本文關(guān)鍵詞：基于腫瘤多藥耐藥機(jī)制構(gòu)建多孔微球和苯硼酸靶向型小核酸遞釋體系的研究

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【摘要】：腫瘤多藥耐藥現(xiàn)象是腫瘤臨床治療中的主要屏障,會(huì)造成腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生交叉耐藥。多藥耐藥現(xiàn)象的機(jī)制十分復(fù)雜,主要是藥物外排泵蛋白和抗凋亡蛋白在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的過(guò)表達(dá)所導(dǎo)致的。小核酸類藥物,如si RNA和mi RNA能夠有效針對(duì)胞內(nèi)某種蛋白的表達(dá)進(jìn)行靶向沉默,故而成為逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的理想工具。以多藥耐藥現(xiàn)象的分子機(jī)制為指導(dǎo),設(shè)計(jì)構(gòu)建高效的小核酸遞釋體系成為一項(xiàng)極具潛力的探索性研究�；谏鲜隹紤],本論文首先以雙功能PEG作為交聯(lián)劑,將苯硼酸靶向基團(tuán)連接到樹(shù)枝狀高分子材料PAMAM表面,設(shè)計(jì)構(gòu)建了一種對(duì)腫瘤細(xì)胞具有特異性靶向功能的小核酸藥物載體PPP。該載體具有良好的si RNA結(jié)合和保護(hù)能力,能夠抵抗RNA酶和血清對(duì)si RNA分子的降解并有效促進(jìn)Bcl-2 si RNA的胞吞進(jìn)而提升轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)對(duì)Bcl-2基因表達(dá)的高效沉默,該遞釋體系顯著提升了Hep G2細(xì)胞對(duì)阿霉素的藥物敏感度,抑制了多藥耐藥現(xiàn)象的發(fā)生,最終介導(dǎo)了細(xì)胞凋亡從而實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的有效抑制。隨后,為了提高化療藥物的生物利用度,我們以PLGA為材料,使用碳酸氫銨作為造孔劑,針對(duì)給藥困難的肺部腫瘤設(shè)計(jì)構(gòu)建了可吸入式化療藥物與小核酸共載的多孔空心微球遞釋體系。該多孔空心PLGA微球展現(xiàn)了對(duì)阿霉素和mi R-519c良好的包載率和穩(wěn)定的緩釋作用。通過(guò)增殖抑制、細(xì)胞凋亡和周期阻滯等細(xì)胞生物學(xué)水平的檢測(cè),共載微球釋放液對(duì)肺癌細(xì)胞A549具有顯著的增殖抑制和殺傷效果,并展示了良好的藥物與基因協(xié)同作用效果。胞內(nèi)阿霉素濃度的檢測(cè)顯示,mi R-519c的引入能夠有效抑制ABCG2對(duì)阿霉素的外排作用,提高胞內(nèi)阿霉素的濃度,抑制多藥耐藥現(xiàn)象的產(chǎn)生。綜上,以腫瘤多藥耐藥機(jī)制為指導(dǎo)的小核酸遞釋體系能夠有效實(shí)現(xiàn)藥物與基因的遞送,通過(guò)抑制多藥耐藥現(xiàn)象的發(fā)生極大地提高了對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制和殺傷效果。以上研究,為構(gòu)建針對(duì)腫瘤多藥耐藥的藥物與基因遞釋體系提供了新的策略和方法,證明了藥物與基因遞釋體系在腫瘤治療領(lǐng)域的巨大潛力,為未來(lái)的臨床應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：多藥耐藥 小核酸 基因治療 靶向遞送 共遞送
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 緒論12-32
• 1.1 腫瘤耐藥機(jī)制的形成及相關(guān)關(guān)鍵基因13-21
• 1.1.1 腫瘤耐藥機(jī)制的形成13-15
• 1.1.2 腫瘤耐藥機(jī)制相關(guān)關(guān)鍵基因15-21
• 1.2 遞釋體系在逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥中的應(yīng)用21-25
• 1.2.1 MDR蛋白抑制劑的遞釋體系22-23
• 1.2.2 靶向MDR蛋白的小核酸藥物遞釋體系23-24
• 1.2.3 調(diào)控藥物攝取途徑的納米粒子遞釋體系24-25
• 1.3 藥物與基因的協(xié)同作用及共遞送體系25-30
• 1.3.1 脂質(zhì)材料共遞送體系26-27
• 1.3.2 樹(shù)枝狀高分子材料共遞送體系27-29
• 1.3.3 聚合物材料共遞送體系29-30
• 1.4 本課題研究思路30-32
• 第二章 苯硼酸靶向型PAMAM遞送體系介導(dǎo)Bcl-2 siRNA與阿霉素共給藥抑制腫瘤細(xì)胞增殖的研究32-57
• 2.1 引言32-33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料33-35
• 2.2.1 細(xì)胞株33
• 2.2.2 小干擾RNA（siRNA）33
• 2.2.3 主要試劑33-34
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)器材34
• 2.2.5 主要溶液的配制34-35
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法35-41
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)35-36
• 2.3.2 苯硼酸修飾PAMAM的合成與表征36-37
• 2.3.3 ICP-MS硼元素檢測(cè)37
• 2.3.4 凝膠電泳分析37
• 2.3.5 細(xì)胞毒性分析37-38
• 2.3.6 流式細(xì)胞術(shù)分析38
• 2.3.7 激光共聚焦顯微鏡分析38
• 2.3.8 唾液酸抗原表達(dá)水平檢測(cè)38
• 2.3.9 反轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）和反轉(zhuǎn)錄定量 PCR（q RT-PCR）38-39
• 2.3.10 蛋白質(zhì)印記檢測(cè)39-40
• 2.3.11 Bcl-2 siRNA轉(zhuǎn)染抑制腫瘤細(xì)胞增殖40
• 2.3.12 Bcl-2 siRNA轉(zhuǎn)染介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡40
• 2.3.13 Live/Dead細(xì)胞染色40
• 2.3.14 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析40-41
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論41-55
• 2.4.1 PPP載體的合成與表征41-46
• 2.4.2 PPP/siRNA納米粒子的胞吞行為研究46-51
• 2.4.3 PPP/siRNA納米粒子靶向沉默Bcl-2 基因51-52
• 2.4.4 PPP/siRNA納米粒子抑制腫瘤細(xì)胞增殖52-55
• 2.5 本章小結(jié)55-57
• 第三章 可吸入式多孔空心PLGA微球藥物與基因共遞送體系的構(gòu)建與評(píng)價(jià)57-79
• 3.1 引言57-58
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料58-59
• 3.2.1 質(zhì)粒與細(xì)胞株58
• 3.2.2 主要試劑58-59
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器59
• 3.2.4 主要試劑的配制59
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法59-64
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)59
• 3.3.2 pcDNA-miR-519c質(zhì)粒提取59
• 3.3.3 多孔空心PLGA微球的制備59-60
• 3.3.4 多孔空心PLGA微球的表征60
• 3.3.5 多孔空心PLGA微球的載藥量和包封率測(cè)定60-61
• 3.3.6 微球體外藥物釋放61
• 3.3.7 微球釋放液抑制腫瘤細(xì)胞增殖61-62
• 3.3.8 微球釋放液誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡62
• 3.3.9 微球釋放液誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期阻滯62-63
• 3.3.10 微球釋放液誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)量變化63
• 3.3.11 微球釋放液誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞Caspase家族蛋白活性變化63
• 3.3.12 微球釋放液促進(jìn)阿霉素在腫瘤細(xì)胞中的富集63-64
• 3.3.13 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析64
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論64-78
• 3.4.1 多孔空心PLGA微球的制備與表征64-69
• 3.4.2 微球釋放液抑制腫瘤細(xì)胞增殖69-71
• 3.4.3 微球釋放液誘導(dǎo)A549細(xì)胞周期阻滯及凋亡71-74
• 3.4.4 微球釋放液抑制A549細(xì)胞的分子機(jī)制研究74-75
• 3.4.5 藥物與基因共遞送體系影響阿霉素的胞內(nèi)富集75-78
• 3.5 本章小結(jié)78-79
• 全文總結(jié)79-81
• 參考文獻(xiàn)81-91
• 碩士期間的科研成果與獎(jiǎng)勵(lì)91-93
• 致謝93

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