本文關(guān)鍵詞：肌醇六磷酸與肌醇合用對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用的研究

  更多相關(guān)文章： 肌醇六磷酸 肌醇 癌細(xì)胞 裸鼠 合用

【摘要】：目的:通過細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)和建立裸鼠移植瘤動(dòng)物模型,觀察肌醇六磷酸(IP6)和肌醇(Ins)合用對(duì)多種癌細(xì)胞增殖的抑制效果及對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用,探討IP6與Ins合用能否增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。方法:取培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌細(xì)胞Hep G2、人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29、人胃癌細(xì)胞7901、人乳癌細(xì)胞MCF-7和人肺癌細(xì)胞A549,接種于96孔板中,分別加入0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L的IP6、Ins及IP6+Ins(1:1,V/V)混合液,另設(shè)對(duì)照組(不加藥物)。應(yīng)用四基偶氮噻唑藍(lán)實(shí)驗(yàn)(MTT法)測(cè)定不同濃度的IP6和Ins合用作用不同癌細(xì)胞48h的抑制率,計(jì)算IP6和Ins合用作用于不同癌細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50;根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取兩種對(duì)IP6和Ins合用更為敏感的癌細(xì)胞,將IP6和Ins以不同比例(9:1、3:1、1:1、1:3、1:9,V/V)作用于兩種癌細(xì)胞,計(jì)算抑制率。根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取對(duì)IP6和Ins合用最敏感的癌細(xì)胞,培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后,在無菌條件下,于裸鼠右前肢的背部采用皮下注射細(xì)胞懸液0.2 ml(含2×106個(gè)細(xì)胞),建立裸鼠人移植瘤模型。待接種小鼠均出現(xiàn)明顯結(jié)節(jié),其徑長(zhǎng)均大于5mm時(shí),按移植瘤體積隨機(jī)分為4組,每組10只,即IP6組、Ins組、IP6+Ins組、生理鹽水組。IP6組、Ins組、IP6+Ins組的藥物濃度均為15mmol/kg,IP6和Ins以(1:1,V/V)合用,陰性對(duì)照組每日0.1ml/10g生理鹽水,藥物注射采用腹腔注射。每天稱重一次。20天后將所有裸鼠處死,取實(shí)驗(yàn)相關(guān)的腫瘤、肝、腎、血液等樣本。經(jīng)HE染色后,使用光學(xué)顯微鏡觀察腫瘤組織的病理學(xué)變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)法測(cè)定PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白的表達(dá);應(yīng)用Rt-PCR法測(cè)定Rbm RNA、E2F-1m RNA的表達(dá)。結(jié)果:不同濃度的IP6與Ins合用對(duì)5種癌細(xì)胞均能產(chǎn)生顯著的抑制作用(F=8.253~15.292,t=6.871~8.537,P0.05)。對(duì)Hep G2、HT-29、7901、MCF-7、A549細(xì)胞的最高抑制率分別為68.82%、63.63%、37.07%、39.73%、39.26%;不同濃度的IP6和Ins合用沒有顯著提高對(duì)HT-29、7901、MCF-7、A549細(xì)胞的抑制作用(F=1.195~2.408,t=0.978~2.133,P0.05),但在4mmol/L時(shí),合用組對(duì)Hep G2細(xì)胞抑制效果顯著高于IP6組和Ins組(t=7.462,P0.05)。IP6和Ins合用作用于5種癌細(xì)胞時(shí),Hep G2和HT-29細(xì)胞的IC50值最低,但I(xiàn)P6和Ins合用未能顯著降低各癌細(xì)胞的IC50值。將IP6和Ins以不同比例合用發(fā)現(xiàn),IP6和Ins合用的比例對(duì)Hep G2和HT-29細(xì)胞的抑制效果沒有影響。通過實(shí)驗(yàn)前后測(cè)量各組裸鼠體重的變化發(fā)現(xiàn),腹腔注射IP6、Ins及兩種藥物的混合液對(duì)裸鼠的體重變化沒有影響。裸鼠處死后,無菌剝?nèi)∧[瘤并對(duì)腫瘤進(jìn)行稱重和測(cè)量體積,發(fā)現(xiàn)各實(shí)驗(yàn)組的腫瘤均小于對(duì)照組,其中IP6與Ins合用組腫瘤最小,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HE染色后鏡下觀察發(fā)現(xiàn),各組均出現(xiàn)不同程度的腫瘤形態(tài)學(xué)特征,如細(xì)胞大小不一,形狀不規(guī)則等。免疫組化結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,各實(shí)驗(yàn)組PCNA蛋白的表達(dá)呈不同程度的降低,IP6與Ins的合用組表達(dá)水平最低,但差異無顯著性(P0.05)。與對(duì)照組比較,IP6組、Ins組、合用組能顯著降低Cyclin D1、CDK4蛋白的表達(dá)(P0.05);與IP6組、Ins組比較,合用組能顯著降低CDK4蛋白表達(dá)水平,對(duì)Cyclin D1蛋白表達(dá)的抑制無顯著增強(qiáng)作用。Rt-PCR結(jié)果顯示,IP6組、Ins組及合用組的Rb m RNA的表達(dá)水平相比對(duì)照組明顯升高(P0.05),IP6、兩者合用對(duì)E2F-1 m RNA的表達(dá)水平?jīng)]有影響,Ins組E2F-1 m RNA的表達(dá)相比對(duì)照組有所下降(P0.05);與IP6組、Ins組比較,合用組對(duì)Rb m RNA、E2F-1 m RNA的表達(dá)沒有影響(P0.05)。結(jié)論:IP6和Ins合用對(duì)五種癌細(xì)胞的增殖均有顯著抑制作用,與IP6、Ins單獨(dú)作用比較,IP6與Ins合用沒有顯著提高對(duì)HT-29、7901、MCF-7、A549癌細(xì)胞增殖的抑制效果,但I(xiàn)P6和Ins以4m M合用能夠提高對(duì)Hep G2細(xì)胞的抑制效果。IP6和Ins的混合比例對(duì)五種癌細(xì)胞的增殖抑制作用沒有顯著影響。IP6與Ins合用沒有顯著增強(qiáng)對(duì)裸鼠移植瘤的抑制作用,但與對(duì)照組比較,IP6與Ins合用能顯著下調(diào)Cyclin D1和CDK4蛋白的表達(dá)、上調(diào)Rbm RNA的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：肌醇六磷酸 肌醇 癌細(xì)胞 裸鼠 合用
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-36
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-8
• 第一章 肌醇六磷酸與肌醇合用對(duì)不同癌細(xì)胞增殖活性的影響8-15
• 1 材料與方法8-10
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞8
• 1.2 主要試劑8
• 1.3 主要儀器8
• 1.4 IP6、Ins溶液的配制及腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)8-9
• 1.5 細(xì)胞分組和處理9
• 1.6 MTT 試驗(yàn)檢測(cè) IP6、Ins 及兩者合用對(duì)不同癌細(xì)胞的抑制作用9
• 1.7 數(shù)據(jù)處理9-10
• 2 結(jié)果10-14
• 2.1 IP6與Ins合用對(duì)多種癌細(xì)胞的抑制作用10-12
• 2.2 IP6、Ins及兩者合用對(duì)不同癌細(xì)胞IC50的比較12
• 2.3 IP6和Ins以不同比例合用對(duì)Hep G2和HT-29 細(xì)胞的抑制作用12-14
• 3 討論14-15
• 第二章 肌醇六磷酸和肌醇合用對(duì)裸鼠人肝癌移植瘤增殖的影響15-30
• 1 材料與方法15-21
• 1.1 材料15-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)裸鼠15-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16
• 1.3 測(cè)定指標(biāo)和方法16-20
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20-21
• 2 結(jié)果21-27
• 2.1 裸鼠的一般狀況觀察21
• 2.2 IP6、Ins及兩者合用對(duì)裸鼠人肝癌移植瘤生長(zhǎng)的影響21-22
• 2.3 裸鼠人肝癌移植瘤的病理檢查22-23
• 2.4 裸鼠人肝癌移植瘤PCNA蛋白的表達(dá)23-24
• 2.5 裸鼠人肝癌移植瘤Cyclin D1蛋白的表達(dá)24-25
• 2.6 裸鼠人肝癌移植瘤CDK4蛋白的表達(dá)25-26
• 2.7 裸鼠移植瘤Rb、E2F-1 m RNA的表達(dá)26-27
• 3 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 綜述34-42
• 綜述參考文獻(xiàn)40-42
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果42-43
• 致謝43-44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：832690