本文關(guān)鍵詞：PRMT2過表達對乳腺癌細胞增殖的影響

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【摘要】：目的:探討蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)過表達對乳腺癌MCF7及MDA-MB-231細胞增殖的影響,并初步探討其調(diào)控細胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)的分子機制。方法:將真核表達載體pc DNA3.1/pc DNA3.1-PRMT2瞬時轉(zhuǎn)染至MDA-MB-231細胞,蛋白免疫印跡(Western Blot)檢測CCND1蛋白的表達;構(gòu)建PRMT2慢病毒載體,并在293T細胞內(nèi)進行包裝及病毒滴度測定后檢測其表達能力;建立MCF7及MDA-MB-231穩(wěn)定細胞株,顯微鏡觀察四環(huán)素誘導(dǎo)前后細胞的變化,并通過MTT及克隆形成實驗檢測PRMT2過表達對乳腺癌細胞增殖的影響;Western Blot檢測通路相關(guān)蛋白的表達,初步探討PRMT2過表達影響乳腺癌細胞增殖的分子機制。結(jié)果:1.Western Blot結(jié)果顯示PRMT2瞬時過表達明顯下調(diào)CCND1的表達(p0.05);2.成功構(gòu)建了PRMT2 Tet-on慢病毒表達載體經(jīng)測序及鑒定與基因序列完全一致,293T細胞內(nèi)包裝后獲得病毒滴度為2.0×108 TU/ml,經(jīng)四環(huán)素誘導(dǎo)后Western Blot檢測到PRMT2-3Flag蛋白的表達;3.成功建立MCF7-PRMT2及MDA-MB-231-PRMT2穩(wěn)定細胞株,經(jīng)四環(huán)素誘導(dǎo)后Western Blot分別檢測到PRMT2-3Flag蛋白的表達;4.MTT檢測顯示:四環(huán)素誘導(dǎo)組乳腺癌細胞增殖趨勢明顯減慢(p0.05);5.克隆形成實驗顯示:四環(huán)素誘導(dǎo)組乳腺癌細胞增殖能力明顯降低(p0.05);6.Western Blot檢測顯示:PRMT2蛋白表達上調(diào)后p-Akt、p-GSK-3β、CCND1蛋白表達減少。結(jié)論:1.PRMT2過表達后抑制乳腺癌細胞的增殖。2.PRMT2抑制乳腺癌細胞增殖的機制可能與其調(diào)控p-Akt、p-GSK-3β及CCND1的表達相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2(PRMT2) 人乳腺癌細胞 增殖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略詞表11-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 實驗材料14-19
• 2.1 質(zhì)粒、載體、細菌和細胞株14
• 2.2 培養(yǎng)基與血清14
• 2.3 主要藥品和試劑14-15
• 2.4 主要試劑配置15-17
• 2.5 主要儀器和設(shè)備17-19
• 第3章 實驗方法19-29
• 3.1 細胞培養(yǎng)及處理19-20
• 3.2 Western Blot檢測相關(guān)蛋白的表達20-22
• 3.3 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）22
• 3.4 PRMT2慢病毒載體構(gòu)建22-25
• 3.5 慢病毒包裝及滴度測定25-26
• 3.6 慢病毒感染 293T細胞26-27
• 3.7 293T細胞內(nèi)目的蛋白表達的檢測27
• 3.8 MCF7、MDA-MB-231單克隆穩(wěn)定細胞株的建立與鑒定27
• 3.9 MTT(黃色噻唑蘭)實驗27-28
• 3.10 細胞克隆形成實驗28
• 3.11 數(shù)據(jù)分析28-29
• 第4章 實驗結(jié)果29-36
• 4.1 PRMT2瞬時過表達抑制乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖29
• 4.2 PRMT2慢病毒載體構(gòu)建及鑒定29-30
• 4.3 PRMT2慢病毒載體的包裝及病毒滴度測定30-31
• 4.4 PRMT2慢病毒載體能在293T細胞內(nèi)表達31-32
• 4.5 MCF7、MDA-MB-231單克隆穩(wěn)定細胞株的建立與鑒定----244.6 MTT檢測結(jié)果32-33
• 4.6 MTT 實驗33-34
• 4.7 克隆形成實驗結(jié)果34-35
• 4.8 PRMT2過表達對相關(guān)蛋白表達的影響35-36
• 第5章 討論36-39
• 第6章 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-44
• 綜述44-53
• 參考文獻49-53
• 碩士期間發(fā)表的論文53-54
• 致謝54-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王煥春;張海靜;胡成進;;MiRNA在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用[J];生命的化學(xué);2012年03期

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本文編號：823664