4%VS 31.3%,P=0.017；ADAM173年生存率18.1%VS 44.6%,5年生存率18.1%VS 30.0%,P=0.006)。此外,腫瘤位置(肝門部,P=0.016)、腫瘤大小(大小≥3cm,P=0.002)、組織學分化(低分化,P=0.012)、T分期(T3和T4,P=0.028)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(陽性,P=0.004)、切緣(R1和R2,P0.001)、神經(jīng)侵犯(陽性,P=0.048)和血管侵犯(陽性,P=0.001)與術(shù)后差的預后相關(guān)。COX多因素分析顯示EMMPRIN、ADAM17高表達是肝外膽管癌病人術(shù)后總體生存預后不良的獨立危險因素(EMMPRINHR 2.729,95% CI 1.234-6.035, P=0.013；ADAM17:HR 2.050,95%CI 1.037-4.051,P=0.039)；另外,切緣(R1和R2,P0.001)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(陽性,P=0.035)同樣是肝外膽管癌病人術(shù)后總體生存預后不良的獨立危險因素。49例肝外膽管癌根治性切除病人術(shù)后3年、5年無瘤生存率分別為37.5%、30.0%,總體生存率分別為45.2%、32.3%。單因素分析顯示肝外膽管癌EMMPRIN蛋白高表達與病人根治性切除術(shù)后總體生存時間顯著相關(guān),而與無瘤生存時間不相關(guān)(3年總體生存26.2%VS 71.4%,5年總體生存26.2%VS44.5%,P=0.036;3年無瘤生存29.3%VS 50.0%,5年無瘤生存29.3%VS33.3%,P=0.108)。ADAM17蛋白高表達與無瘤生存和總體生存呈負相關(guān)(3年無瘤生存：25.4% VS 50.0%,5年無瘤生存：0%VS 50.0%；P=0.006。3年總體生存：24.5%VS 63.6%,5年總體生存：24.5%VS 42.8%；P=0.003)。此外,腫瘤大小(≥3cm,P=0.009)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(陽性,P=0.002)與肝外膽管癌病人根治性切除術(shù)后差的無瘤生存時間相關(guān)；而腫瘤大小(≥3cm,P=0.013)、組織學分化(差,P=0.030)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(陽性,P=0.003)與肝外膽管癌病人根治性切除術(shù)后差的總體生存時間相關(guān)。COX多因素分析顯示ADAM17高表達是肝外膽管癌病人根治性切除術(shù)后無瘤生存和總體生存預后不良的獨立危險因素(無瘤生存：HR 2.635,95%CI 1.186-5.856,P=0.017；總體生存：HR 2.629,95%CI 1.071-6.452,P=0.035).另外,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移亦是肝外膽管癌病人根治性切除術(shù)后無瘤生存和總體生存預后不良的獨立危險因素。結(jié)論EMMPRIN和ADAM17的高表達與肝外膽管癌病人術(shù)后差的預后相關(guān)；且ADAM17是肝外膽管癌病人根治性切除術(shù)后總體生存的獨立預后因素,亦是其腫瘤復發(fā)的分子標記物。
【關(guān)鍵詞】：肝外膽管癌 EMMPRIN ADAM17 臨床病理參數(shù) 侵襲 相關(guān)性 肝外膽管癌 EMMPRIN ADAM17 預后
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.8
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-16
• 第一章 前言16-25
• 參考文獻20-25
• 第二章 肝外膽管癌中EMMPRIN、ADAM17表達情況及其與臨床病理特征之間的關(guān)系25-50
• 一、引言25-26
• 二、材料和方法26-31
• 三、實驗結(jié)果31
• 四、討論31
• 五、小結(jié)31-45
• 參考文獻45-50
• 第三章 肝外膽管癌中EMMPRIN、ADAM17異常表達對患者預后的影響50-66
• 一、引言50-51
• 二、材料和方法51-52
• 三、實驗結(jié)果52-60
• 四、討論60-62
• 五、小結(jié)62
• 參考文獻62-66
• 全文總結(jié)66-67
• 附綜 述膽管癌的生物學特性、臨床治療和藥理學進展67-86
• 參考文獻77-86
• 中英文縮略詞一覽表86-87
• 碩士研究生期間發(fā)表論文情況87-88
• 致謝88-89

【共引文獻】

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本文編號：834566